卵巢癌患者組織中SCCA及MTA1表達水平及其與臨床特征的關系

張莉，鄧姜云，韓林育

1.陜西省第二人民醫院婦產科，陜西 西安 710000；2.西安醫學院附屬寶雞醫院病理科，陜西 寶雞 721006

卵巢癌是女性生殖器官常見的惡性腫瘤之一，早期沒有明顯病癥，當患者出現很明顯癥狀時大多已是晚期，因此卵巢癌5 年內死亡率居高不下[1]。鱗狀細胞癌抗原(SCCA)是一種具有高度特異的診斷宮頸鱗狀細胞癌的指標，在臨床上使用較為廣泛[2]。目前少有研究SCCA 蛋白表達可以作為卵巢癌的相關篩查及診治指標。腫瘤轉移相關基因-1(MTA1)作為一種與惡性腫瘤浸潤和轉移密切相關的基因，已經被大量研究證實在惡性腫瘤組織中呈現高表達[3]。本研究通過檢測卵巢癌患者腫瘤組織中SCCA 與MTA-1 蛋白表達水平，分析兩者與卵巢癌患者臨床病理特征的關系，以期為卵巢癌病理進展、轉移情況的診斷提供參考指標。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年1月至2018年12月陜西省第二人民醫院收治且符合以下納入和排除標準的120 例卵巢癌患者作為卵巢癌組。納入標準：①病理學檢查確診為卵巢癌；②確診前未接受過手術、化療及放療；③患者臨床資料完整。排除標準：①合并其他類型惡性腫瘤；②合并有嚴重免疫性疾病者。本研究獲得醫院倫委會批準。卵巢癌組患者平均(46.78±7.35)歲；漿液性乳頭狀囊腺癌67例，黏液性囊腺癌33例，子宮內膜樣癌20例；病理分級中G1期38例，G2期47例，G3期35例；臨床分級中Ⅰ期17例，Ⅱ期45例，Ⅲ期44 例，Ⅳ期14 例；淋巴結轉移43 例，無淋巴結轉移77 例；肌層浸潤程度＜1/2 肌層67 例，≥1/2 肌層53 例。另選取同期在我院經子宮肌瘤切除病理檢查確診為正常卵巢組織的患者56 例作為對照組。對照組患者平均(47.12±6.89)歲。兩組患者年齡比較差異無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 檢測儀器與試劑 免疫組化試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司；SCCA 單克隆抗體和MTA1多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，SCCA和MTA1為濃縮液，使用時需分別按1∶125和1∶150比例稀釋。

1.3 檢測方法 采用免疫組化法檢測卵巢組織中SCCA 與MTA-1 蛋白表達水平。先取卵巢癌組及對照組卵巢組織樣本用40μg/L 的甲醛進行固定，按相關流程制成4μm厚的切片→脫蠟、水化→磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗3 次，5 min/次→滴入3%H2O2，于室溫下靜置15 min→蒸餾水清洗切片3次，5 min/次→PBS中浸泡5 min，取出后進行高壓抗原修復→用蒸餾水清洗3 次，5 min/次→PBS 沖洗3 次，3～4 min/次→滴加50μL 一抗于切片上，在37℃恒溫水浴鍋中水浴30 min→PBS 洗3 次，5 min/次→滴加50μL 生物素標記二抗于切片上→PBS 洗3 次，5 min/次→利用DAB對切片進行染色操作→洗凈DAB 后對切片用蘇木素進行復染操作→完成后需要用2%鹽酸溶液進行分化→對切片用不同濃度酒精進行梯度脫水及干燥→干燥之后利用二甲苯對切片做透明處理→處理完成后用中性樹膠對切片進行封固→將切片放置到光鏡下觀察染色情況。

1.4 SCCA和MTA1陽性表達判斷標準[4-5]根據細胞陽性率和染色強度進行評分：在高倍鏡(400×)下，挑選5 個隨機且清晰的視野，根據視野中所能觀察到的陽性細胞所占比例計分，≤10%計0分，10%～50%計1 分，50%～75%計2 分，＞75%計3 分；根據視野中細胞染色程度進行評分：無色計0 分，淡黃色計1 分，棕黃色計2 分，褐色計3 分。根據兩者乘積結果判斷結果，≥4分為陽性，＜4為陰性。

1.5 統計學方法 應用SPSS20.0 軟件進行數據分析，計量資料符合正態分布，以均數±標準差(x-±s)表示，計數資料比較采用χ2檢驗，相關性采用Spearman相關分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者的SCCA 和MTA1 陽性表達水平比較 卵巢癌組患者的SCCA和MTA1的陽性表達率明顯高于對照組，差異均具有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患者的SCCA和MTA1陽性表達水平比較[例(%)]

