固定化酶技術在中藥酶抑制劑篩選中的研究現狀

安 瓊，李國峰，郎一帆，楊武亮，陳春蘭，張武崗，陳海芳*

固定化酶技術在中藥酶抑制劑篩選中的研究現狀

安 瓊1，李國峰1，郎一帆1，楊武亮1，陳春蘭1，張武崗2*，陳海芳1*

1.江西中醫藥大學現代中藥制劑教育部重點實驗室，江西 南昌 330004 2.江西中醫藥大學中藥固體制劑制造技術國家工程研究中心，江西 南昌 330004

固定化酶技術是利用物理或化學方法將游離酶固定在相應的載體上用于篩選酶抑制劑的方法，該方法選擇性高、穩定性好。基于疾病相關靶點—生物酶，采用固定化酶技術從中藥中篩選疾病相關酶抑制劑，有望成為中藥新藥研發的重要手段。以固定化酶應用的載體材料為分類綜述了近十年來固定化酶技術用于篩選中藥中酶抑制劑的研究現狀，以期為后續的相關研究提供理論基礎。

固定化酶；生物酶；中藥；載體材料；篩選；酶抑制劑

中藥資源豐富，歷史悠久，在預防與治療疾病中扮演著重要的角色。然而，中藥的化學成分多種多樣，作用機制更是復雜多樣，如何從中藥中篩選疾病相關藥效物質是當前亟待解決的關鍵問題。大量研究表明，人體許多疾病過程都與體內生物酶調節作用相關，如痛風[1]、阿爾茨海默癥[2]、糖尿病[3-5]等。而且，中藥在治療各種疾病中也扮演著重要角色，如白芷提取物能促進新生血管形成與成熟，從而提高自發2型糖尿病小鼠創面愈合速率和質量[6]；絞股藍葉水提物能夠降低鏈脲佐菌素誘導的糖尿病大鼠的血糖，其作用機制可能與增加骨骼肌肌膜葡萄糖轉運體4蛋白表達和抑制骨骼肌炎癥有關[7]。因此，基于酶在疾病發生發展的重要性，以酶為靶點從中藥中篩選新藥是一有力途徑，而且開發一種快速、高效的酶抑制劑篩選方法是當前首要任務。

固定化酶技術是20世紀60年代發展起來的，該技術利用物理或化學方法將游離酶固定在相應的載體上用于篩選酶抑制劑。固定化酶技術可以有效提高酶的催化性能和操作穩定性，并降低成本，是目前廣泛使用的技術[8]。此外，相比于游離酶，固定酶更有利于酶-配合物的分離純化，在pH耐受性，底物選擇性，熱穩定性和可回收性等方面表現出優越的性能[9-10]。不同的酶發揮催化作用的活性部位不同，將酶進行固定時，要使載體材料與酶的非活性部位結合，才可以保留酶的活性，因此載體材料的選擇是固定化酶技術發揮作用的關鍵。本文以固定載體材料（表1）為分類綜述了近10年固定化酶技術在中藥酶抑制劑[α-葡萄糖苷酶（α-glucosidase，α-Glu）、脂肪酶等] 篩選中的研究現狀，希望可以為后續的相關研究提供一定的參考依據。

表1 固定化載體材料

GA-戊二醛 PDA-聚多巴胺 EDC-1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基羰基二胺甲碘

GA-glutaric dialdehyde PDA-polydopamine EDC-1-(3- dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide

