三重四極桿質(zhì)譜測(cè)定玉米中的3種嘔吐毒素和玉米赤霉烯酮

□ 王烽凡 路 峰

（本溪市檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù)中心（本溪市國(guó)家糧油質(zhì)量監(jiān)測(cè)站），遼寧 本溪 117000）

玉米赤霉烯酮又被稱為F-2毒素，用ZON簡(jiǎn)寫，且有雌激素樣的作用，不僅能使動(dòng)物中毒，還可以讓動(dòng)物的繁殖機(jī)能出現(xiàn)異常，甚至死亡。2017年，我國(guó)頒布的《食品中真菌毒素限量》國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定谷物及其制品限量指標(biāo)為60μg/kg。嘔吐毒素是屬于單端孢霉烯族的化合物，又被稱為脫氧雪腐鐮刀菌烯醇，用DON簡(jiǎn)寫。由于它們具有很高的細(xì)胞毒素及免疫抑制性質(zhì)，因此，對(duì)人類及動(dòng)物的健康構(gòu)成了威脅，特別是對(duì)免疫功能具有明顯的影響。1998年，在國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)公布的評(píng)價(jià)報(bào)告中，嘔吐毒素被列為三類致癌物。歐盟要求嘔吐毒素含量要小于0.75mg/kg，中國(guó)飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求飼料原料低于5mg/kg。本文通過建立了一種將超高效的液相色譜儀與三重四極桿質(zhì)譜儀聯(lián)合使用的方法，實(shí)現(xiàn)了玉米中玉米赤霉烯酮及三嘔吐毒素的同時(shí)測(cè)定。

一、實(shí)驗(yàn)部分

（一）實(shí)驗(yàn)儀器

本實(shí)驗(yàn)使用島津型號(hào)LC-30A的超高效液相色譜儀與型號(hào)LCMS-8045的三重四極桿質(zhì)譜儀的聯(lián)用系統(tǒng)。詳細(xì)配置：CBM-20A系統(tǒng)控制器，DGU-20A5在線脫氣機(jī)，SIL-30AC自動(dòng)進(jìn)樣器，CTO-30AC柱溫箱，LC-30AD×2輸液泵，Lab Solutions Ver.5.93色譜工作站，LCMS-8045三重四極桿質(zhì)譜儀。

（二）分析條件

液相條件：色譜柱：ShimadzuShim-packXRODSIII2.0mmI.D.×75mmL.，1.6μm；流動(dòng)相：A－10mMNH4Ac水溶液，B－乙腈；進(jìn)樣體積：10μL；柱溫：40℃；流速：0.3mL/min；洗脫方式：梯度洗脫，B相的初始濃度10%，梯度洗脫的時(shí)間程序：2.00min，B相60%；4.00min，B相95%；4.50min，B相100%；5.50min，B相100%；5.70min，B相10%；8.00min，STOP。質(zhì)譜條件：霧化氣氮?dú)?.0L/min，碰撞氣氬氣，干燥氣氮?dú)?5L/min，離子源ESI，負(fù)離子掃描；掃描模式：MRM；離子源接口電壓-3.5kV；脫溶劑管溫度250℃；加熱模塊溫度400℃；延遲時(shí)間：3ms；駐留時(shí)間：20ms。

（三）樣品的制備

1.配制標(biāo)準(zhǔn)溶液

用乙腈將單標(biāo)儲(chǔ)備液制成密度為1000ng/mL的混標(biāo)溶液，然后用水將其稀釋為濃度5、10、25、50、75、100（單位：ng/mL）的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

2.樣品的前處理

將2.5g玉米樣品置于40mL離心管中，然后加入乙腈-水（86+14）溶液10mL。在超聲波下超聲60min，15000rpm下離心15min。吸取上層清液5mL過自制新型混合柱，用5mL甲醇洗脫混合柱，抽干后合并洗脫液于10mL小試管中，用氮?dú)庠?0℃下吹干。用乙腈/水（10mL的醋酸銨水溶液）（=50/50），定容至1mL，渦旋30s，用0.22μm微孔濾膜過濾，進(jìn)樣測(cè)試。

（四）梯度洗脫時(shí)間程序

0～4.00minB相60%；4.00～4.50minB相95%；4.50～5.70minB相100%；5.70～8.00minB相60%.

二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

（一）混合標(biāo)準(zhǔn)樣品MRM色譜圖（見圖1）

（二）線性關(guān)系

4種毒素校準(zhǔn)曲線的參數(shù)：ZON，Y=（0.0141913）X+（-0.0141720），0.9998；DON，Y=（0.0206871）X+（-0.0430373），0.9987；3-ADON，Y=（0.0223806）X+（-0.00177429），0.9995；15-ADON，Y=（0.0116655）X+（-0.0280959），0.9987。

（三）檢出限及定量限

檢出限（ng/mL）：ZON，0.29；DON，0.31；3-ADON，0.02；15-ADON，0.51。

定量限（ng/mL）：ZON，0.88；DON，0.94；3-ADON，0.06；15-ADON，1.53。

（四）精密度

（五）回收率

以空白玉米樣配制加標(biāo)濃度為10ng/mL的加標(biāo)溶液，得到色譜圖。4種毒素ZON、DON、3-ADON及15-ADON的加標(biāo)回收率分別為116.41%、114.71%、104.38%、117.71%。

名稱 RSD%（5ng/mL） RSD%（10ng/mL） RSD%（100ng/mL）R.T Area R.T Area R.T Area ZON 0.38 2.09 0.08 3.49 0.15 2.17 DON 1.20 1.83 0.71 0.67 0.27 2.27 3-ADON 0.50 4.85 0.36 1.45 0.16 2.94 15-ADON 0.41 4.89 0.44 2.10 0.10 1.47

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

本文通過建立了一種將超高效的液相色譜儀與三重四極桿質(zhì)譜儀聯(lián)合使用同時(shí)測(cè)定玉米中玉米赤霉烯酮及3種嘔吐毒素的方法。在濃度為5～150ng/mL的范圍內(nèi)，4種毒素的線性均良好，濃度為10ng/mL毒素加標(biāo)的回收率良好；通過不同濃度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差數(shù)據(jù)可以判斷儀器具有良好的精密度；滿足ZON、DON、3-ADON及15-ADON的分析要求。