基于TLR4/NF-κB信號通路探究心脈康改善兔動脈粥樣硬化的機(jī)制

周智慧 陳賀 吳錦波 葉小漢

中圖分類號 R972 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408（2021）22-2736-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.22.09

摘 要 目的：探究心脈康改善兔動脈粥樣硬化（AS）的機(jī)制。方法：將50只雄性新西蘭兔隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、辛伐他汀組[陽性對照，2.60 mg/（kg·d）]和心脈康低、高劑量組[0.21、0.84 g/（kg·d）]，每組10只。假手術(shù)組兔給予普通飼料喂養(yǎng)，只分離結(jié)扎股動脈但不損傷腹主動脈內(nèi)皮;其余各組兔均給予高脂飼料喂養(yǎng)并行腹主動脈內(nèi)膜球囊損傷術(shù)以復(fù)制AS模型。術(shù)后10周，假手術(shù)組和模型組兔均灌胃生理鹽水，各藥物組兔灌胃相應(yīng)藥液（溶劑均為生理鹽水），給藥體積為100 mL，每天給藥1次，連續(xù)12周。末次給藥后，觀察各組兔腹主動脈及內(nèi)壁的病理變化，檢測血清中三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）以及白細(xì)胞介素6（IL-6）、IL-1β含量，檢測腹主動脈組織中Toll樣受體4（TLR4）、核因子κB p65（NF-κB p65）含量及其蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：與假手術(shù)組比較，模型組兔腹主動脈管腔內(nèi)膜富含脂質(zhì)，管壁厚度和斑塊面積明顯增加，可見明顯的血管內(nèi)皮損傷;血清中TG、TC、LDL-C、IL-6、IL-1β含量和腹主動脈組織中TLR4、NF-κB p65含量及其蛋白表達(dá)水平均顯著升高，HDL-C含量顯著降低（P<0.05或P<0.01）。與模型組比較，心脈康高劑量組和辛伐他汀組兔腹主動脈病變減輕，且內(nèi)壁未見明顯損傷，其TG、TC、LDL-C、IL-6、IL-1β含量以及心脈康低劑量組NF-κB p65含量和TLR4、NF-κB p65蛋白表達(dá)水平均顯著改善（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：心脈康可改善兔AS，其機(jī)制可能與下調(diào)TLR4、NF-κB p65表達(dá)，抑制炎癥反應(yīng)有關(guān)。

關(guān)鍵詞 心脈康;動脈粥樣硬化;Toll樣受體家族4/核因子κB信號通路;血脂代謝;炎癥反應(yīng);兔

Study on Mechanism of the Improvement Effects of Xinmaikang on Atherosclerosis in Rabbits Based on TLR4/NF-κB Signaling Pathway

ZHOU Zhihui1，CHEN He2，WU Jinbo1，YE Xiaohan1（1. Dept. of Cardiology， Dongguan Hospital， Guangzhou University of TCM， Guangdong Dongguan 523015， China; 2. The First Clinical Medical College， Guangzhou University of TCM， Guangzhou 510405， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To explore the mechanism of Xinmaikang improving atherosclerosis （AS） in rabbits. METHODS： A total of 50 male Zealand rabbits were randomly divided into sham operation group， model group， simvastatin group [positive control， 2.60 mg/（kg·d）] and Xinmaikang low-dose and high-dose groups [0.21， 0.84 g/（kg·d）]， with 10 rabbits in each group. Rabbits in sham operation group were fed with ordinary diet， and only femoral artery was separated and ligated， and abdominal aortic endothelium was not strained; the other groups were given high-fat diet and received abdominal aortic intimal balloon injury to induce AS model. Ten weeks after operation， sham operation group and model group were given intragastric administration of normal saline， and administration groups were given corresponding drug solution intragastrically （normal saline as solvent） with the volume of 100 mL， once a day， for consecutive 12 weeks. After last administration， the pathological changes of abdominal aorta and inner wall in rabbits were observed in each group. The serum contents of triglyceride （TG）， total cholesterol （TC）， low density lipoprotein cholesterol （LDL-C）， high density lipoprotein cholesterol （HDL-C）， interleukin-6（IL-6） and IL-1β were detected， and the contents and protein expression of Toll-like receptor 4 （TLR4） and nuclear factor-κB p65 （NF-κB p65） in abdominal aortic tissue were determined. RESULTS： Compared with sham operation group， the intima of abdominal aorta in model group was rich in lipids， the thickness of vessel wall and plaque area were increased obviously， and there was obvious vascular endothelial injury. The contents of TG， TC， LDL-C， IL-6 and IL-1β in serum， the contents and protein expression of TLR4 and NF-κB p65 in abdominal aorta tissue were significantly increased， while the content of HDL-C was decreased significantly （P<0.05 or P<0.01）. Compared with model group， the lesion of rabbit abdominal aorta were alleviated， and no obvious damage was found on the inner wall. The contents of TG， TC， LDL-C， IL-6， IL-1β of Xinmaikang high-dose group and simvastatin group as well as the content of NF-κB p65 and protein expression of TLR4 and NF-κB p65 were improved significantly （P<0.05 or P<0.01）. CONCLUSIONS： Xinmaikang can improve AS in rabbits， and its mechanism may be assicated with inhibiting the expression of TLR4， NF-κB p65 and inhibiting inflammatory response.

