厭食康顆粒薄層色譜鑒別方法改進研究

劉永逸,楊 婧,符傳武,覃華亮,洪 薇,覃子龍

(柳州市質量檢驗檢測研究中心,廣西 柳州545006)

厭食康顆粒為常用甲類非處方中成藥,具有健脾、開胃、消食等功效,用于治療脾胃氣虛所致的小兒厭食癥[1]。厭食康顆粒由廣山楂、小槐花、白術、茯苓、麥芽、陳皮6味中藥組成,其中小槐花為主要處方藥味之一。小槐花為豆科植物小槐花Desmodium caudatum(Thunb.)DC.的干燥全株,分布于長江以南各省,全年可采,全株入藥,主要用于感冒發熱、小兒疳積、脘腹疼痛、疹出不透等病癥的治療[2-4],其含有苦參堿、山柰酚、豆甾醇、檸檬酚、樺木醇、槐果堿等化學成分[5-8],其醇提物和水提取物具有鎮痛、鎮靜催眠、抗氧化等方面的藥理作用[9-10]。

厭食康顆粒現行質量標準[1]小槐花薄層色譜鑒別方法存在有樣品前處理乳化現象嚴重,指標成分斑點不穩定,重現性差等問題。除此之外,其樣品及對照藥材前處理及展開劑中使用的三氯甲烷試劑,易分解而生成劇毒的光氣(碳酰氯)[11],不僅對檢測人員的身體健康構成較大威脅,也不符合當前綠色環保的檢驗理念。謝東等[12]在研究厭食康顆粒的質量控制所用的提取溶液及展開劑中同樣也含有三氯甲烷。基于現行質量標準和文獻方法的不足,作者進行深入研究,建立了可用于厭食康顆粒質量控制的新的薄層色譜鑒別方法。

1 儀器與試藥

ATS4薄層自動點樣儀(瑞士CAMAG公司);TLC Visualizer薄層色譜數碼成像系統(瑞士CAMAG公司);SK8200HP超聲波清洗器(上海科導超聲儀器有限公司);AE200電子分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司);雙槽展開缸(上海信宜儀器廠)。

小槐花(餓螞蝗)對照藥材(購自中國食品藥品檢定研究院,批號為0954-200204);硅膠G板(青島海洋化工有限公司,規格為20 cm×20 cm);水為純化水;三氯甲烷、二氯甲烷、甲醇、氨水等其他試劑均為國產分析純。

厭食康顆粒(規格:每袋裝7 g,批號:607003;608012;609002);缺小槐花陰性樣品;小槐花(Desmodiumcaudatum(Thunb.)DC.)藥材及其莖和葉,均由廣西純正堂制藥廠提供,其中小槐花藥材經柳州市食品藥品檢驗所李玲主任中藥師鑒定為正品。

2 方法與結果

2.1 現行標準方法

取本品內容物14 g,研細,加水30 m L使溶解,濾過,濾液用氨試液調p H至9,加三氯甲烷提取2次,每次15 m L,合并三氯甲烷液,蒸干,殘渣加甲醇1 m L使溶解,作為供試品溶液。另取小槐花對照藥材4g,分別加水煎煮30 min,濾過,濾液濃縮至30 m L,同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(2010年版《中國藥典》一部附錄VI B)試驗,吸取上述兩種溶液各10μL分別點于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-丙酮-二乙胺(6∶4∶0.5)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以稀碘化秘鉀試液。觀察供品色譜,在與對照藥材色譜相應的位置上,未顯相同顏色的斑點,且對照藥材色譜上的斑點顏色也較淺。薄層色譜如圖1所示(本次實驗同時取缺小槐花陰性樣品14g,小槐花藥材的葉4 g,小槐花藥材的莖4g,小槐花藥材4g,小槐花對照藥材4g,同法分別制成相應的試驗溶液,各吸取10μL分別點于上述同一硅膠G薄層板上;T:23℃;RH:59%;展距13 cm)。

