小干擾RNA技術在逆轉(zhuǎn)肝纖維化中應用效果的研究進展▲

馮一丹 呂蕊花 史琳娜 張喜榮 閆盎然

(陜西中醫(yī)藥大學1 第二臨床醫(yī)學院，2 醫(yī)學技術學院，咸陽市 712046，電子郵箱：1808827370@qq.com)

【提要】 肝纖維化是多種慢性肝病發(fā)展過程中的共同病理改變，發(fā)病時肝細胞發(fā)生炎癥壞死，肝內(nèi)纖維結締組織異常增生。目前認為肝纖維化發(fā)生的主要機制是肝星狀細胞活化、細胞外基質(zhì)的合成與降解失衡導致細胞外基質(zhì)在細胞間隙過度積累所致。小干擾RNA技術通過合成反義小分子RNA從而特異性抑制靶基因的轉(zhuǎn)錄后表達，在逆轉(zhuǎn)肝纖維化的過程中應用小干擾RNA技術具有強大的潛力。本文從抑制肝星狀細胞活化和增殖，促進肝星狀細胞衰老、凋亡與死亡，以及直接調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)的合成與降解3方面對小干擾RNA技術在逆轉(zhuǎn)肝纖維化中的應用效果進行綜述。

肝纖維化是多種病因?qū)е碌穆愿闻K疾病發(fā)展到肝硬化的中間過程，是一個可逆階段[1-3]。但目前還未發(fā)現(xiàn)可以有效逆轉(zhuǎn)肝纖維化的藥物，臨床上主要通過去除原發(fā)病因或干預纖維化的進程以達到逆轉(zhuǎn)肝纖維化的目的[4]。

RNA干擾技術于1998年首次被發(fā)現(xiàn)，是指雙鏈RNA在細胞內(nèi)特異性誘導與之同源的mRNA降解或抑制其翻譯，使相應基因表達關閉，從而誘導基因在轉(zhuǎn)錄后水平沉默[5]。之后RNA干擾技術迅速成為研究基因功能的工具之一，另外，該技術作為疾病靶向基因治療的新手段，已被用于各種疾病的治療[6]。近年來，有研究發(fā)現(xiàn)RNA干擾可以高效、準確地沉默肝纖維化過程中的關鍵基因，阻止其表達，認為RNA干擾對肝纖維化的逆轉(zhuǎn)有重要作用。本文分別從抑制肝星狀細胞(hepatic stellate cell，HSC)的活化和增殖，促進HSC的衰老、凋亡與死亡，直接調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的合成與降解3方面來對小干擾RNA技術在逆轉(zhuǎn)肝纖維化中應用的相關研究進行綜述。

1 小干擾RNA技術抑制HSC的活化與增殖

HSC可分為靜止表型和激活表型，正常情況下HSC處于靜止狀態(tài)，當肝臟受到外界刺激時HSC被激活，其表型可由靜止型轉(zhuǎn)變?yōu)榛罨汀；罨腍SC最顯著的特征是表達α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)，分泌多種致炎因子和致纖維化因子，并且實質(zhì)(如肝細胞)和非實質(zhì)(如巨噬細胞)細胞均可釋放HSC激活因子，使肝肌成纖維樣細胞分泌多種ECM，與此同時，基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)合成減少，相應的組織抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinase，TIMP)合成增加，從而導致肝纖維化的發(fā)生。研究表明小干擾RNA可通過以下5種途徑抑制HSC的活化與增殖[7]。