KEYWORDS? ?Xinmaikang; Atherosclerosis; TLR4/NF-κB signaling pathway; Lipid metabolism; Inflammatory response; Rabbit

動脈粥樣硬化（AS）是動脈硬化性血管疾病中重要且常見的一種，是多種心腦血管疾?。ㄈ绻谛牟?、血栓栓塞性疾病和腦血管病等）的病理基礎(chǔ)[1]。進(jìn)入21世紀(jì)以來，全球AS的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，對人類健康造成了嚴(yán)重威脅[2]。AS的發(fā)病機(jī)制尚未明確。近年來，多項(xiàng)研究提示，慢性炎癥在AS的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[3-4]。Toll樣受體4（TLR4）作為Toll樣受體家族（TLRs）中的一員，與配體結(jié)合后能夠促進(jìn)核因子κB（NF-κB）發(fā)生核轉(zhuǎn)移，從而激活下游炎癥因子參與到AS的各個階段，故抑制TLR4/NF-κB信號通路可能是改善AS的潛在機(jī)制之一[5-6]。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對AS的治療方法包括手術(shù)治療與藥物治療，但二者均存在一定的局限性，如患者經(jīng)皮冠狀動脈腔內(nèi)成形術(shù)后易發(fā)生再狹窄，長期服用他汀類藥物會對其肝臟、肌肉、腎臟以及糖代謝等造成負(fù)面影響，二者聯(lián)合則可能引發(fā)橫紋肌溶解[7-8]。中醫(yī)認(rèn)為，AS屬本虛標(biāo)實(shí)之證，陰虛、陽虛、氣虛為本，血瘀、痰濁、氣滯、熱毒、寒凝為標(biāo)，可歸“脈痹”“積聚”的范疇[9]。心脈康由廣州中醫(yī)藥大學(xué)東莞醫(yī)院葉小漢教授創(chuàng)方，以鱉甲、三棱、莪術(shù)、枳實(shí)、制膽星和石斛等藥材組成，具有軟堅(jiān)散結(jié)、益氣通脈的功效[10]。臨床研究證實(shí)，心脈康對AS患者具有顯著的治療作用[11-12]，但其分子機(jī)制尚未明確。本研究通過觀察心脈康對兔AS的影響，基于TLR4/NF-κB信號通路探究其改善兔AS的作用機(jī)制，旨在為心脈康的機(jī)制研究提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括BX41TF型光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司）、LEO-1430VP型掃描電子顯微鏡（德國Zeiss公司）、Modular P800型全自動生化分析儀（瑞士Roche公司）、BondmaX型全自動免疫組化染色機(jī)（德國Leica公司）、Power Wave XS2型酶標(biāo)儀（美國BioTek公司）、JS-680A型自動凝膠成像分析儀（上海培清科技有限公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

心脈康片（批號Z20110041，規(guī)格0.75 g）由東莞市中醫(yī)院提供;辛伐他汀片（批號R018651，規(guī)格20 mg）購自荷蘭Merck Sharp V Dohme B.V.公司;0.5%油紅O染液（貨號SLBG0158V）購自美國Sigma公司;三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）試劑盒（批號分別為23743986、23451355、23377464、23460238）均購自美國Thermo Fisher Scientific公司;白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、IL-6酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒和TLR4、NF-κB p65免疫組化試劑盒（批號分別為A13267、A12347、A12567、A17267）均購自美國ABclonal Technology公司;蘇木精染液、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）試劑盒、二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量試劑盒、ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒（批號分別為C0107、P0012A、P0012S、P0018FS）均購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司;山羊抗小鼠TLR4單克隆抗體、山羊抗小鼠NF-κB p65多克隆抗體、山羊抗小鼠甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）多克隆抗體、辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗小鼠免疫球蛋白G（IgG）二抗（批號分別為1358、8242、5174、7074）均購自美國Cell Signaling Technology公司;其余試劑均為分析純或?qū)嶒?yàn)室常用規(guī)格，水為蒸餾水。