圖1 厭食康顆粒的薄層色譜(現行標準方法)

2.2 改進的方法

取本品內容物28 g,研細,置于裝有二氯甲烷60 m L及2m L氨水的具塞三角瓶中,超聲10 min,傾倒出提取液,濾過,向具塞三角瓶再次加入二氯甲烷60m L及2m L氨水,超聲10 min,濾過,合并提取液,蒸干,殘渣加甲醇1 m L使溶解,作為供試品溶液。另取小槐花對照藥材2 g,分別加水煎煮30min,濾過,濾液蒸干,同法制成對照藥材溶液。按照薄層色譜法(2015年版《中國藥典》四部通則0502)試驗,吸取上述兩種溶液各20μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以二氯甲烷-甲醇-氨水(20∶2∶0.5)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以稀碘化秘鉀試液。觀察供試品色譜,在與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點,且對照藥材色譜上的斑點顏色也明顯比標準方法深。薄層色譜如圖2所示(本次實驗同時取缺小槐花陰性樣品28 g,小槐花藥材的葉2 g,小槐花藥材的莖2g,小槐花藥材2 g,同法分別制成相應的試驗溶液,各吸取20μL分別點于上述同一硅膠G薄層板上;T:23℃;RH:59%;展距10 cm)。

圖2 氣厭食康顆粒的薄層色譜(改進的方法)

3 討論

3.1 現行質量標準的不足

本研究曾多次采用現行質量標準測定同一批樣品,發現樣品斑點不穩定,時有時無,重現性較差,為了保證檢驗結果的準確、可靠,厭食康顆粒現行質量標準項下小槐花的薄層色譜鑒別方法急需改進。

3.2 前處理方法的確立

本研究前處理方法采用超聲提取法替換了現行質量標準中的萃取法,較好地解決了現行質量標準處理樣品時發生乳化的現象,且從圖1及圖2中可見,采用超聲提取法處理樣品和對照藥材時,在供品色譜與對照藥材色譜相應的位置上,顯相同顏色的斑點,且對照藥材色譜上的斑點顏色也較深,而采用萃取法處理樣品和對照藥材時,在供品色譜與對照藥材色譜相應的位置上,未顯相同顏色的斑點,且對照藥材色譜上的斑點顏色也較淺。可見,改進后的前處理方法明顯優于現行質量標準中的方法。

3.3 溫濕度對測定結果的影響

本研究分別考察了薄層板展開過程中溫度和相對濕度對結果的影響。結果表明:溫度對指標成分斑點幾乎無影響;但當相對濕度大于90%時,會影響指標成分斑點的顯現。

3.4 展開系統的選擇

本研究考察了正丁醇-冰醋酸-水、三氯甲烷-丙酮-濃氨、三氯甲烷-丙酮-二乙氨、二氯甲烷-甲醇-濃氨4種展開劑系統。結果顯示:正丁醇-冰醋酸-水的展開效果較差,且展開時間較長;三氯甲烷-丙酮-濃氨、三氯甲烷-丙酮-二乙氨、二氯甲烷-甲醇-濃氨經調整展開劑的配比,均能獲得較好的展開效果,但考慮三氯甲烷性質不穩定,易分解生成劇毒的光氣,對檢驗人員身體健康構成威脅,此外,還考慮到三氯甲烷和丙酮是易制毒試劑[13-14],購買及保管都有比較嚴格的規定,為了今后使用方便,改進方法選用甲烷-甲醇-濃氨展開劑系統。

3.5 其他建議

經實驗表明,指標斑點的成分只存在于小槐花的莖中,葉中未含有或其含量極低,建議廠家在確保足額投料的同時,還應重點關注所投小槐花藥材的莖葉比并及時對厭食康顆粒現行質量標準項下小槐花的薄層色譜鑒別方法進行修訂,以保證檢驗結果的準確、可靠。