L-肉堿對草龜攝食生長和身體組成的影響

武 帆，程 麗，印麗云，楊振才

（1.河北師范大學生命科學學院，河北石家莊 050024；2.青島科技大學化學與分子工程學院，山東青島 266042）

草龜（Chinemys reevesiis），又名烏龜、泥龜和金龜等，隸屬于爬行綱、龜鱉目、龜科，具有較高的食用、藥用和觀賞價值。草龜喜靜不喜動，在高密度養殖中活動量更小，而市售龜飼料的蛋白質、脂肪含量和能值較高，過剩的能量轉化為脂肪，沉積在肝臟、腹腔或四肢內，使肝臟發生脂肪變性，引起脂肪肝病變。因此，需要調節脂肪代謝、降低身體內脂肪含量、促進其健康生長。

研究表明，L-肉堿作為一種綠色安全的飼料添加劑，具有一定的降脂、促生長等作用。水產動物高密度養殖可能會導致其內源性L-肉堿合成能力的降低，從而使體內現有的L-肉堿水平不能滿足生長代謝的需求，進而影響動物的正常生理功能（Li 等，2019）。因此越來越多的水產配合飼料中添加L-肉堿，以求滿足水產動物基本的營養代謝需求。然而，肉堿對不同水產動物的作用不同（杜震宇等，2002），有些種類的飼料中添加外源性L-肉堿可顯著提高生長性能和飼料效率，如銀鱸（bidyanus bidyanus）、虹 鱒（Oncorhynchus mykiss）和異育銀鯽（Carassius auratus gibelio）等（Yang 等，2012；Dikel 等，2010；章世元等，2009）；也有些種類的生長沒有明顯改善，如里海擬鯉（Rutilus rutilus caspicus）和羅非魚（Oreochromis spp）等（Kordi 等，2012；杜震宇等，2002）。目前，L-肉堿對水產動物影響的研究主要集中在魚類，其對水生爬行動物的研究鮮見報道。因此，本試驗以草龜為試驗對象，測定飼料中添加不同劑量的L-肉堿對草龜攝食生長和身體組成方面的影響，為肉堿在草龜飼料中的應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗設計 本研究設置飼料中L-肉堿添加水平為0、100、200、300、400 mg/kg 和500 mg/kg的6 個試驗組（L0 組為對照組，L1～L5 組為肉堿添加組），每個試驗組設置8 個重復養殖缸，每個重復缸內養殖10 只龜，共480 只龜。

1.2 試驗材料 試驗所用草龜稚龜購自湖北省天門市草龜養殖場，初均重為（8.28±0.54）g，共計1000 只。試驗所用基礎飼料組成及營養水平見表1。為測定消化率，在飼料中加入0.1%的Y2O3作為標記物。將原料粉碎、過80 目篩，采用雙螺桿膨化機（北京現代機械技術有限公司）調制、擠壓、膨化成顆粒，穩定干燥后噴涂豆油。

表1 試驗飼料組成及主要營養水平

1.3 試驗條件 養殖試驗在河北師范大學水產動物養殖實驗室進行。試驗用龜被養殖在直徑為60 cm，高為70 cm 的48 個養殖缸中，缸內均配有電子溫控儀，以保證試驗期間的水溫維持在（30±0.1）℃。為保持水質清潔，每天換水兩次，試驗用水為消毒、曝氣之后的自來水。整個試驗過程在室內弱光條件下進行，每天僅在收集殘餌時開日光燈，水面光照強度約為120 lux。

1.4 試驗方法 用高錳酸鉀濃度為20 mg/kg 的藥液對草龜進行20 min 藥浴消毒處理，挑選大小均一，活動力強的480 只草龜隨機分到各個養殖缸中進行為期兩周馴化。馴化過程與正式試驗過程的條件和飼料投喂情況一致。馴化結束后禁食1 d 稱重，獲得初始體重。每天定量、飽足投喂三次（8∶00、12∶30、17∶00），投喂30 min 后用虹吸管將剩余餌料吸出，收集于干凈并已稱干重的紗絹袋中，置于65 ℃鼓風干燥箱中恒溫烘干，稱重并記錄殘餌干重。為矯正殘餌量，在相同試驗環境下沒有草龜的缸中投入定量飼料，相同時間后用相同的方法收回，計算溶失率。根據投餌量和矯正的殘餌量計算草龜的攝食量。養殖期為56 d，結束后禁食1 d 稱重，獲得終末體重。試驗期間，L1 組第8 個養殖缸因電子溫控儀出現故障，故提前終止了該缸的試驗。

