中藥復方抑菌液的體外抑菌性能研究

王佳慧 張紅強 張佳美 陳 躍

（1.山西振東制藥股份有限公司，山西長治，047100；2.山西振東健康生物科技股份有限公司，山西長治，047100）

化學防腐劑以其價格低廉、防腐效果好而被廣泛應用。但現己發現，它們對人們的身體健康有不良影響，應嚴格限制其在產品中的用量。因此，開發高效、廣譜、安全、穩定且便宜的新型天然防腐劑具有重要的意義[1]。

我國中草藥資源豐富、歷史悠久，現代研究發現，傳統中草藥具有顯著的抗菌、抑菌作用。同現今廣泛使用的抗生素以及化學防腐劑相比，中草藥中所含的抗抑菌物質具有毒副作用小、安全性高等優點。因此，以中草藥提取物代替化學防腐抑菌劑，已成為諸多領域研究的新熱點[2]。

本文主要研究不同提取方法提取的清熱解毒類、清熱燥濕類藥物的中藥復方制劑對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌的體外抑菌效果。以《中國藥典》的相關記載為依據，選取板藍根、牛蒡子、蒲公英、公丁香、金銀花、苦參、蛇床子、甘草為中藥復方進行抑菌效果研究。其抑菌作用可能是由于這些藥物中富含的黃酮類、生物堿類、有機酸類、酚類等中藥活性成分能協同破壞細胞膜、細胞壁，影響能量代謝，抑制菌體蛋白質和核酸的合成[3]。

本研究的目的在于篩選長效廣譜高效的中藥抑菌液。所用供試菌分別代表G+細菌群，G-細菌群、酵母菌和絲狀真菌群，具有菌群代表性，每次試驗重復3次，試驗結果具有代表性和可靠性[4]。

1 材料

1.1 菌株

金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，白色念珠菌均由中國食品藥品檢定研究院提供。

1.2 試劑

改良馬丁瓊脂培養基、營養瓊脂培養基、營養肉湯培養基均由北京三藥科技開發公司提供，無水硫酸氫二鈉由國藥集團化學試劑有限公司提供，氯化鈉、磷酸二氫鉀由天津市永大化學試劑有限公司提供。

1.3 中藥

苦參、蛇床子、金銀花、丁香、蒲公英、板藍根、牛蒡子、甘草均由山西道地中藥材有限公司提供。

2 方法

2.1 中藥提取液制備

2.1.1 中藥組方

板藍根20 g、牛蒡子20 g、蒲公英20 g、公丁香40 g、苦參40 g、蛇床子10 g、金銀花10 g、甘草10 g。

2.1.2 中藥提取

（1）水提液制備：按照配方稱取中藥，第一次加8倍于中藥的去離子水浸泡1 h，加熱至微沸，煎煮1.5h，用200目篩濾過；煎煮2次，合并所得藥液，濃縮至相應體積，使其終濃度為1.00 g/ml，100 ℃30 min滅菌，裝瓶并置于4 ℃冰箱保存待用。

（2）醇提液制備：按照配方稱取中藥，分別加入20%、40%、60%、80%的酒精溶液，加熱至微沸，回流提取1.5 h，用200目篩濾過；加熱回流提取2次，合并所得藥液，60 ℃，-0.08 MPa條件下減壓濃縮將酒精除去，使其終濃度為1 g/ml，100 ℃、30 min滅菌，裝瓶并置于4 ℃冰箱保存待用。

2.2 抑菌率檢測

2.2.1 菌種制備

在無菌條件下，將金黃色葡萄球菌、大腸桿菌接入對應的試管斜面營養瓊脂培養基上，于37 ℃恒溫箱內培養48 h，然后置于0~4 ℃冰箱中冷藏備用。分別用接種環挑取少許菌體置于裝有9 ml無菌生理鹽水的試管內，振蕩搖勻，制成菌懸液。調整菌懸液濃度，使其含菌量為106 cfu/ml[5]。

在無菌條件下，將白色念珠菌接入相對應的試管斜面改良馬丁瓊脂培養基上，于28 ℃恒溫箱內培養72 h，然后置于0~4 ℃下冷藏備用。分別用接種環挑取少許菌體置于裝有9 ml無菌生理鹽水的試管內，振蕩搖勻，制成菌懸液。調整菌懸液濃度，使其含菌體量為105 cfu/ml。

2.2.2 抑菌檢測方法

按照《一次性使用衛生用品衛生標準》[6]GB15979-2002進行抑菌性能檢測，每組實驗重復3次。

2.2.3 穩定性測試方法

選取對3種菌的抑菌效果都比較好的2、3、4、5號提取液，進行抑菌穩定性測試。

取以上中藥提取液各2份，一份加入0.5%的D-異抗壞血酸鈉，一份不加，分別放入溫度為37 ℃、濕度75%的恒溫箱內3個月。最后，取出恢復至室溫，再進行同樣抑菌率測試。通過比較封存前后抑菌率的變化，評價其抑菌穩定性。