1.1 抑制轉(zhuǎn)化生長因子β1/Smad的表達 轉(zhuǎn)化生長因子(transforming growth factor，TGF)-β1被認為是促纖維化炎癥因子中最重要的介導因子，動物實驗及細胞實驗均顯示沉默TGF-β1具有潛在治療肝纖維化的作用[8-9]。王魯文等[10]構建TGF-β1 短發(fā)夾RNA(short hairpin RNA，shRNA)沉默表達載體，并將其注入肝纖維化小鼠體內(nèi)，結果顯示小鼠肝內(nèi)TGF-β1、Smad3和α-SMA的表達下降，Smad7表達升高，抑制HSC的激活信號，細胞內(nèi)膠原合成減少，有效抑制了肝纖維化的發(fā)展。此外，TGF-β1小干擾RNA還能抑制肝組織中血小板衍生生長因子(platelet-derived growth factor，PDGF)-BB、PDGF-βR及肝組織中磷酸化細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(phosphorylated extracellular regulatory protein kinase1/2，p-ERK1/2)的表達，從而起到改善肝纖維化的作用[11]。Fu等[12]將TGF-βRⅡshRNA轉(zhuǎn)入大鼠活化的HSC中，隨著TGF-βRⅡ和α-SMA水平的下降，Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原蛋白與透明質(zhì)酸的表達水平也隨之降低，肝纖維化程度減輕。

Smads蛋白是TGF-β超家族信號在細胞內(nèi)轉(zhuǎn)導的一組蛋白，是目前發(fā)現(xiàn)的TGF-β受體的唯一底物。Smad通路在調(diào)控TGF-β1介導的ECM沉積過程中具有十分重要的作用,沒有Smads復合物的參與，TGF-β無法誘導HSC轉(zhuǎn)化、合成并分泌膠原及其他ECM[13]。轉(zhuǎn)染編碼Smad7基因的腺病毒至HSC可抑制TGF-β1的生物學活性，從而抑制HSC的活化并阻止肝纖維化的發(fā)生[14]。Liu等[15]采用小干擾RNA Smad7轉(zhuǎn)染LX-2細胞，發(fā)現(xiàn)其可阻斷吡喹酮介導的LX-2細胞活化和TGF-β1介導的Ⅰ型膠原(typeⅠ collagen,Col1)α1的增加，提示Smad7在吡喹酮抗肝纖維化過程中具有的關鍵作用。除此之外，HSC中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激對肝纖維化進展也具有影響，Koo等[16]研究發(fā)現(xiàn)，存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的患者或小鼠的肝組織中Smad2表達水平增加，經(jīng)慢病毒載體將Smad2小干擾RNA轉(zhuǎn)入肝組織后，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激介導HSC激活的作用減弱，這表明HSC中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激促進了肝纖維化的發(fā)生，且該過程是通過誘導Smad2的過度表達來實現(xiàn)的，而采用小干擾RNA技術干擾Smad2表達可以抑制HSC激活從而緩解肝纖維化。

1.2 抑制高遷移率族蛋白B1的表達 高遷移率族蛋白B1(high mobility group protein B1，HMGB1)是非組蛋白核內(nèi)結構蛋白，主要由壞死細胞被動釋放以及單核/巨噬細胞受脂多糖等刺激后表達[17]。研究發(fā)現(xiàn)，HMGB1不僅在細胞核內(nèi)發(fā)揮作用，而且被釋放到胞外時可作為一種有效的炎癥介質(zhì)誘發(fā)嚴重的炎癥反應[18]。目前研究認為，HMGB1有可能成為抗炎和防止組織損傷的重要靶點[19]。葛文松等[20]將HMGB1小干擾RNA用Lipofectamine包裹轉(zhuǎn)染至HSC-T6細胞后發(fā)現(xiàn)，細胞增殖受到抑制，凋亡加速，Col1、Ⅲ型膠原(typeⅢ collagen,Col3)表達水平也顯著降低。另有研究發(fā)現(xiàn)，HMGB1小干擾RNA可顯著抑制肝內(nèi)膽管細胞癌的遷移及侵襲，并降低MMP-14蛋白的表達，這提示HMGB1小干擾RNA可以抑制肝內(nèi)膽管細胞癌增殖，減少膠原沉積，具有預防及治療肝纖維化的潛力[21]。此外，Lan等[22]將HMGB1小干擾RNA導入到小鼠肝細胞系AML-12中，發(fā)現(xiàn)其可減少AML-12細胞HMGB1的釋放以及炎癥細胞因子的產(chǎn)生，減輕酒精誘導的肝損傷，阻斷其進一步發(fā)展為脂肪性肝炎、纖維化、肝硬化甚至肝癌。