1 磁性載體

磁性載體材料是利用鐵、錳、鈷及其氧化物等化合物制備的一類具有磁性的材料[11]，通過改變磁力大小和外部磁場的方向來改變粒子的運動軌跡，從而使酶與載體的結合與分離可以在可控條件下完成，便于固定化酶的分離和收集，并用于酶抑制劑的篩選[12]。以磁性載體為材料的固定化酶技術的最大優點在于利用磁力吸引可使固定化酶快速從反應體系中分離，且固定化方法簡單，能有效減少篩選時間及實驗試劑的消耗。因此，通過不同方法對磁性載體材料進行功能化修飾，在充分發揮磁性材料優勢的基礎上改善其表面性質，提高對不同類型目標物的特異性，從而在各類復雜樣品的前處理過程中有著良好的應用潛力[13]。目前，磁珠是近年來發展起來的一種常用的磁性載體材料，也叫做磁性納米粒子，包括氧化鐵（Fe3O4和γFe2O3）、合金（CoPt3和FePt）等。其中，Fe3O4納米粒子具有生物相容性和無毒性等優點，被廣泛應用于酶的固定化。中藥酶抑制劑篩選中的常用磁珠其磁核以Fe3O4納米粒子為主，殼層為二氧化硅、瓊脂糖、葡聚糖等，是具有超順磁性的小球形磁性粒子[14-15]，可借助外部磁場從生物催化體系中分離酶抑制劑。該方法機械穩定性高、孔隙率低，利于降低反應中的傳質阻力，提高了固定化酶的重復使用性。由于其具有操作穩定性高、磁響應強、磁分離速度快等優點，在生物和藥物研究中得到了廣泛的應用[16]。在進行酶抑制劑篩選時，磁珠的修飾位置不同，所固定的位點也不同。因此，在實驗中，往往要根據靶蛋白的分子結構選擇合適的磁珠或將某一磁珠進行修飾后作為固定載體。將酶固定在合適的磁珠上會增強酶與待篩選酶抑制劑的親和力，利用磁力將固定化酶及其抑制劑從提取液中分離，然后洗去與酶不相互作用的化合物，隨后可得到酶固定化磁珠配體配合物，最后通過洗脫溶劑使配體釋放進而通過質譜表征[17]。在這種方法中，潛在的配體與酶相互作用，生成酶配體配合物，這有利于利用磁性[18-23]從復雜混合物中分離活性化合物。在酶抑制劑的篩選中，磁性載體材料是最常用的固定化載體材料[24-30]。

1.1 無機載體材料

二氧化硅是磁性納米粒子表面修飾最常用的無機材料[23,31-34]，此外還有二氧化鈦[35]、介孔二氧化硅[16]等。Li等[23]首先將Fe3O4分散在水中加入聚乙烯吡咯烷酮（polyvinylpyrrolidone，PVP）室溫攪拌得到產物。然后在超聲作用下將產物分散在含有異丙醇和氨水的混合溶劑中，室溫攪拌下緩慢加入正硅酸乙酯（tetraethyl orthosilicate，TEOS）溶液得到SiO2@Fe3O4磁性微球，并加入3-氨丙基三甲氧基硅烷（3-aminopropyltrimethoxysilane，ATPES）對其表面進行改性。最后將α-淀粉酶固定在表面改性的SiO2@Fe3O4磁性微球上。將制得的酶固定化磁性微球用于黃花草中α-淀粉酶抑制劑的篩選，最終得到3種黃酮類化合物對α-淀粉酶具有較好抑制作用。Liu等[35]采用溶劑熱法（也稱水熱法或水熱合成法）制備了Fe3O4@TiO2納米粒子，并通過靜電相互作用固定脂肪酶。采用透射電鏡、傅里葉變換紅外光譜和X射線衍射等方法對磁性納米粒子進行表征，以確定脂肪酶是否已經被固定。研究中應用脂肪酶固定化Fe3O4@TiO2納米粒子從6種具有脂肪酶抑制活性的藏藥中篩選出脂肪酶抑制劑，獲得5種具有與臨床常用減肥藥物奧利司他活性類似的化合物，其中1種化合物（山柰酚）的抑制活性優于奧利司他。Yi等[16]將谷胱甘肽S-轉移酶固定在介孔二氧化硅磁性微球表面篩選紫蘇中的酶抑制劑，利用高效液相色譜和四極飛行時間質譜法進行鑒定，篩選出6種具有谷胱甘肽-轉移酶抑制作用的物質，其中，迷迭香酸、(?)表沒食子兒茶素-3-沒食子酸酯和(?)-表兒茶素-3-沒食子酸酯具有較好的抑制活性。最后利用分子對接技術確定潛在抑制劑與谷胱甘肽-轉移酶的結合方式。首先，用FeCl3與檸檬酸三鈉和乙酸鈉合成Fe3O4，然后將其分散在含有乙醇、去離子水和氨水的混合溶液中，攪拌均勻后加入TEOS制得SiO2@Fe3O4磁性微球。為進一步合成介孔二氧化硅磁性微球（mSiO2@SiO2@Fe3O4），將SiO2@Fe3O4磁性微球分散在十六烷基三甲基氯化銨、去離子水和三乙醇胺中并滴加TEOS，產物用磁鐵分離并清洗除雜后得mSiO2@SiO2@Fe3O4磁性微球。最后用PDA對mSiO2@SiO2@Fe3O4磁性微球進行表面改性并將谷胱甘肽-轉移酶固定在其表面。