1.5 龜體營養成分和Y2O3的分析 干物質的測定方法是將飼料樣品在105 ℃的烘箱（上海博迅醫療生物有限公司）中烘干至恒重，龜體水分在65 ℃的烘箱中烘至恒重；粗蛋白質采用Foss 全自動凱氏定氮儀Kjeltec8420 測定（Foss，USA）；粗脂肪采用索氏抽提法-石油醚提取測定；能量采用Parr 6300 全自動氧彈量熱儀（Parr，USA）測定；粗灰分采用馬弗爐（天津泰斯特儀器有限公司）灼燒法測定。

根據Refstie 等（1997）的方法消化樣品后，采用ICP-MS 電感耦合等離子質譜儀X Series 2（美國賽默飛）測定飼料和糞便中釔的含量，計算消化率。

1.6 數據處理及統計分析

攝食率/（%/d）=It/[（mt+m0）/2×t]×100；

總消化率/%=（1-飼料中Y2O3含量/糞便中Y2O3含量）×100；

特定生長率/（%/d）=（lnmt-lnm0）/t×100；

相對生長率/（%/d）=（mt-m0）/m0/t×100；

餌料系數=It/（mt-m0）。

采用Statistica 10.0 軟件進行單因素方差分析（One-Way ANOVA），各試驗組間的差異采用Duncan’s 多重比較，各肉堿添加組與對照組的差異采用LSD 檢驗，P ＜0.05 表示差異顯著。L-肉堿添加量與特定生長率之間的定量關系采用多項式回歸分析方法，顯著水平為P ＜0.05。試驗結果以“平均值±標準差”表示。

2 結果

2.1 飼料中L-肉堿添加量對草龜攝食生長的影響 如表2 所示，各組之間的特定生長率（F（5，41）=2.572，P=0.04102 ＜0.05）和相對生長率（F（5，41）=2.468，P=0.04811 ＜0.05）具有顯著差異，與對照組相比均有不同程度的升高，其中L2 組最高，其次是L1 組，均顯著高于L0 組和L4 組。試驗L2、L1 組的特定生長率和相對生長率較對照組分別提高8.61%、8.13%、15.54%、14.79%（P ＜0.05）。攝食率（F（5，41）=1.287，P=0.2883＞0.05）、總消化率（F（5，12）=1.264，p=0.3405＞0.05）和餌料系數（F（5，41）=0.5045，P=0.7711＞0.05）在各組之間無顯著性差異。草龜的特定生長率與L-肉堿的添加量回歸關系顯著（F（3，43）=4.400，P=0.009），回歸方程為y=22.320x3-17.530x2+3.469x+2.084，解得特定生長率最高點對應的L-肉堿添加量為0.1324 g/kg，即132.4 mg/kg。

表2 飼料中L-肉堿添加量對草龜攝食生長的影響

2.2 飼料中L-肉堿添加量對草龜體成分和肝臟粗脂肪含量的影響 如表3 所示，添加不同梯度的L-肉堿對龜體的水分（F（5，24）=0.1153，P=0.9878＞0.05）、粗蛋白質（F（5，24）=0.8130，P=0.5521＞0.05）、粗脂肪（F（5，24）=0.03807，P=0.9991＞0.05）、粗灰分含量（F（5，24）=0.3101，P=0.9020 ＞0.05）和能值（F（5，24）=0.07165，P=0.9959＞0.05）均無顯著影響（P ＞0.05）。添加不同梯度L-肉堿會顯著影響肝臟粗脂肪含量（F（5，12）=3.161，P=0.04753 ＜0.05），L3 組的肝臟粗脂肪含量較L0 組比降低25.72%（P ＜0.05）。