1.3 抑制結締組織生長因子、血小板衍生生長因子、血管內(nèi)皮生長因子的表達 結締組織生長因子(connective tissue growth factor，CTGF)在傷口愈合過程中呈過表達，誘導肌成纖維細胞增殖，導致膠原積累，進而加重肝纖維化[23]。Yu等[24]設計PEI-Fe3O4NP將CTGF小干擾RNA轉(zhuǎn)入HSC后發(fā)現(xiàn)，CTGF小干擾RNA可以降低活化HSC中CTGF的表達水平和膠原蛋白的產(chǎn)生。另有學者用CTGFshRNA轉(zhuǎn)染HSC-T6細胞，發(fā)現(xiàn)HSC-T6細胞生長明顯受到抑制，生長繁殖被阻滯于S期，TGF-β1、Smad3 mRNA及蛋白的表達量下降，Smad7 mRNA及蛋白的表達水平升高，提示CTGF小干擾RNA在逆轉(zhuǎn)肝纖維化進程中有重要作用[25]。血小板衍生生長因子(platelet-derived growth factor，PDGF)在肝損傷時呈過表達，因此被認為是激活HSC的有效因子，可以顯著促進HSC的增殖[4]。用小干擾RNA沉默PDGF受體β，發(fā)現(xiàn)PDGF受體β小干擾RNA能明顯抑制PDGF-BB的促HSC-T6細胞增殖效應，降低CTGF、TIMP-1和Col1 mRNA表達水平[26]。此外，作為血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)家族一員的胎盤生長因子(placental growth factor，PlGF)也能介導傷口愈合和炎癥反應，在肝纖維化的發(fā)展和血管的生成中發(fā)揮重要作用。Li等[27]構建PlGF小干擾RNA載體并經(jīng)尾靜脈注入膽管結扎的小鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)沉默PlGF可以降低小鼠肝臟的炎癥和纖維化程度，抑制HSC的激活與巨噬細胞的活化，并大幅降低了肝纖維化中促炎因子和趨化因子的表達水平，減輕肝纖維化程度。

1.4 抑制血管緊張素Ⅱ的表達 血管緊張素Ⅱ(angiotensin Ⅱ，AngⅡ)通過誘導NADPH氧化酶(NADPH oxidase，NOX)依賴性氧化應激來加重肝纖維化。AngⅡ的七肽片段Ang-(1-7)可降低AngⅡ的水平，從而預防肝纖維化。Zhang等[28]給予AngⅡ 刺激肝細胞之前采用NOX4小干擾RNA預處理細胞，發(fā)現(xiàn)AngⅡ誘導的肝細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化被抑制。另有學者研究發(fā)現(xiàn)NOX4小干擾RNA可抑制AngⅡ誘導的NLRP3炎癥小體激活和膠原蛋白合成[29]。Alamandine是新發(fā)現(xiàn)的腎素-血管緊張素系統(tǒng)的組成成分，有研究發(fā)現(xiàn)，其可通過MrgD受體對AngⅡ 發(fā)揮負調(diào)控作用，研究人員針對MrgD受體設計了MrgD受體小干擾RNA并將其轉(zhuǎn)入HSC中，發(fā)現(xiàn)Alamandine以及MrgD受體激動劑β-alanine都不能抑制AngⅡ的誘導作用，提示Alamandine是通過MrgD受體抑制NOX4介導的活性氧生成來調(diào)控HSC自噬，阻斷Ang誘導肝纖維化作用[30]。

1.5 抑制瘦素的表達 瘦素是由ob基因編碼的分泌型蛋白質(zhì)，主要由貯脂細胞產(chǎn)生。研究表明，活化的HSC中瘦素 mRNA和蛋白質(zhì)合成均增加。薛秀蘭等[31-32]設計瘦素小干擾RNA并將其轉(zhuǎn)入HSC中，同時將其轉(zhuǎn)染后的HSC導入肝纖維化大鼠體內(nèi)，結果發(fā)現(xiàn)瘦素小干擾RNA可以有效地抑制HSC細胞增殖，促進HSC細胞凋亡，顯著抑制Col1和信號轉(zhuǎn)導與轉(zhuǎn)錄激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的表達。此外，還有研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染瘦素shRNA的肝纖維化組織中，Col1及Col3的沉積程度均明顯下降，從而減緩了肝纖維化的發(fā)展程度[33]。