1.3 實(shí)驗(yàn)動物

本研究所用實(shí)驗(yàn)動物為普通級5月齡雄性新西蘭兔，共50只，體質(zhì)量1.8～2.3 kg，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物使用許可證號為SYXK（粵）2018-0001。所有動物均飼養(yǎng)于普通級動物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，溫度為20～26 ℃，相對濕度為40%～70%，晝夜明暗交替（12 h/12 h）。高脂飼料（含1%膽固醇、5%豬油、94%普通飼料）、普通飼料均由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。本研究方案已通過廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物管理和倫理委員會批準(zhǔn)，批件號為ZSLL-2015-45。

2 方法

2.1 造模

參考文獻(xiàn)[13]，采用高脂飼料喂養(yǎng)與腹主動脈內(nèi)膜球囊損傷結(jié)合的方法復(fù)制兔AS模型，具體操作如下：用高脂飼料（100 g/d）喂養(yǎng)新西蘭兔2周后，再行腹主動脈內(nèi)膜球囊損傷術(shù)——經(jīng)耳緣靜脈注射戊巴比妥鈉（30 mg/kg）麻醉后，穿刺右股動脈，將內(nèi)徑3.5 mm、長15 mm的球囊導(dǎo)管送入腹主動脈（插入深度約2.0 cm），充盈球囊并緩慢回拉球囊至動脈切口處，反復(fù)回拉3次，以造成腹主動脈內(nèi)膜損傷和剝脫，術(shù)后繼續(xù)以高脂飼料喂養(yǎng)。術(shù)后10周根據(jù)油紅O的染色情況判斷是否建模成功。

2.2 分組與給藥

將50只新西蘭兔以普通飼料喂養(yǎng)2周后，隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、辛伐他汀組[陰性對照，2.60 mg/（kg·d）]和心脈康低、高劑量組[0.21、0.84 g/（kg·d）]，每組10只。假手術(shù)組兔給予普通飼料喂養(yǎng)，只分離結(jié)扎股動脈但不損傷腹主動脈內(nèi)皮，其余各組兔均按“2.1”項(xiàng)下方法復(fù)制AS模型。術(shù)后10周，假手術(shù)組和模型組兔灌胃生理鹽水，各藥物組灌胃相應(yīng)藥液（溶劑均為生理鹽水），給藥體積均為100 mL，每天給藥1次，連續(xù)12周，給藥劑量均依據(jù)本課題組預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置。

2.3 采樣方法

末次給藥后，用4%水合氯醛溶液麻醉各組兔，收集其腹主動脈血40 mL后，處死，分離腹主動脈。血樣于室溫下放置30 min后，以5 000 r/min離心15 min，取上層血清，備用。

2.4 兔腹主動脈的病理觀察

取各組兔腹主動脈，以石蠟包埋后切片（厚度約5 μm），脫蠟至水并經(jīng)水洗后，在異丙醇中放置5 min，用濾紙吸去異丙醇，加入0.5%油紅O染色30 min;用水清洗3次，加入蘇木精染色5 min;用鹽酸-乙醇溶液（1 ∶ 100，V/V）分色、氨水返藍(lán)后，用中性樹膠封片，使用光學(xué)顯微鏡觀察其腹主動脈的病理變化（紅褐色為血脂沉積）。

2.5 兔腹主動脈內(nèi)壁的病理觀察

取各組兔腹主動脈，用磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 7.4）清洗表面后，快速放入2.5%戊二醛固定液中固定4 h;用PBS清洗5 min×4次，再放入1%鋨酸固定液中固定1 h;用PBS清洗5 min×4次，依次放入70%、80%、90%、100%乙醇中脫水10 min，徹底干燥后，使用掃描電子顯微鏡觀察其腹主動脈內(nèi)壁的病理變化。