2.2.4 評價標準

（1）抑菌率≥50%～90%，產品有抑菌作用，抑菌率≥90%，產品有較強抑菌作用。

（2）樣品經37 ℃加速試驗，其殺菌率或抑菌率達到（1）中規定的標準值，樣品抑菌作用在室溫下至少保持2年。

3 結果分析

3.1 不同提取方法所得中藥液的抑菌率結果

見表1～表3。

表1 對白色念珠菌的抑菌率結果

表2 對金黃色葡萄球菌的抑菌率結果

表3 對大腸桿菌的抑菌率結果

水提液對白色念珠菌無抑菌效果，醇提液對白色念珠菌的抑菌率均＞50%，表明醇提液抑菌效果優于水提液，且提取介質中酒精濃度含量越高抑菌效果越好。

本文收治的對象為80例胰腺癌患者，收治的時間為2017年9月—2018年9月，根據電腦隨機的方式，將觀察對象分為兩組，即常規組、研究組各40例。研究組中男性觀察對象20例，女性觀察對象20例，年齡30～77歲，平均（53.3±5.5）歲；病程3個月～3年，平均（19.1±2.4）個月。常規組中男性觀察對象22例，女性觀察對象18例，年齡30～78歲，平均（53.5±5.4）歲；病程2個月～3年，平均（19.2±2.2）個月。兩組資料客觀對比，P值＞0.05，無差異統計學意義，可分組研究。均簽署研究同意書；通過醫學倫理委員會審查；經病理檢查予以確定。排除精神異常、意識障礙、心腦血管嚴重疾病者。

水提液對金黃色葡萄球菌的抑菌率＞50%，表明有抑菌效果，其余4種醇提液抑菌率＞90%，抑菌效果較強，醇提效果優于水提。

5種提取液對大腸桿菌的抑菌率＞90%，抑菌效果較強，不同提取方法對大腸桿菌的抑菌率無明顯區別。

以上實驗結果表明，水提液對細菌的抑菌效果較好，是因為蒲公英、板藍根、甘草等富含的多糖類物質對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌有抑制作用，而對白色念珠菌的抑菌效果不明顯。隨著提取介質中酒精含量增高，黃酮類、生物堿類、酚類、有機酸類物質含量增加，這幾類物質對這3種菌均有較好的抑制作用。

3.2 抑菌穩定性結果

見表4～表6。

表4 對白色念珠菌的抑菌結果

表5 對金黃色葡萄球菌的抑菌結果

表6 對大腸桿菌的抑菌率結果

不同濃度的酒精提取液對白色念珠菌的抑菌均＜50%，沒有抑菌效果，抑菌穩定性差。

不同濃度的酒精提取液對金黃色葡萄球菌抑菌率均＞50%，抑菌穩定性較好。

不同濃度的酒精提取液對大腸桿菌抑菌率均＞90%，抑菌穩定性好。

由以上結果可知，不同濃度的酒精提取液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的穩定性較好，對白色念珠菌的抑菌穩定性與提取介質中乙醇含量成反比，乙醇含量越高抑菌穩定性越差。可能是因為多糖類物質性質較穩定，因此對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌有較好的抑菌效果，而黃酮類、生物堿類、酚類、有機酸類等物質在高溫條件下易被氧化、分解，破壞了原來的分子結構，因此對白色念珠菌的抑菌效果下降。

3.3 加入抗氧化劑后的抑菌穩定性結果

見表7～表9。

表7 對白色念珠菌的抑菌結果

表8 對金黃色葡萄球菌的抑菌率結果

表9 對大腸桿菌的抑菌率結果

2號、3號兩個低濃度酒精提取液對白色念珠菌的抑菌率均＜50%，沒有抑菌效果，穩定性較差，4號、5號兩個高濃度酒精提取液對白色念珠菌的抑菌率均＞90%，抑菌穩定性明顯提高。

不同濃度酒精提取液對金黃色葡萄球菌抑菌率均＞90%，抑菌穩定性好。

不同濃度酒精提取液對大腸桿菌抑菌率均＞90%，抑菌率穩定性好。

由以上結果可知，加入抗氧化劑D-異抗壞血酸鈉后，對3種菌的抑菌穩定性總體上逐步提高。對白色念珠菌的影響較為明顯，當溶劑為60%的酒精提取液時，抑菌穩定性最好，這可能是因為D-異抗壞血酸鈉的還原性要強于黃酮類、酚類等物質，因此能夠有效地減緩黃酮類、酚類等物質被氧化，延長其抑菌作用。

4 結論與探討

用60%的酒精對復方中藥提取2次所得中藥提取液，對白色念珠菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌作用2 min，各次抑菌率均＞90%，作用效果最好。現代藥理學研究證明，中草藥中的黃酮、生物堿、有機酸、酚類等成分，對多種致病菌具有抑制作用，加入抗氧化劑（D-異抗壞血酸鈉）后，能有效保護還原基團，使提取液對3種菌的抑菌穩定性顯著增強，該提取液在室溫下的抑菌效果至少可保持2年。

該中藥復方抑菌液，具有抑菌效果好，且毒副作用小的優勢，用于個人護理用品中不僅具有防腐的作用，同時兼具抗氧化、去皺、美白等功效。除此之外，也可開發成消毒類產品，用于疫情期間新冠病毒的防治。鑒于人們對綠色健康產品的不斷追求，相信此類純天然抑菌液將會受到越來越多的關注。