1.2 有機載體材料

在酶抑制劑的篩選中，有機載體材料相比于無機載體材料應用較少。目前，用于磁性納米粒子表面修飾的有機載體材料有聚酰胺（polyamidoamine，PAMAM）[36]、共軛-有機骨架[37]和金屬-有機骨架[38]等。Jiang等[36]以PAMAM包覆磁性微球為基礎，建立了一種篩選和鑒定赤芍提取物中α-Glu抑制劑的方法。首先，采用微修飾法合成了Fe3O4-COOH微球。然后，通過Fe3O4-COOH微球表面羧基與PAMAM氨基的偶聯反應，制備了Fe3O4@PAMAM微球。最后，通過GA的交聯，成功地將α-Glu連接到其表面。結果表明，沒食子酸和(+)-兒茶素對α-Glu均具有較好抑制作用。Zhao等[37]將乙酰膽堿酯酶（acetylcholinesterase,AchE）固定在適配體功能化磁性納米顆粒共軛有機骨架上構建固定化酶反應器，并將該方法用于酒石酸、(?)-石杉堿A、多奈哌齊和小檗堿4種AchE抑制劑抑制活性的測定，發現酒石酸的IC50與已報道的結果相當，證明了該固定化酶反應器的可行性。Wu等[38]將α-Glu固定在磁性納米材料Fe3O4@ZIF-67上，構建了快速篩選α-Glu抑制劑的生物微反應器。然后，將酶生物微反應器通過外加磁場固定在連接高效液相色譜儀（high performance liquid chromatography，HPLC）和微注射泵2端的管中，形成一個磁性在線篩選系統。以信陽毛尖粗茶提取物為實驗對象，對該在線篩選方法進行驗證，利用該在線篩選系統篩選出3種抑制劑（兒茶素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯和表沒食子酸酯）。與傳統方法相比，該方法可將篩選、洗脫和分析結合起來，可以簡單、高效、直接地從天然來源篩選和鑒定潛在的α-Glu抑制劑。

磁珠分散性好，磁分離速度快，酶結合量大，酶活性高，是固定化酶的理想載體，現已廣泛應用于酶抑制劑的篩選中。將酶固定在特定的磁珠上，可實現酶抑制劑的分離。此方法操作較穩定，非特異性結合率低。因此，酶固定化磁珠技術因其快速的生物分析、導向性分離和從復雜混合物中直接捕獲配體而受到越來越多的關注。

2 非磁性載體

2.1 無機載體材料

2.1.1 石英毛細管 毛細管電泳（capillary electrophoresis，CE）具有分離效率高、分析速度快、操作簡單和樣品消耗少以及可與多種檢測手段聯用等優點，在酶分析研究中越來越受到關注[39-41]。近年來，固定化酶微反應器與生物活性靶向技術相結合已應用于中藥酶抑制劑的篩選[42]。該方法將酶固定在經過修飾的石英毛細管內，捕獲抑制劑后，洗滌未結合組分，進而通過蛋白質變性洗脫活性結合配體，允許直接并可重復注射生物樣品到高效液相色譜上進行檢測，篩選和分離一步完成，大大縮短了操作時間。但該方法制備過程中是比較復雜繁瑣的[43-44]，而且載體的孔隙率[45]、孔徑[46]和表面化學[47-48]等因素也很容易影響固定化酶的性能。

Wu等[49-50]用PDA對石英毛細管進行表面改性，并與氧化石墨烯共聚形成聚多巴胺/氧化石墨烯涂層，增加了固定化酶的結合率，并將該方法成功用于凝血酶和凝血因子Xa以及黃嘌呤氧化酶抑制劑的篩選。有研究者用3-氨基丙基三乙氧基硅烷對石英毛細管進行表面改性，采用戊二醛交聯法進行酶的固定，并成功用于酶制劑的篩選。Rodrigues等[51]將此修飾方法用于黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase，XOD）抑制劑的篩選，成功地從不同天然產物中篩選出30個潛在的XOD抑制劑。Zhang等[52]將此修飾方法用于組織蛋白酶B抑制劑篩選，并從中藥中發現了17個具有抑菌潛力的活性成分，發現山柰酚等5種天然產物有潛在的抑制作用，并以分子對接進行驗證。Tang等[53]將此修飾方法用于脂肪酶抑制劑的在線篩選，結果發現6種天然產物對脂肪酶活性均有抑制作用。Zhao等[54]將此修飾方法用于神經氨酸酶抑制劑的篩選，發現了6種天然產物為潛在抑制劑。進一步測定了這6種化合物對神經氨酸酶潛在的抑制活性，由大到小分別為：甲基補骨脂黃酮A＞補骨脂甲素＞黃芩素＞黃芩苷＞白楊素和牡荊素。此外，還有研究者采用單片毛細管固定化酶反應器與液相色譜-串聯質譜聯用技術，成功用于酶抑制劑的篩選[55-56]。