2.6 兔血脂指標(biāo)含量的檢測

取各組兔腹主動脈血清樣品適量，按照相應(yīng)試劑盒說明書方法操作，使用全自動生化分析儀檢測其血清中TG、TC、LDL-C、HDL-C的含量。

2.7 兔血清中IL-1β、IL-6含量的檢測

采用ELISA法進(jìn)行檢測。取各組兔腹主動脈血清樣品適量，按照相應(yīng)試劑盒說明書方法操作，使用酶標(biāo)儀檢測其血清中IL-1β、IL-6的含量。

2.8 兔腹主動脈組織中TLR4、NF-κB p65含量的檢測

采用免疫組化法進(jìn)行檢測。取各組兔腹主動脈，以石蠟包埋后切片（厚度約5 μm），按照相應(yīng)試劑盒說明書方法操作，使用全自動免疫組化染色機(jī)分別進(jìn)行TLR4和NF-κB p65免疫組化染色，使用光學(xué)顯微鏡觀察并采集放大時的顯微圖像，同時運(yùn)用Image J v1.8.0圖像分析軟件計(jì)算兔腹主動脈組織中TLR4、NF-κB p65在465 nm波長下的積分光密度（IOD），并以此表示兩者含量。

2.9 兔腹主動脈組織中TLR4、NF-κB p65蛋白表達(dá)水平的檢測

采用Western blot法進(jìn)行檢測。取各組兔腹主動脈，經(jīng)裂解、勻漿、靜置后，以12 000 r/min離心10 min，獲取蛋白。采用BCA法測定蛋白濃度后，煮沸5 min使蛋白變性。取變性后的蛋白樣品經(jīng)SDS-PAGE分離，轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯（PVDF）膜上，以5%脫脂奶粉于室溫下封閉2 h后，加入TLR4、NF-κB p65、GAPDH一抗（稀釋比例分別為1 ∶ 1 000、1 ∶ 200、1 ∶ 1 000），4 ℃孵育過夜;用TBST緩沖液洗滌10 min×3次，加入HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG二抗（稀釋比例為1 ∶ 15 000），室溫孵育1 h;用TBST緩沖液洗滌10 min×3次，加入ECL化學(xué)發(fā)光顯色液顯影，于自動凝膠成像分析儀中成像。使用Sensi Ansys 13.0軟件進(jìn)行分析，以目標(biāo)蛋白與內(nèi)參蛋白（GAPDH）的灰度值比值表示目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平。

2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)均以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)（方差齊）或Dunnetts檢驗(yàn)（方差不齊）。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

3 結(jié)果

3.1 兔腹主動脈的病理變化

假手術(shù)組兔的腹主動脈管腔內(nèi)可見少許脂質(zhì)，未見明顯斑塊和血管內(nèi)皮損傷。與假手術(shù)組比較，模型組兔的腹主動脈管腔內(nèi)膜富含脂質(zhì)，管壁厚度和斑塊面積均明顯增加，可見明顯的血管內(nèi)皮損傷。與模型組比較，心脈康低劑量組兔的腹主動脈結(jié)構(gòu)相對完整，管腔內(nèi)膜脂質(zhì)沉積較少;心脈康高劑量組和辛伐他汀組兔的腹主動脈結(jié)構(gòu)正常，局部有小灶性鈣化顆粒物沉積，病變輕微，斑塊小，彈力板基本完整。結(jié)果見圖1。

3.2 兔腹主動脈內(nèi)壁的病理變化

假手術(shù)組兔的腹主動脈內(nèi)壁光滑，未見明顯腫脹、損傷、粥樣硬化斑塊和泡沫細(xì)胞。與假手術(shù)組比較，模型組兔的腹主動脈內(nèi)壁可見許多粥樣硬化斑塊，在斑塊表面可見纖維帽和泡沫細(xì)胞，在硬化斑塊上可見黏附的巨噬細(xì)胞，血管內(nèi)皮損傷明顯。與模型組比較，心脈康低劑量組兔的腹主動脈內(nèi)壁斑塊面積縮小，血管內(nèi)皮損傷較輕;心脈康高劑量組和辛伐他汀組兔的腹主動脈內(nèi)壁斑塊明顯較少，血管內(nèi)皮相對完整，未見明顯損傷。結(jié)果見圖2。

