牙膏對口腔硬組織安全評價(GB/T 40002-2021)

前言

本文件按照GB/T 1.1-2020《標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。

請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。

本文件由中國輕工業聯合會提出。

本文件由全國口腔護理用品標準化技術委員會(SAC/TC 492)歸口。

本文件起草單位：黑龍江省輕工科學研究院、廣州寶潔有限公司、好來化工(中山)有限公司、廣州薇美姿實業有限公司、江蘇雪豹日化有限公司、福建愛潔麗日化有限公司、高露潔棕欖(中國)有限公司、四川大學華西口腔醫院、空軍軍醫大學口腔醫學院、中國口腔清潔護理用品工業協會。

本文件主要起草人：孫東方、戴雅麗、肖梅、宋碩、何琪瑩、鄭衛、陳萬金、陳敏珊、徐志良、謝柳青、胡德瑜、趙信義。

引言

在我國生產和銷售的牙膏都參考執行GB/T 8372的要求，目前對于牙膏產品pH的要求是5.5～10，pH低于5.5的牙膏，產品責任方應提供按標準方法對口腔硬組織進行安全性評價的試驗報告。 建立一個科學有效的硬組織安全評價方法，對于規范低pH值產品的安全評估顯得尤為重要。

ISO 11609∶2017中采用的磨損值測試方法，有放射性同位素實驗對應的RDA/REA法和表面輪廓儀對應的RDA-PE/REA-PE的兩種測試方法。其中RDA/REA法從提出到現在已有五六十年實踐歷史，方法成熟可靠，是國際口腔行業公認的標準方法。

本文件規定的循環法，是在國際業界公認的傳統的脫礦再礦化測試方法上進行的改進，基于使用顯微硬度儀測定口腔護理產品處理的口腔硬組織的表面硬度改變，從而評價口腔護理產品對口腔硬組織的作用是否安全，此方法在國際知名學術會議(2016 IADR)上得到了專家的一致認可。

1 范圍

本文件描述了牙膏對口腔硬組織的安全評價的方法。

本文件適用于采用表面輪廓法和循環法用于牙膏對口腔硬組織的安全評價。

2 規范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB/T 3358.1 統計學詞匯及符號 第1部分：一般統計術語與用于概率的術語

GB/T 4340.2 金屬材料 維氏硬度試驗 第2部分：硬度計的檢驗與校準

GB/T 6682 分析實驗室用水規格和試驗方法

GB/T 35919 口腔清潔護理用品分類和術語

QB/T 4780 日用陶瓷器釉面維氏硬度測定方法

ISO 11609∶2017 牙科學 牙膏 要求、試驗方法和標記(Dentistry - Dentifrices - Requirements, test methods and marking)

3 術語和定義

GB/T 3358.1和GB/T 35919界定的術語和定義適用于本文件。

4 表面輪廓法

按照ISO 11609∶2017附錄B的要求執行。

5 循環法

5.1 總則

本方法是基于使用顯微硬度儀測定口腔護理產品處理的口腔硬組織的表面硬度改變，從而評價口腔護理產品對口腔硬組織的作用是否安全。

本方法選擇的是非常嚴苛的實驗條件。特殊情況也可采用更為復雜、更接近臨床條件的試驗方法。

5.2 裝置

5.2.1 顯微硬度儀

顯微硬度儀的要求按照GB/T 4340.2規定的執行，本方法中試驗負載范圍應滿足0.05kg～0.5kg。

5.2.2 磨拋設備

具有連續粒度變化的碳化硅研磨盤(最細可達P1200)，能使用金剛石漿料進行樣本拋光和/或其等效作用自動研磨拋光裝置。

注：還可使用其他符合標本基線要求的牙釉質和牙本質拋光方法，如金剛石粉法。

5.2.3 電熱恒溫干燥箱

可控制溫度恒定在37℃±2℃。

5.3 牙釉質和牙本質標本制備

使用無齲壞的、已萌出或未萌出的人恒牙，或者牛牙。這些牙齒的大小需要滿足如下實驗所需。使用合適的器具(如刮匙、手術刀等)去除所有的軟組織殘留物，用0.1%麝香草酚滅菌和存放牙齒。

注1：1000mL 的0.1%(質量%)麝香草酚配制方法：稱取1g麝香草酚溶于1mL無水乙醇，然后加水定容至1000mL。

注2：如果已確知不改變牙釉質和牙本質的理化性質，還可使用其他抗菌和存放溶液。

用牙鉆或切盤在牙釉質牙本質連結處將其切成兩部分。用牙冠部分制備牙釉質標本，用牙根部分制備牙本質標本，標本的尺寸不應小于3mm×3mm×3mm。

注3：根據牙冠和牙根的尺寸和形狀，一個牙齒最多可制備兩個標本。

將牙釉質和牙本質牙塊分別倒置放在模具中進行包埋，需要將標本的外表面朝下。將標本嵌入在環氧樹脂中，確保標本平坦放置，與樹脂表面平行。已包埋完成的牙本質及牙釉質標本，用一系列粒度的碳化硅砂紙磨拋及金剛石磨拋膏拋光至牙面光滑均勻，無肉眼可見裂痕與瑕疵。磨拋試劑的使用不能影響牙齒表面的理化性質。