2.2 不同臨床病理特征卵巢癌組織中的SCCA陽性表達水平比較 臨床分期Ⅲ/Ⅳ期、腫瘤分級G3、淋巴轉移N1/N2及肌層浸潤程度≥1/2患者卵巢癌組織中SCCA陽性表達水平高于臨床分期Ⅰ/Ⅱ期、腫瘤分級G1/G2、淋巴轉移N0及肌層浸潤程度＜1/2患者，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 不同臨床病理特征卵巢癌組織中的SCCA 陽性表達水平比較[例(%)]

2.3 不同臨床病理特征卵巢癌組織的MTA1 陽性表達水平比較 臨床分期Ⅲ/Ⅳ期、淋巴轉移N1/N2及肌層浸潤程度≥1/2 患者卵巢癌組織中MTA1 陽性表達水平高于臨床分期Ⅰ/Ⅱ期、淋巴轉移N0及肌層浸潤程度＜1/2患者，差異均具有統計學意義(P＜0.05)，見表3。

表3 不同臨床病理特征卵巢癌組織中MTA1陽性表達水平比較[例(%)]

2.4 卵巢癌組織中SCCA 與MTA1 蛋白表達的相關性 120 例卵巢癌患者中有44 例患者瘤組織中SCCA 和MTA1呈現共同陽性表達，經Spearman 相關系數分析發現，兩者呈正相關(r=0.409，P＜0.05)，見表4。

表4 卵巢癌組織中SCCA與MTA1蛋白表達的關系

3 討論

目前臨床上將血清SCCA 水平檢測用于宮頸、頭頸部、食管、肺和氣管、泌尿生殖道和肛管部位等鱗癌的預后、病情檢測、療效評估等[6-8]。相關研究指出，SCCA 水平與患者的腫瘤分級、瘤體的大小、肌層侵襲程度和淋巴結轉移情況密切相關，同時SCCA 水平高的患者放化療后的生存率顯著降低，其復發率顯著提高[9]。王微微等[10]研究了SCCA 在各類婦科腫瘤中的表達差異，發現宮頸鱗狀細胞癌患者SCCA 表達水平和陽性率顯著高于其它婦科惡性腫瘤和良性腫瘤患者。本研究經免疫組學檢驗發現，SCCA 蛋白在卵巢癌組織中陽性表達例數較正常卵巢組織升高，臨床分期越高的患者陽性表達率越高，存在淋巴轉移情況患者中顯著高于無淋巴轉移情況患者，肌層浸潤程度深的患者顯著高于淺的患者。表明卵巢癌患者組織病變時會誘導SCCA 蛋白的表達，并且SCCA 會參與到卵巢癌腫瘤發生、發展、轉移及浸潤過程中。這主要是因為SCCA 主要存在于鱗狀細胞的胞質中，患者腫瘤處細胞破裂使SCCA 釋放到血清中，進而可導致血清中的SCCA 水平升高，另外，此外像宮頸息肉、宮頸贅生物等都可能導致SCCA的升高[11-12]。

既往研究表明，MTA1 上調表達的瘤組織更容易發生浸潤和淋巴轉移，在宮頸癌中，MTA1較正常組織會呈現高表達，并且沉默MTA1 基因會表現出宮頸癌細胞的惡性發展[13]。田曉芳等[14]和郭玲等[15]研究發現，子宮內膜癌組織中MTA1 蛋白陽性表達率與正常子宮內膜和非典型子宮內膜增生等相比顯著升高，達到78.57%，且MTA1蛋白陽性表達會隨著子宮內膜癌的侵襲和轉移程度而顯著升高，因此把MTA1 表達情況作為子宮內膜癌臨床分期和有無淋巴轉移的參考指標。本研究結果顯示，MTA1 蛋白在卵巢癌組織中陽性表達較正常卵巢組織顯著升高，臨床分期越高的患者陽性表達率越高，存在淋巴轉移情況患者中顯著高于無淋巴轉移情況患者，肌層浸潤程度深的患者顯著高于淺的患者。其原因在于，MTA1 是一種癌轉移基因，當卵巢癌腫瘤發生、發展、轉移及浸潤過程時，會誘導MTA1蛋白的合成，對其下游靶蛋白行使其功能，因此臨床分期越靠后，發生明顯淋巴轉移和浸潤層度加深，其陽性表達率越高[16]。因此在臨床上將MTA1作為一種卵巢癌早期診斷腫瘤標志物具有可行性，但是對于MTA1 的具體分子生物學功能及其作用機制仍需要進一步的研究。通過對SCCA和MTA1在卵巢癌患者中的表達關系發現，兩者呈正相關，這說明SCCA和MTA1蛋白表達升高與患者腫瘤發展過程有顯著相關性，兩者可能在卵巢癌的侵襲轉移過程中有著協同作用。

綜上所述，SCCA 和MTA1 蛋白表達在卵巢癌患者中都顯著上調，且陽性表達率隨著卵巢癌侵襲轉移程度呈上升趨勢，兩者在卵巢癌的發展中均有一定作用，但SCCA 與MTA1 參與調控卵巢癌的具體機制還需要繼續研究。