3.3 兔血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C的含量變化

與假手術(shù)組比較，模型組兔血清中TC、TG、LDL-C含量均顯著升高（P<0.01），HDL-C含量顯著降低（P<0.05）。與模型組比較，心脈康高劑量組和辛伐他汀組兔血清中TC、TG、LDL-C含量均顯著降低（P<0.05或P<0.01），各藥物組HDL-C含量和心脈康低劑量組TC、TG、LDL-C含量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)果見表1。

3.4 兔血清中IL-6、IL-1β的含量變化

與假手術(shù)組比較，模型組兔血清中IL-6、IL-1β含量均顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，心脈康高劑量組和辛伐他汀組兔血清中IL-6、IL-1β含量均顯著降低（P<0.01），心脈康低劑量組上述指標(biāo)含量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)果見表2。

3.5 兔腹主動脈組織中TLR4、NF-κB p65的含量變化

與假手術(shù)組比較，模型組兔腹主動脈組織中TLR4、NF-κB p65含量均顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，各藥物組兔腹主動脈組織中TLR4（除心脈康低劑量組外）、NF-κB p65含量均顯著降低（P<0.01）。結(jié)果見圖3、圖4、表3。

3.6 兔腹主動脈組織中TLR4、NF-κB p65蛋白的表達(dá)水平變化

與假手術(shù)組比較，模型組兔腹主動脈組織中TLR4、NF-κB p65蛋白的表達(dá)水平均顯著升高（P<0.05或P<0.01）。與模型組比較，各藥物組兔腹主動脈組織中TLR4、NF-κB p65蛋白的表達(dá)水平均顯著降低（P<0.05或P<0.01）。結(jié)果見圖5、表4。

4 討論

AS是一種慢性炎癥性疾病，是由脂質(zhì)過度積累誘發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞、白細(xì)胞和內(nèi)膜平滑肌細(xì)胞共同參與的動脈病變[14]。心脈康是由鱉甲、三棱、莪術(shù)、枳實(shí)、制膽星和石斛等藥材組成，其中鱉甲可滋陰潛陽、軟堅(jiān)散結(jié);三棱和莪術(shù)可破血消積、行氣止痛，現(xiàn)代藥理學(xué)研究提示兩者均能夠抑制炎癥、降低全血黏度和阻止血栓形成;枳實(shí)可破氣散痞、消積化痰;制膽星可清熱化痰，配合諸藥可增軟堅(jiān)散結(jié)之功;石斛擅益胃生津、滋陰清熱，其提取物亦可降低全血黏度、抑制血栓形成;諸藥合用，共奏軟堅(jiān)散結(jié)、益氣通脈之功[15-17]。

在AS病變過程中，血漿中的細(xì)胞因子和脂蛋白顆粒通過受損的血管內(nèi)皮滲入至內(nèi)皮下空間，通過氧化修飾等反應(yīng)成為具有細(xì)胞毒性的化學(xué)物質(zhì)，從而促進(jìn)炎癥反應(yīng)和AS進(jìn)程[18]。本研究油紅O染色和掃描電子顯微鏡觀察結(jié)果提示，高劑量心脈康能夠保護(hù)AS模型兔的血管內(nèi)皮，抑制其粥樣硬化斑塊形成。脂質(zhì)代謝異常是AS最重要的危險因素之一[19]，本研究對各組兔的血脂指標(biāo)進(jìn)行分析，結(jié)果提示，高劑量心脈康能夠改善AS模型兔的血脂異常，下調(diào)血清中TC、TG和LDL-C含量，干預(yù)AS的進(jìn)程。

炎癥在AS的所有階段都起著重要作用，是其起始和發(fā)展過程中生理和病理變化的共同基礎(chǔ)[20]。已有研究表明，炎癥因子IL-6和IL-1β的過度表達(dá)能夠提升炎癥細(xì)胞的黏附能力，IL-1β還可降低血栓調(diào)節(jié)素的表達(dá)，破壞凝血與抗凝血功能的平衡，導(dǎo)致血管內(nèi)部凝血，從而促進(jìn)AS的進(jìn)程[21]。本研究結(jié)果提示，高劑量心脈康能夠下調(diào)AS模型兔血清中IL-6和IL-1β的含量，抑制炎癥反應(yīng)，干預(yù)AS的進(jìn)程。