毛細管的高表面體積比有利于足夠高濃度的酶用于酶促反應[57-58]。此外，由于注入的底物溶液直接與固定化酶分子接觸，使傳統的采樣、反應、分離和檢測多步操作簡化為一步操作，因此該分析變得更簡單，不需要額外的混合程序。與磁性載體相比，該技術將篩選和分離集成為一步，大大縮短了操作時間。該技術適用于復雜混合物中酶抑制劑的快速篩選，而且樣品消耗量少，節省了試劑成本，可以實現酶抑制劑的快速分離。

2.1.2 硅酸鋁納米管 硅酸鋁納米管（halloysite nanotubes，HNTs）是一種天然存在的硅酸鹽納米管，由于其優異的物理特性，引起了人們越來越多的興趣。HNTs的內徑為20～30 nm，外徑為30～50 nm，長度為1～2 μm，為藥物、酶和殺菌劑的儲存提供了理想的納米級包埋系統。更重要的是，HNTs的外表面主要由-Si-基團組成，內表面由Al2O3組成，為酶提供了更多的選擇性結合位點，從而減少了配體在HNTs上的非特異性吸附[59]。因此，有研究者將HNTs作為一種新的酶固定載體材料用于酶抑制劑的篩選。Wang等[59]通過靜電吸附作用將脂肪酶固定到羥基納米管上用于厚樸中脂肪酶抑制劑的篩選，發現厚樸三酚和厚樸醛B 2種化合物對脂肪酶抑制活性較好。HNTs的內外表面為酶提供了更多的選擇性結合位點，降低了非特異性吸附，但其合成較為復雜，收率較低，因此應用有限。

2.1.3 多孔二氧化硅 多孔二氧化硅材料具有表面張力低、粘溫系數小、壓縮性高、氣體滲透性高等基本性質，同時還具有耐高溫和低溫、電氣絕緣、耐氧化穩定性、耐候性、難燃、耐腐蝕、無毒無味以及生理惰性等特性[60]。Hou等[61]首先將α-Glu結合到脂質體囊泡中，然后采用反蒸發法將其負載到多孔二氧化硅表面，制備成受體脂質體生物膜色譜柱，用于五味子提取物的α-Glu抑制劑篩選，并通過體外實驗進一步證實了五味子苷的降糖作用。

2.2 有機載體材料

2.2.1 中空纖維 中空纖維是一種具有孔徑和內腔的有機聚合物，具有比表面積大、生物材料和有機溶劑消耗低，且設備便宜、用于中空纖維制備的材料來源豐富，是酶、細胞、脂質體等生物材料的理想載體，已被應用于酶固定化中。首先，對中空纖維進行活化。然后，將酶與已活化的中空纖維孵育使酶被吸附在中空纖維上。最后，將待測物與中空纖維固定化酶孵育，篩選待測物中潛在酶抑制劑。Zhao等[62]提出了一種基于吸附中空纖維固定化酪氨酸酶（tyrosinase，TYR）的方法，從葛根提取物中篩選潛在的TYR抑制劑。通過液相色譜-質譜分析，成功地檢測出了7種潛在活性化合物，并進一步結合體外實驗，發現葛根素、葛根素-6--木糖苷、葛根素和阿片苷具有良好的TYR抑制活性。中空纖維因其具有孔徑、內腔及比表面積大等優點，為酶提供了充分的附著空間，但由于其清洗較為困難，導致重復利用率低。