2 小干擾RNA技術促進HSC的衰老、凋亡與死亡

各種不良刺激可以激活處于靜止狀態(tài)的HSC，使其轉(zhuǎn)化為肝肌成纖維樣細胞，不斷生成ECM，導致肝纖維化。因此，促進HSC的衰老、凋亡與死亡是減輕肝纖維化的有效途徑。

2.1 抑制半乳糖凝集素3的表達 半乳糖凝集素3(galectin 3,Gal-3)存在于多種組織和細胞內(nèi),參與細胞黏附、增殖、凋亡、炎癥反應和免疫反應等多種病理生理過程，還參與腎、肺等纖維化形成過程[34]。Henderson等[35]研究發(fā)現(xiàn)，沉默Gal-3基因后，肌成纖維細胞活化和Col1的表達被阻斷，肝纖維化程度明顯減輕。有學者構建Gal-3小干擾RNA并將其轉(zhuǎn)染至大鼠肝星狀細胞系rHSC-99細胞，也發(fā)現(xiàn)細胞增殖明顯受抑制，細胞凋亡率增高，細胞死亡率增加了1.7～2.2倍[36-37]。

2.2 抑制B淋巴細胞瘤-2家族的表達 B細胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)基因作為一種抗凋亡蛋白基因，可保護細胞免于病毒、氧化劑等刺激而引起的凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，在人肝纖維化過程中Bcl-2過表達,可導致HSC持續(xù)活化，從而使慢性肝病遷延難愈[38]。Tian等[39]采用肝靶向納米顆粒將阿霉素(DOX)和Bcl-2小干擾RNA轉(zhuǎn)入HepG2細胞內(nèi)，結果顯示，該干預可以誘導更多的HepG2細胞凋亡。另有學者構建pGPU6-GFP-shRNA并將其轉(zhuǎn)染至HSC-T6細胞，發(fā)現(xiàn)HSC-T6的Bcl-2基因表達抑制率達80%，HSC-T6細胞生長明顯受抑，這表明沉默Bcl-2能有效抑制HSC中Bcl-2的表達及HSC-T6細胞生長,促進HSC-T6細胞凋亡[40]。

2.3 抑制核因子κB家族的表達 核因子κB(nuclear factor kappaB，NF-κB)參與細胞對外部刺激的反應,由p50和p65組成的異源二聚體是NF-κB家族成員最常見的形式。NF-κB的激活在細胞黏附、生長和分化中起關鍵作用，且活化的NF-κB信號通路通過上調(diào)其下游的靶基因如環(huán)氧合酶2(cyclooxygenase 2，COX2)、細胞周期蛋白D1(cyclinD1)、Bcl-2等,抑制細胞凋亡。Cui等[41]采用NF-κBp65小干擾RNA轉(zhuǎn)染HSC-T6細胞72 h后，再用脂多糖刺激細胞1h，結果發(fā)現(xiàn)NF-κBp65小干擾RNA可有效降低HSC-T6細胞中Bcl-2、Col1、α-SMA、TGFβ1、抗凋亡蛋白A1和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1，TIMP-1)的mRNA表達水平，MMP-2活性增高，促進HSC凋亡。有學者發(fā)現(xiàn)，增高半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase3)活性可明顯促進HSC凋亡，這表明p65小干擾RNA可以特異性地阻斷NF-κB基因表達，促進HSC的凋亡[42]。此外，張彥亮等[43]發(fā)現(xiàn)核因子κB激酶抑制劑(inhibitor of nuclear factor kappaB kinase，IKKβ)小干擾RNA可使HSC的凋亡率顯著增加，Caspase3和Bcl-2相關x蛋白表達水平均明顯升高，而NF-κBp65和Bcl-2蛋白的表達水平明顯下降，HSC凋亡增加，肝纖維化被抑制。