有學(xué)者指出，心脈康可能通過降低血脂、減輕過氧化損傷等途徑來抑制兔AS的形成[22-23]。心脈康聯(lián)合化學(xué)藥治療具有較好的抗炎效果[24]。TLR4是介導(dǎo)天然免疫TLRs家族中的一員，是一種位于細(xì)胞膜表面的跨膜蛋白，參與多種免疫及炎癥反應(yīng)，其在AS內(nèi)皮細(xì)胞和斑塊上的表達(dá)水平明顯升高[25]。NF-κB是炎癥最重要的調(diào)節(jié)因子之一，其主要形式為p50和p65組成的二聚體，參與AS的病理進(jìn)程[26-27]。有研究發(fā)現(xiàn)，ApoE-/-小鼠經(jīng)NF-κB抑制劑干預(yù)后，其體內(nèi)泡沫細(xì)胞的形成受到明顯抑制[28]。TLR4/NF-κB信號通路是機(jī)體重要的炎癥信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之一，血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)TLR4蛋白表達(dá)水平的上調(diào)能夠激活NF-κB，誘導(dǎo)腫瘤壞死因子α、IL-6和IL-1β等促炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生和釋放，從而促進(jìn)AS斑塊的形成[29]。相關(guān)研究指出，抑制TLR4/NF-κB信號通路能夠下調(diào)炎癥因子的表達(dá)，從而減輕血管內(nèi)皮細(xì)胞的受損程度，延緩AS的進(jìn)程[30-31]。本研究通過構(gòu)建AS模型兔，探究心脈康對TLR4/NF-κB信號通路及炎癥因子表達(dá)的影響，結(jié)果顯示，與模型組比較，心脈康低、高劑量組兔腹主動脈組織中TLR4（除低劑量組外）、NF-κB p65含量及其蛋白的表達(dá)水平均顯著降低，提示TLR4/NF-κB信號通路可能是心脈康改善兔AS的靶點(diǎn)之一。

綜述所述，心脈康可能通過下調(diào)TLR4、NF-κB p65的表達(dá)，抑制炎癥反應(yīng)，從而延緩AS的發(fā)展。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] LIBBY P，BURING J E，BADIMON L，et al. Atherosclerosis[J]. Nat Rev Dis Primers，2019，5（1）：1-18.

[ 2 ] HERRINGTON W，LACEY B，SHERLIKER P，et al. Epidemiology of atherosclerosis and the potential to reduce the global burden of atherothrombotic disease[J]. Circ Res，2016，118（4）：535-546.

[ 3 ] WOLF D，LEY K. Immunity and inflammation in atherosclerosis[J]. Circ Res，2019，124（2）：315-327.

[ 4 ] B?CK M，YURDAGUL A J，TABAS I，et al. Inflammation and its resolution in atherosclerosis：mediators and therapeutic opportunities[J]. Nat Rev Cardiol，2019，16（7）：389-406.

[ 5 ] ZHANG X，XUE C，XU Q，et al. Caprylic acid suppresses inflammation via TLR4/NF-κB signaling and improves atherosclerosis in ApoE-deficient mice[J]. Nutr Metab（Lond），2019，16：40.

[ 6 ] 李嘉慧，王欣佩，冷靜. TLR4/NF-κB參與動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2021，31（4）：137-142.

[ 7 ] BLAHA M J，DAUBERT M A. Assessing the impact of coronary plaque on the relative and absolute risk reduction with statin therapy[J/OL]. JACC Cardiovasc Imaging，2021[2021-05-15]. https：//doi.org/10.1016/j.jcmg.2021.07.

005.

[ 8 ] PEPE M，NAPOLI G，CARULLI E，et al. Autoimmune diseases in patients undergoing percutaneous coronary intervention：a risk factor for in-stent restenosis[J]. Atherosclerosis，2021，333：24-31.

[ 9 ] 江爽，韓燕星，蔣建東，等.葛根素抗動脈粥樣硬化作用及其機(jī)制的研究進(jìn)展[J].藥學(xué)學(xué)報，2021，56（4）：966-971.

[10] 鄧志剛，陳靜，葉小漢，等.軟堅(jiān)散結(jié)方對頸動脈粥樣硬化治療的臨床觀察[J].中醫(yī)臨床研究，2012，4（10）：19-20.

[11] 王婷，葉小漢，蘇志遠(yuǎn).心脈康方治療下肢動脈硬化閉塞癥31例臨床觀察[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2018，12（12）：6-8.

[12] 侯熾均，陳建興，賴惠東，等.心脈康聯(lián)合阿托伐他汀對急性冠脈綜合征患者療效及血脂的影響[J].深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志，2021，31（6）：54-56.