2.2.2 生物傳感器 生物傳感器是一種對生物物質敏感并可將其濃度轉換為電信號進行檢測的儀器。絲網印刷電極因其具有批量生產、低成本、高重現性、小尺寸等特點而被廣泛應用于分析領域。所謂酶生物傳感器法，是將酶固定在經過修飾的絲網印刷電極上，當與抑制劑接觸時會發生電信號變化，通過檢測電信號的變化，達到分析檢測的目的。Elharrad等[63]為篩選藥用植物中潛在的XOD抑制劑，研制了一種簡便、靈敏的安培生物傳感器，并用于測定多種藥用植物對黃嘌呤氧化酶的抑制率，發現留蘭香和馬齒莧2種植物對黃嘌呤氧化酶抑制活性較高。以普魯士藍修飾絲網印刷電極表面，極大降低了生物傳感器的檢測電位，使該裝置具有較高的選擇性。該傳感器具有結構簡單、選擇性好、成本低、穩定性好、結果快速等優點。

2.2.3 紙 自2007年Whiteside研究小組首次提出微流體裝置概念以來，紙作為一種新的載體材料，以其良好的生物相容性、大的比表面積、易于修飾、價格低廉等優點，在環境監測、化學檢測、生物醫學診斷等領域具有廣闊的應用前景[64]。

（1）濾紙：三維打印技術是利用一種紙分析儀器將紙張制作成為一種特殊的微流體裝置，該裝置成本低，具有較高的比表面積，易于結合分子吸附蛋白質。使用過的紙張設備可以很容易地通過燃燒來處理，可減少實驗消耗品造成的污染。Guo等[65]將三維打印技術用于酶抑制劑的篩選，首先，用3D印刷的聚己內酯對濾紙進行改性，形成疏水區。然后，對濾紙進行準確切割，得到既具有親水性又具有疏水性的改性紙。接下來，用殼聚糖對親水區進行改性。最后，將α-Glu固定在親水區，制備出具有獨特微流體結構的三維打印技術微裝置，并成功地將該方法用于篩選植物提取物中具有α-Glu抑制活性的物質，發現綠原酸、槲皮素-3--葡萄糖醛酸、異槲皮素和槲皮素4種化合物對α-Glu的抑制活性較好。該方法結合一些便攜式探測器，如手機和照相機，可以獲得定性和定量的結果。因此，很容易判斷酶在紙上的固定化效果。

（2）纖維素濾紙：纖維素濾紙（cellulose filter paper，CFP）具有成本低、來源廣、表面積大、生物相容性好、表面羥基含量高等優點，被選為新型酶固定化載體，而且CFP可以快速從酶反應混合物中分離并終止反應，從而縮短了操作時間，簡化了其他載體（如納米材料和磁性納米顆粒）所需的分離過程。Li等[66]以纖維素濾紙為載體，對α-Glu進行固定化。利用多巴胺的自聚-粘附行為，通過希夫堿反應和邁克爾加成反應，將聚多巴胺復合層包覆α-Glu與改性后的CFP共價結合形成固定化酶（CFP/DOPA/α-Glu）。用CFP/DOPA/α-Glu篩選11種中藥中的α-Glu抑制劑，發現訶子對α-Glu的抑制作用最強。Zhao等[67]以CFP為載體，以殼聚糖為物理包覆劑引入氨基基團，然后以戊二醛為交聯劑，通過希夫堿反應，將AchE與氨基功能化的CFP共價鍵合進行固定化酶。最后，將CFP固定化AchE應用于17種中藥的抑制劑篩選。

2.2.4 金屬-有機骨架 金屬-有機骨架（metal- organic framework，MOFs）為一種雜化多孔材料，由有機連接體和金屬節點通過強的化學鍵組裝而成。MOFs具有可調節孔徑、大比表面積和熱穩定性等優點。有研究表明，酶被固定在MOFs上后，其在可重用性、催化活性和穩定性方面的性能都有了很大的提高。Chen等[68]首先將ZrCl4和氨基對苯二甲酸溶于,-二甲基甲酰胺溶液中進行超聲，然后分別加入HCl和HAc，得到混合物。隨后，將混合物轉移到不銹鋼聚四氟乙烯內襯的高壓釜中密封加熱，反應混合物在空氣中冷卻至室溫，然后離心。沉淀物用新鮮,-二甲基甲酰胺和無水乙醇洗凈，后減壓干燥，合成了金屬有機骨架UiO-66-NH2。UiO-66-NH2通過沉淀交聯固定化豬胰脂肪酶（porcine pancreatic lipase，PPL），得到的PPL@MOF具有較高的PPL載量和相對活力恢復率，并將PPL@MOF復合物用于篩選夏枯草脂肪酶抑制劑，發現了13種潛在的脂肪酶抑制劑。與磁珠、納米粒子相比，MOFs材料酶固定量大、相對活力恢復率高。