注4：宜推薦依次使用P320、P600、P800、9μm、3μm和1μm的磨拋條件。

使用顯微硬度儀測量維氏硬度，通過硬度值對標本進行篩選。測量條件為：負荷300g，持續15s。每個樣品測4點，測量位置需如圖1所示。測量點距牙塊邊緣距離不應小于0.5mm。 同時需均勻分布4個測量點，各測量點之間的間距a和間距b都不應小于1mm。樣品硬度為4個點測量值的平均值。可納入實驗的牛牙本質標本初始維氏表面硬度范圍在30HV～50HV，人牙本質標本初始維氏表面硬度范圍在30HV～70HV。牛牙及人牙牙釉質標本的維氏表面硬度范圍在250HV～350HV。不論牙釉質還是牙本質，均需按照表面硬度值進行隨機分組，每組8個牙塊。

圖1 維氏硬度測量位置圖

標本在使用之前應一直放在去離子水中進行保存。去離子水至少滿足GB/T 6682中三級水的要求。

5.4 對照樣品的制備

5.4.1 正對照

使用去離子水作為實驗的正對照。

5.4.2 負對照

配制1%檸檬酸作為實驗的負對照。

5.5 實驗樣品的制備

5.5.1 牙膏漿的制備

將牙膏與去離子水按照質量比1∶3的比例進行稱重，攪拌混勻并且避免泡沫產生。每個標本需要至少5mL牙膏漿。

5.5.2 漱口水樣品的制備

直接使用漱口水樣品處理標本，每個標本需要至少5mL漱口水。

5.6 唾液的制備

可使用人體唾液或者人工唾液，如使用人工唾液，其配制及要求方法如下：

a) 1L人工唾液的配制：分別準確稱取0.246g (精確至±0.0005g) 硝酸鈣 (或 0.354g四水硝酸鈣)，0.1225g (精確至±0.0005g)磷酸二氫鉀,9.685g(精確至±0.0005g)氯化鉀以及4.184g(精確至±0.0005g)雙(2-羥乙基)氨基三(羥甲基)甲烷于1L燒杯中，加入800mL去離子水。充分攪拌溶解。用1mol/L的HCl調節pH值至7.0±0.05。將此溶液轉移至1L容量瓶中，用去離子水定容至刻度；

b) 人工唾液中各成分的最終濃度為：1.5mmol/L 硝酸鈣，0.9mmol/L 磷酸二氫鉀，130mmol/L 氯化鉀，20mmol/L 雙(2-羥乙基)氨基三(羥甲基)甲烷。

5.7 實驗循環

將牙膏漿或漱口水浸泡標本5min，溫度控制在37℃±2℃，然后用去離子水充分清洗標本，再用人體唾液或人工唾液浸泡標本55min，溫度控制在37℃±2℃。重復上述操作，共6次循環。最后用人體唾液或人工唾液浸泡標本不少于12h，溫度控制在37℃±2℃。

5.8 檢測

循環處理后，將牙塊樣本用去離子水沖洗干凈，并保存于去離子水中等待后期硬度檢測。

使用維氏硬度儀進行對循環處理后的牙塊樣本進行表面顯微硬度的測量。其測量點分布見(圖1 )維氏硬度測量位置圖。測量前要保證樣本表面是干燥的，硬度儀測量條件為負載0.3kg，持續15s，測量操作按照QB/T 4780進行。

5.9 數據處理

每個牙片循環處理前后的硬度值變化ΔHV，計算見公式(1)：

ΔHV=HVpost-HVpre

(1)

式中：ΔHV——每個牙片的硬度值變化值,單位為千克每平方毫米(kg/mm2)；

HVpost——循環處理后的硬度值,單位為千克每平方毫米(kg/mm2)；

HVpre——循環處理前測得的硬度值,單位為千克每平方毫米(kg/mm2)。

注： 后續所有統計分析都基于ΔHV。

5.10 統計分析方法

依據GB/T 3358.1中對有效性檢驗和非劣性檢驗的定義，對ΔHV進行分析如下：

a)有效性檢驗：在95%置信水平下進行雙邊檢驗，正對照組平均值顯著優于負對照組平均值。

b)非劣性檢驗：在95%置信水平下進行單邊檢驗，測試產品組應與正對照組的差異統計學上顯著小于最小有效差異，其中最小有效差異等于正對照組與負對照組的平均值差異的一半。換言之，在95%置信水平下進行單邊檢驗，測試產品組平均值顯著優于正對照組和負對照組的平均值。

c)應同時滿足以上兩點要求，測試產品才可判定為非劣于正對照。