FA280自動糞便處理分析系統檢測性能評價

龍婷婷，鄧山鷹，張春瑩，蒙 強，江 虹

（四川大學華西醫院實驗醫學科，成都 610041）

0 引言

糞便主要由食物殘渣、消化道分泌物、脫落細胞及細菌等組成。糞便檢查對于了解消化器官功能、診療消化系統疾病及篩查相關寄生蟲等具有重要意義[1-3]。長期以來，糞便常規檢查以手工操作為主，不僅費時耗力、所受影響因素多、結果隨機性大，而且存在潛在的生物安全風險。我院較早地開展了糞便自動檢驗，并引進FA280自動糞便處理分析系統進行臨床樣本檢測。該儀器于2019年問世，通過對FA160糞便分析儀的升級與完善，不僅提高了檢測效率，而且進一步提高了圖像采集的清晰度。由于改進了智能識別功能，對有形成分的檢測能力更強，大大提高了檢測的準確性。截至目前，該儀器的相關性能評價數據未見報道。為了保證檢測結果的準確性和有效性，本研究對FA280自動糞便處理分析系統的臨床應用性能進行評價。

1 資料與方法

1.1 一般資料

陽性標本：留取儀器檢測陽性，且經手工法驗證含有紅細胞（RBC）和/或白細胞（WBC）和/或真菌的新鮮標本，將多份標本混合組成含RBC、WBC及真菌等成分的陽性標本；收集儀器檢測陽性，且經手工法確認含鉤蟲卵的新鮮標本。

比對標本：隨機選擇2020年4月20—24日本實驗室接收的200例（40例/d）糞便標本，其中男性106例、女性94例，年齡13～87歲，平均年齡（53.14±14.52）歲。

1.2 儀器和試劑

FA280自動糞便處理分析系統（四川沃文特生物技術有限公司）和配套稀釋液（批號：1912091；效期：2020-12-01）、沖洗液（批號：1911163；效期：2021-11-26）、卡式便隱血試劑（批號：1911262；效期：2020-11-06）；條形便隱血檢測試劑（杭州艾博生物醫藥有限公司）；CX21光學顯微鏡（日本Olympus公司）；生理鹽水（四川科倫藥業股份有限公司，批號：T20022607；效期：2023-01）。

1.3 檢驗方法

1.3.1 FA280自動糞便處理分析系統自動檢測

嚴格按照儀器操作說明書進行上樣、自動檢測、審核結果等操作。

1.3.2 手工涂片鏡檢

挑選火柴頭大小的不正常部位或不同部位的糞便，用生理鹽水稀釋涂片。在低倍鏡下至少觀察10個視野，高倍鏡下至少觀察20個視野。所有操作均按照標準操作流程和《全國臨床檢驗操作規程》（第4版）要求進行[4]。查見RBC、WBC、真菌、寄生蟲蟲卵等即為陽性，用“＋”表示，“±”表示弱陽性，“－”表示陰性或未查見。

1.3.3 手工便隱血試驗

將多點采集的疑似不正常部位的糞便標本加入含稀釋液的樣品杯中，充分混勻后插入條形便隱血檢測試劑，5 min內觀察結果[4]。試紙條質控區和檢測區均顯示紅色條帶即為陽性。

1.4 檢測性能評價

1.4.1 空白試驗

以儀器配套稀釋液作為空白標本加入樣本管，用FA280自動糞便處理分析系統連續檢測10次，分析RBC、WBC、真菌、膿細胞、寄生蟲蟲卵等的檢出情況及便隱血檢測結果。判斷標準：檢測結果為陰性則符合臨床實驗室質量管理要求，陽性或查見則不符合，以符合率≥95%作為空白試驗通過的標準[5]。

1.4.2 重復性試驗

取新鮮陽性標本于FA280自動糞便處理分析系統上連續檢測11次，分析第2～11次RBC、WBC、真菌、便隱血及寄生蟲蟲卵檢測結果與第1次檢測結果的一致性。判斷標準：陽性標本檢測結果不能為陰性，且重復率≥95%判斷為合格[5]。

1.4.3 攜帶污染試驗

取新鮮陽性標本分別加入9個樣本管中，編號為P1～P9；再取樣本稀釋液分別加入9個樣本管中，編號為N1～N9；將上述2種樣本管按P1～P3、N1～N3、P4～P6、N4～N6、P7～P9、N7～N9順序依次用FA280自動糞便處理分析系統進行檢測。判斷標準：N1～N9無病理成分檢出且便隱血試驗陰性判斷為合格。