2.2.5 酶微柱 有研究者采用酶微柱法用于酶抑制劑的篩選，該方法屬于固相萃取技術，操作簡單，可與高效液相色譜耦合，實現了在線篩選，提高了酶抑制劑的篩選和分析效率。首先將硅膠分散在乙醇中，加入3-氨基丙基三乙氧基硅烷形成氨基功能化硅膠，然后將氨基功能化的硅膠與酶液混合，使酶固定在硅膠表面，洗去未結合酶，最后將酶固定化硅膠填入不銹鋼微柱中形成酶微柱。Peng等[69]運用該方法成功的從金銀花中篩選和鑒定XOD抑制劑。該方法與高效液相色譜的在線耦合提高了篩選和分析效率。與傳統的與二維色譜耦合相比，該方法為直接與HPLC耦合，縮短了分析檢測時間。

3 總結與展望

中藥含有的化學成分復雜、種類繁多、作用機制比較復雜，一直是獲取活性成分或者先導化合物的重要來源。以酶為靶標進行藥物篩選是發現和尋找新藥的重要環節之一。隨著固定化酶技術的發展，研究者將固定化酶技術與中藥酶抑制劑的篩選相結合，并通過高效液相色譜-質譜聯用技術進行鑒定，篩選得到很多具有酶抑制活性的化合物，在一定程度上明確了中藥發揮作用的活性成分及其作用機制。本文以不同載體材料為分類，綜述了固定化酶技術在中藥酶抑制劑篩選中的應用。磁珠是最常用的磁性載體材料，該類材料利用磁力吸引可使固定化酶配體配合物快速從體系中分離，且固定化方法簡單，而且使用后的磁珠可以回收利用，能有效減少人力物力的投入。非磁性載體材料主要以石英毛細管應用最為廣泛。此外，還有中空纖維、納米管、生物傳感器等材料用于篩選中藥中的酶抑制劑，豐富了固定酶的載體材料。固定化酶技術在酶抑制劑篩選上的應用前景十分廣泛，不僅節省了人力物力而且提高了新藥研發的效率。目前，固定化酶技術仍然存在一些問題，如酶與載體材料的結合率較低、固定化酶的活力也會有所下降等。但相信隨著科學技術的不斷發展及酶抑制劑研究的不斷深入，固定化酶技術會成為酶抑制劑篩選最有前景的方法之一。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Research status of immobilized enzyme technology in screening of enzyme inhibitors of traditional Chinese medicine

AN Qiong1, LI Guo-feng1, LANG Yi-fan1, YANG Wu-liang1, CHEN Chun-lan1, ZHANG Wu-gang2, CHEN Hai-fang1

1.Key Laboratory of Modern Preparation of Traditional Chinese Medicine, Ministry of Education, Jiangxi University of Chinese Medicine, Nanchang 330004, China 2.National Engineering Center for Manufacturing Technology of Solid Preparation in Traditional Chinese Medicine, Jiangxi University of Chinese Medicine, Nanchang 330004, China

Immobilized enzyme technology is a physical or chemical method to fix free enzyme on the corresponding carrier for screening enzyme inhibitors.This method has high selectivity and high stability.Starting from the different pharmacological effects of traditional Chinese medicine (TCM), using disease-related biological enzymes and combining with immobilized enzyme technology to screen related enzyme inhibitors in TCM, this method may become an important means for new drug research and development.In this paper, the research status of immobilized enzyme in the screening of enzyme inhibitors in TCM in recent ten years was reviewed based on the carrier materials used for immobilized enzyme in order to provide a certain theoretical basis for the subsequent research.

immobilized enzyme; biological enzymes; traditional Chinese medicine; carriermaterial; screening; enzyme inhibitor

R28；R283.6

A

0253 - 2670(2021)22 - 7057 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.22.032

2021-02-07

江西省自然科學基金資助項目（20192BAB205109）；國家自然科學基金項目（81903917）；江西省教育廳項目（GJJ19067）；博士啟動基金項目（2018WBZR002）

安 瓊（1996—），女，碩士研究生，研究方向為中藥藥效物質基礎和作用機制研究。Tel: 17807051975 E-mail: 569946976@qq.com

通信作者：張武崗（1979—），男，副教授，碩士生導師。Tel: 15083551442 E-mail: zwgchf98@foxmail.com

陳海芳（1979—），女，副教授，碩士生導師。Tel: 15350004308 E-mail: chenhf88@126.com

[責任編輯 王文倩]