表3 飼料中L-肉堿添加量對草龜體成分和肝臟粗脂肪含量的影響

3 討論

3.1 飼料中添加L-肉堿對草龜攝食生長的影響成年水產動物的體內較少出現肉堿缺乏的情況，但對于尚未發育完全的幼體，自身的肉堿合成不能滿足機體的正常生長需要，會限制其快速的生長。在這種情況下，適量添加外源性L-肉堿顯得尤為重要。

在飼料中添加外源性L-肉堿，可通過提高水產動物的飼料利用率來促進生長（Yang 等，2012；章世元等，2009；汪軍濤等，2009）；研究表明，其對吉富羅非魚（Oreochromis niloticus）、黃河鯉魚（Cyprinus carpio）和彭澤鯽等（茍庚午等，2016；郭黛健等，2011；羅萍等，2006）均有促生長作用，但餌料系數差異不大；還有少數水產動物通過提高攝食率來促進生長（Ma 等，2008；Twibell 等，2000）。但是L-肉堿的添加對一些魚類生長并沒有促進作用，如里海擬鯉、大菱鲆（Scophthalmus maximus）和雜交羅非魚成魚等（Kordi 等，2012；劉興旺等，2012；Yang 等，2009）。L-肉堿對水產動物生長性能的影響，與水產動物的種類（杜震宇等，2002）、試驗期間所處的生長階段（Ozório 等，2001）、水質參數（Li 等，2019）、飼料成分以及養殖期間所處環境（杜震宇等，2002）等有關。

本試驗在配合飼料中添加L-肉堿，顯著提高了草龜的特定生長率和相對生長率，其中L1 組和L2 組均顯著高于對照組。以特定生長率為標準，通過非線性回歸可以得出草龜配合飼料中L-肉堿的適宜添加量為132.4 mg/kg。總之，在草龜配合飼料中添加L-肉堿促進了草龜的生長，但并未對攝食率和餌料系數造成顯著影響。本試驗結果產生的原因可能是添加外源性L-肉堿可促進體內物質的代謝，足量的L-肉堿使草龜充分發揮了最大氧化供能能力，使新陳代謝率提高進而提高生長速度（張明輝等，2008）。

3.2 飼料中添加L-肉堿對草龜體成分和肝臟粗脂肪含量的影響 補充L-肉堿可增強脂肪酸的氧化，從而降低機體脂肪含量。研究表明，飼料中添加L-肉堿能夠降低不同魚類的脂肪含量，并增加蛋白質含量，或降低組織和魚體的蛋白質分解代謝，表現出顯著的蛋白質儲留效果（郭黛健等，2011；Chen 等，2010；Jalali 等，2010）。但也有研究報道，在飼料中添加L-肉堿并未對體成分產生顯著性影響。如對吉富羅非魚幼魚、大菱鲆和黑鯛幼魚（Sparus macrocephalus）的研究（孫蕾，2016；劉興旺等2012；彭士明等2010）。與這些研究的結果相似，本試驗在配合飼料中添加不同梯度的L-肉堿也未對草龜的體成分產生顯著性影響。但與對照組相比，試驗組龜體粗蛋白質含量均有不同程度的增加，因此，在草龜配合飼料中添加L-肉堿可能對節約蛋白質有積極作用。

肝胰臟是魚類進行脂肪酸β 氧化和調節脂肪蓄積的主要器官（田娟等，2009），而L-肉堿作為脂肪酸氧化的關鍵因子，可促進脂肪酸的氧化，避免脂肪在肝臟中的堆積和脂肪肝癥狀的發生（楊文平，2017）。如在黑鯛幼魚、尼羅羅非魚和羅非魚的研究中發現（彭士明等，2010；Chen 等，2010；杜震宇等，2002），添加外源性L-肉堿可降低肝臟的粗脂肪含量。吉富羅非魚和奧尼羅非魚肝臟粗脂肪含量隨L-肉堿含量的增加而增加（茍庚午等，2016；黃凱等，2010）。本試驗在草龜飼料中添加外源性L-肉堿后，顯著降低了肝臟的粗脂肪含量，其中L3 組的肝臟粗脂肪含量最低，顯著低于對照組，其余各組間并無顯著性差異。總之，添加適量的L-肉堿可起到降低肝臟粗脂肪含量的效果，對蛋白質分解有節約作用。但添加過量的L-肉堿可能會加重肝臟的代謝負荷，從而提高肝臟的粗脂肪含量。