1.4.4 卡式便隱血試劑檢測范圍驗證

根據卡式便隱血試劑說明書提供的線性范圍要求，制備濃度梯度分別為3 000、2 000、1 000、500、1、0.5、0.2、0.1、0.05和0.025μg/mL的血紅蛋白（Hb）液，用FA280自動糞便處理分析系統進行檢測，每個濃度檢測3次。

1.4.5 儀器與手工法比對試驗

對收集的比對標本分別進行FA280自動糞便處理分析系統檢測及手工法檢測，觀察儀器檢測與手工法檢測結果的差異。對于結果不一致的，則通過手工法檢測復查儀器稀釋后的糞便懸液[6]。樣本比對總符合率≥80%判斷為合格。

1.5 統計學方法

應用SPSS 22.0軟件進行數據統計分析，計數資料以例數表示，采用χ2檢驗或Fisher確切概率法檢驗，一致性采用Kappa檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 空白試驗結果

10個樣本稀釋液管均未查出RBC、WBC、真菌、膿細胞、寄生蟲蟲卵等成分，且便隱血試驗結果全部為陰性（見表1）。檢測符合率為100%，空白試驗合格。

表1 FA280自動糞便處理分析系統空白試驗結果

2.2 重復性試驗結果

用FA280自動糞便處理分析系統連續檢測陽性樣本11次，第2～11次的檢測結果與第1次的檢測結果完全一致（見表2），檢出RBC、WBC、真菌情況以及便隱血試驗結果符合率均為100%。寄生蟲蟲卵陽性樣本重復檢測11次，結果均查見寄生蟲蟲卵，表明儀器檢測重復性好。

表2 FA280自動糞便處理分析系統重復性試驗結果

2.3 攜帶污染試驗結果

在交叉檢測的樣本中，編號為P的樣本檢測出大量RBC、WBC和真菌孢子，且便隱血試驗結果均呈陽性；編號為N的樣本檢測結果均為陰性（見表3）。儀器未出現交叉污染。

表3 FA280自動糞便處理分析系統攜帶污染試驗結果

2.4 卡式便隱血試劑檢測范圍驗證結果

當Hb濃度低于0.1μg/mL時，隱血試驗結果為陰性；當Hb濃度達到0.1μg/mL時，隱血試驗逐漸顯示出弱陽性，且隨著濃度增大，陽性程度增強。但當Hb濃度高達3 000μg/mL時，結果反而呈現陰性（見表4）。上述檢測結果與試劑說明書所述卡式便隱血試劑檢測陽性范圍為0.2～2 000μg/mL相符。

表4 FA280自動糞便處理分析系統卡式便隱血試劑檢測范圍驗證結果

2.5 儀器與手工法比對試驗結果

FA280自動糞便處理分析系統所報告的RBC、WBC、真菌與手工法檢測符合率分別為99.0%、97.5%、96.5%，Kappa值分別為0.852、0.802、0.701，RBC、WBC一致性較好，真菌一致性一般（見表5）。且FA280自動糞便處理分析系統對有形成分的檢出率更高，經χ2檢驗或Fisher確切概率法統計分析，差異有統計學意義（P＜0.05）。儀器與手工法檢測便隱血的符合率為96.0%，Kappa值為0.870，結果一致性極好（見表6），且差異無統計學意義（P＞0.05）。儀器與手工法結果比對合格。對于便隱血比對中結果不一致的8例樣本，經再次檢測復查，其中有6例陽性、2例陰性，表明FA280自動糞便處理分析系統檢測糞便隱血準確性比手工法更高。

表5 FA280自動糞便處理分析系統與手工法檢測糞便有形成分結果比對單位：例

表6 FA280自動糞便處理分析系統與手工法檢測糞便隱血結果比對單位：例

3 討論

糞便檢測由于取材方便、無創，且對消化系統相關疾病診療存在重要意義，因此成為臨床三大常規檢查項目之一[7]。但長期以來落后的檢測技術嚴重阻礙了糞便檢驗的發展，難以適應檢驗醫學的自動化、標準化進程。為提高糞便檢驗水平，拓展其臨床應用價值，2009年科瑞杰醫療器械公司研發了第一臺數字化全自動操作糞便檢驗儀，開創了我國糞便自動檢驗的先河[8]。隨后各種糞便自動檢測設備應運而生，并不斷推陳出新[9-10]。其中，沃文特公司研制的FA280自動糞便處理分析系統采用軌道式進樣，可自動采集標本理學性狀圖像，并能一站式完成樣本稀釋、混勻過濾、穿刺吸樣、采圖傳輸、計算機識別等過程，具有操作簡單、檢測快捷、干擾因素少、生物安全度高等優勢。