[13] 劉鵬，王廣新，蘇國海.兔動脈粥樣硬化模型建立方法的研究進(jìn)展[J]. 中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2021，31（4）：150-154.

[14] LI B，LI W，LI X，et al. Inflammation：a novel therapeutic target/direction in atherosclerosis[J]. Curr Pharm Des，2017，23（8）：1216-1227.

[15] 王小萍，徐冠玲，閆昕，等.“莪術(shù)-三棱”藥對及其單味藥水煎液的酚類和有機(jī)酸類化學(xué)成分分析[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2020，26（23）：171-179.

[16] 唐照琦，李彪，王秋紅，等.膽南星的化學(xué)成分、藥理作用及相關(guān)復(fù)方臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].中國藥房，2020，31（12）：1523-1527.

[17] 宋廣青，劉新民，王瓊，等.石斛藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥，2014，45（17）：2576-2580.

[18] CHEN Z W，TSAI C H，PAN C T，et al. Endothelial dysfunction in primary aldosteronism[J]. Int J Mol Sci，2019，20（20）：5214.

[19] ZHANG Y，GU Y，CHEN Y，et al. Dingxin Recipe Ⅳ attenuates atherosclerosis by regulating lipid metabolism through LXR-α/SREBP1 pathway and modulating the gut microbiota in ApoE-/- mice fed with HFD[J]. J Ethnopharmacol，2021，266：113436.

[20] ZHU Y，XIAN X，WANG Z，et al. Research progress on the relationship between atherosclerosis and inflammation[J]. Biomolecules，2018，8（3）：80.

[21] WU M，YANG S，WANG S，et al. Effect of berberine on atherosclerosis and gut microbiota modulation and their correlation in high-fat diet-fed ApoE-/- mice[J]. Front Pharmacol，2020，11：223.

[22] 葉小漢，董明國，鐘云良，等.心脈康對動脈粥樣硬化家兔血脂代謝和MDA、SOD的影響[J].新中醫(yī)，2010，42（10）：117-119.

[23] 王婷，葉小漢，吳錦波，等.心脈康方對兔動脈粥樣硬化及NF-κB p65表達(dá)的影響[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2020，37（10）：1963-1968.

[24] 胡傳普.心脈康片對冠心病介入治療術(shù)后炎癥因子水平的影響[D].廣州：廣州中醫(yī)藥大學(xué)，2017.

[25] LI Y，WANG Y，CHEN Y，et al. Corilagin ameliorates? atherosclerosis in peripheral artery disease via the toll-like receptor-4 signaling pathway in vitro and in vivo[J]. Front Immunol，2020，11：1611.

[26] BOWMAN J D，SURANI S，HORSEMAN M A. Endotoxin，toll-like receptor-4，and atherosclerotic heart disease[J]. Curr Cardiol Rev，2017，13（2）：86-93.

[27] KARUNAKARAN D，NGUYEN M A，GEOFFRION M，et al. RIPK1 expression associates with inflammation in early atherosclerosis in humans and can be therapeutically silenced to reduce NF-κB activation and atherogenesis in mice[J]. Circulation，2021，143（2）：163-177.

[28] PLOTKIN J D，ELIAS M G，DELLINGER A L，et al. NF-κB inhibitors that prevent foam cell formation and? atherosclerotic plaque accumulation[J]. Nanomedicine，2017，13（6）：2037-2048.

[29] ZHU L，GONG X，GONG J，et al. Notoginsenoside R1 upregulates miR-221-3p expression to alleviate ox-LDL-induced apoptosis，inflammation，and oxidative stress by inhibiting the TLR4/NF-κB pathway in HUVECs[J]. Braz J Med Biol Res，2020，53（6）：e9346.

[30] WANG N，ZHANG X，MA Z，et al. Combination of tanshinone ⅡA and astragaloside Ⅳ attenuate atherosclerotic plaque vulnerability in ApoE-/- mice by activating PI3K/Akt signaling and suppressing TRL4/NF-κB signaling[J]. Biomed Pharmacother，2020，123：109729.

[31] DING Z，POTHINENI N，GOEL A，et al. PCSK9 and inflammation：role of shear stress，pro-inflammatory cytokines，and LOX-1[J]. Cardiovasc Res，2020，116（5）：908- 915.

（收稿日期：2021-06-17 修回日期：2021-10-07）

（編輯：鄒麗娟）