另外，NF-κB還可以直接促進HSC的衰老和死亡。賈巖[44]研究發(fā)現(xiàn)，莪術醇誘導的程序性壞死信號可以競爭性抑制促細胞生長的NF-κB的mRNA和蛋白表達，進一步抑制骨膜蛋白介導的活化型HSC的遷移、黏附,進而發(fā)揮抗肝纖維化作用。有學者發(fā)現(xiàn)經(jīng)尾靜脈將COX2 shRNA慢病毒載體注入肝纖維化大鼠體內(nèi)后，肝纖維化組織細胞衰老指數(shù)明顯增加，α-SMA mRNA、COX-2 mRNA表達水平顯著下調(diào)，p53 mRNA表達水平顯著上調(diào)，表明COX2 shRNA可促進肝纖維化組織細胞衰老[45]。

3 小干擾RNA技術直接調(diào)節(jié)ECM的合成與降解

多種病因可導致肝臟炎癥，使ECM沉積導致肝纖維化，而在這個過程中，這些病因可能均通過誘導相似的下游通路導致肝纖維化的發(fā)生，因此，調(diào)控這個相似的下游通路或許可以阻斷ECM沉積，從而實現(xiàn)抗纖維化治療[46]。研究發(fā)現(xiàn)，核苷酸結合寡聚化結構域樣受體家族端酶募集結構域5(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor family caspase recruitment domain containing 5,NLRC5)在肝纖維化中的過表達導致HSC中Col1和α-SMA的表達水平上調(diào)，而NLRC5小干擾RNA可降低Col1和α-SMA的表達水平[47]。另有學者發(fā)現(xiàn)阻斷NLRC5表達可降低α-SMA、Col1α1 mRNA及蛋白的表達水平，表明NLRC5可以通過干預HSC活化和ECM合成來調(diào)節(jié)或抑制與肝纖維化相關的關鍵基因[48]。

3.1 調(diào)節(jié)纖溶酶原激活物抑制劑1/尿激酶型纖溶酶原激活劑的平衡 由尿激酶型纖溶酶原激活劑(urokinase-type plasminogen activator，uPA)、纖溶酶、纖溶酶原激活物抑制劑1(plasminogen activator inhibitor type 1，PAI-1)和MMP構成的反應體系是調(diào)節(jié)ECM降解的主要途徑，在肝纖維化形成和發(fā)展中起重要作用[49]。纖溶酶原激活物/纖溶酶系統(tǒng)位于纖維溶解系統(tǒng)的上游，能夠直接降解基質(zhì)成分，并通過激活MMP間接抑制ECM的沉積[49]。越來越多的研究表明纖溶酶原激活物/纖溶酶系統(tǒng)在調(diào)節(jié)ECM降解和沉積之間的平衡中發(fā)揮關鍵作用[49-51]。Hu等[49]研究發(fā)現(xiàn)，下調(diào)PAI-1表達水平后肝纖維化得到明顯改善，原因可能是下調(diào)PAI-1表達水平后，MMP-9及MMP-13表達水平上調(diào)，TIMP-1的表達水平下調(diào)，從而促進ECM降解。還有學者將重組腺病毒質(zhì)粒pAdshPAI感染HSC-T6細胞后發(fā)現(xiàn)，Col1、Col3、α-SMA、TGF-β1和TIMP-1 mRNA表達水平明顯降低，MMP-9和MMP-13 mRNA表達水平明顯上調(diào)，肝細胞增殖加快，凋亡減少，HSC增殖減慢，G0/G1期時相HSC-T6細胞數(shù)目明顯增高，S期細胞數(shù)百分比明顯降低，提示沉默PAI-1可誘導HSC-T6細胞周期靜止，抑制其增殖，減緩肝纖維化進程[51]。