本研究對FA280自動糞便處理分析系統進行了檢測性能評價，結果顯示：樣本稀釋液10次檢測均未查出RBC、WBC、真菌等成分，且便隱血結果全為陰性，空白試驗合格。陽性標本重復檢測11次，第2～11次檢測結果與第1次檢測結果完全一致，儀器重復性好。裝有稀釋液的樣本管交叉放置于陽性樣本中，并用FA280自動糞便處理分析系統進行檢測，陽性標本均檢測到RBC、WBC和真菌，且便隱血試驗陽性；而稀釋液樣本管檢測結果全為陰性，表明儀器無攜帶污染，與該系列產品FA160糞便分析儀的相關報道一致[11]。經驗證，卡式便隱血試劑檢測陽性范圍與儀器說明書所述Hb濃度在0.2～2 000μg/mL范圍相符。通過比對試驗可知，FA280自動糞便處理分析系統與人工法檢測糞便RBC、WBC、真菌及便隱血結果符合率均在90%以上，結果一致性總體較好，符合臨床要求。由于寄生蟲蟲卵檢出率相對較低，數據存在偏差，有待擴大樣本量再進行寄生蟲蟲卵檢出情況比對。FA280自動糞便處理分析系統報告的有形成分檢出率及便隱血陽性率均高于手工法，分析其可能的原因包括：（1）儀器采集的視野數多于人工鏡檢要求的視野數，提高了有形成分的檢出率[12]；（2）手工取樣存在較大的隨機性，容易漏檢，而FA280自動糞便處理分析系統為全樣本混勻，可降低漏檢的概率；（3）儀器所需標本量大于手工涂片的標本量，在一定程度上提高了陽性率。當然，儀器所報告的陽性結果并非全為真陽性，在比對試驗中，RBC有2例假陽性，WBC有4例假陽性，真菌有4例假陽性，幾乎都是食物殘渣的形態干擾。故而，手工法仍然是形態識別的金標準[13]，當儀器報告結果時，必須通過人工審核，保證結果準確無誤，才能發送檢驗報告。便隱血試驗比對中有8例標本結果不一致，經手工法復查FA280自動糞便處理分析系統稀釋后的糞便懸液，結果有6例陽性、2例陰性，可能與標本選擇部位不同、反應時間控制不一致、試劑的靈敏度不同以及肉眼對陽性檢測線的判讀存在主觀性等因素有關。由比對試驗結果可知，儀器的靈敏度較高，僅1例WBC、3例真菌為假陰性，故而用儀器法篩查糞便標本或將給臨床檢驗工作帶來較大的便利。

FA280自動糞便處理分析系統是糞便檢驗技術的發展和不斷完善的成果，實現了樣本處理的自動化、標準化、規范化，有助于提高糞便檢測的陽性率及檢測效率，可有效避免交叉污染，降低人工鏡檢的生物安全風險，保護檢驗者及環境衛生。但儀器檢驗也存在自身的不足：在識別糞便顏色和性狀時容易受反光因素干擾；對于一些大小、形態與細胞等有形成分相似的糞便殘渣易判讀錯誤；對于一些原蟲類寄生蟲（如藍氏賈第鞭毛蟲卵、人芽囊原蟲和阿米巴包囊等）的識別能力較差；針對標本量不同的標本無法自動調整稀釋液體積，導致糞便懸液過稀或過濃，影響涂片結果；在Hb含量過高的糞便檢查中，便隱血試劑可因“鉤狀效應”出現假陰性結果[14]。故而儀器檢測尚不能完全取代人工鏡檢，需制定相應的復檢規則[15]，儀器報告結果也應經過人工審核確認后再發送。同時要保證檢驗質量，務必要做好檢測前和檢測后的質量控制，為臨床提供準確可靠的診療指標。

總體而言，FA280自動糞便處理分析系統檢測結果與手工法比對合格，儀器性能良好，適用于臨床糞便標本的檢測。