3.2 調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶/基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的平衡 肝纖維化的特征是ECM過度積累，主要病因是ECM生成的增加和ECM降解的減少。ECM降解減少是由于MMP和TIMP之間的不平衡，MMP幾乎能降解ECM中的各種蛋白成分，從而調(diào)節(jié)ECM降解過程。肝損傷后，TIMP-1過表達導致ECM降解減少[4]。Li等[52]研究發(fā)現(xiàn)，沉默MMP-2可導致HSC存活率降低，纖維形成標志物減少。TIMP-1在活化的HSC中呈高表達，并通過抑制基質(zhì)降解和細胞凋亡促進肝纖維化，采用小干擾RNA沉默TIMP-1后可以減少HSC的增殖和纖維形成[52]。另有學者靶向沉默大鼠體內(nèi)TIMP-1和TIMP-2的表達后發(fā)現(xiàn)，其上游細胞因子PDGF及其受體的表達下調(diào)，進而導致p-ERK1/2蛋白的表達水平降低，最終抑制HSCs活化增殖、減輕肝纖維化[53]。

4 小干擾RNA技術調(diào)控其他作用因子

核因子E2相關因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)是調(diào)節(jié)機體氧化還原反應的重要轉(zhuǎn)錄因子，能調(diào)節(jié)多種抗氧化基因的表達，研究發(fā)現(xiàn)，Nrf2信號通路通過調(diào)控肝臟的氧化損傷在肝纖維化的防治中發(fā)揮重要作用[54]。Prestigiacomo等[55]采用小干擾RNA技術敲除HSC細胞的Nrf2后發(fā)現(xiàn)，HSC被激活，HSC遷移及增殖增加，α-SMA和ECM表達水平升高。另有學者發(fā)現(xiàn)Nrf2小干擾RNA可使TGF-β1誘導的活性氧物質(zhì)增多，促進PAI-1表達水平及Smad3的磷酸化水平增高，促進肝纖維化，提示Nrf2在肝纖維化形成與發(fā)展過程中有重要作用[56]。

自噬可以促進HSC活化，腫瘤相關基因H19參與了自噬的調(diào)控,其過表達可促進HSC的活化，而長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,LncRNA)-H19已經(jīng)被證實是調(diào)控肝纖維化發(fā)生發(fā)展的重要分子[57]。有研究顯示，胰島素樣生長因子結合蛋白相關蛋白1(insulin-like growth factor binding protein-related protein 1，IGFBPrP1)是一種新發(fā)現(xiàn)的致肝纖維化因子，將小干擾RNA-H19轉(zhuǎn)入IGFBPrP1過表達的小鼠的肝星狀細胞株16 h后，IGFBPrP1 mRNA、LC3B mRNA、α-SMA mRNA的表達水平受到抑制，肝纖維化減輕[58]。此外，HSC的活化往往伴隨著脂滴的消失，LncRNA-H19與脂肪酸、膽汁酸和葡萄糖等多種代謝方式有關，將小干擾RNA LncRNA-H19轉(zhuǎn)入HSC后，HSC的活化被抑制，HSC中的脂滴含量增加，這提示降低LncRNA-H19的水平，可以恢復HSC脂滴含量,抑制HSC活化,改善肝纖維化[57]。

近年來，很多學者應用小干擾RNA技術減輕肝纖維化程度，如設計了人骨形成蛋白9小干擾RNA、生長因子受體結合蛋白2小干擾RNA、上皮細胞黏附分子小干擾RNA、成纖維細胞生長因子受體小干擾RNA、腫瘤壞死因子α誘導蛋白8樣分子2小干擾RNA，在動物實驗中均發(fā)現(xiàn)上述小干擾RNA技術具有很好地減輕肝纖維化的效果[59-63]。

5 小 結

肝纖維化是多種病因?qū)е碌母螕p傷之后的修復代償過程，是疾病進展到肝硬化甚至肝癌的可逆階段。應用小干擾RNA技術沉默肝纖維化過程中的關鍵基因，可以抑制HSC活化及增殖，促進HSC凋亡，減少ECM沉積，從而逆轉(zhuǎn)肝纖維化。但現(xiàn)階段小干擾RNA技術的應用大多限于細胞與動物實驗，尚未進行臨床試驗，其在臨床上的應用效果如何還有待進一步深入研究。