探討妊娠糖尿病患者外周血miRNA-21檢測的臨床應用效果

王 樂,朱琳芳,畢艷平

（1.吉林中西醫結合醫院檢驗科;2.吉林中西醫結合醫院婦產科,吉林吉林 132000）

妊娠糖尿病是指沒有糖尿病癥狀的女性在懷孕時出現高血糖的癥狀。該病的發生提升了孕婦的臨床風險性[1]。孕婦在妊娠過程中發生糖尿病的病因主要對胰島素產生拮抗作用的激素分泌量呈現出明顯增加趨勢，同時對胰島素的敏感度降低[2-3]。明艷等[4]醫學者經臨床研究證實，妊娠糖尿病患者的外周血miRNA-21表達明顯高于正常群體，臨床可通過該項指標評價孕婦是否患有妊娠糖尿病，同時評估患者病情程度。分析外周血miRNA-21檢測在妊娠糖尿病患者中的表達情況對給予患者及時診斷和針對性治療具有積極意義。本次研究以妊娠糖尿病患者為對象，分析外周血miRNA-21檢測的應用效果。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取吉林中西醫結合醫院2019年6月至2020年12月期間收治的75例妊娠糖尿病患者作為本次研究觀察組，選取同期75例無糖尿病孕婦作為對照組。對照組孕婦年齡為22～38歲，平均年齡（28.18±4.89）歲；產次1～2次，平均產次為（1.18±0.32）次；孕周22～32周，平均孕周為（27.32±1.25）周；觀察組孕婦年齡為23～39歲，平均年齡（28.76±4.13）歲；產次1～2次，平均產次為（1.41±0.22）次；孕周21～31周，平均孕周為（27.87±1.12）周。兩組患者一般資料對比，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。診斷標準[5]：于孕24～28周行75 g口服葡萄糖耐量實驗，達到以下1項或1項以上條件即可確診：①1 h血糖不低于10.0 mmol/L；②2 h血糖不低于8.5 mmol/L。納入標準：①處于21-32孕周；②具有完整臨床資料；③在近3個月內不存在口服激素類藥物和避孕藥史；④單胎妊娠產婦。排除標準：①存在子宮內膜異位癥；②有卵巢手術史；③存在盆腔結核史；④同時具有其他嚴重性內分泌疾病。研究取得吉林中西醫結合醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 研究方法 于清晨空腹狀態下和餐后2 h采集兩組孕婦靜脈外周血各2 mL，常規方式對兩組孕婦血糖水平進行檢測。采用TRIzol試劑（北京天根生化科技有限公司，規格：100 mL）移步提取法提取外周血總RNA，于-- 80 ℃環境中對所提取到的總RNA進行凍存處理。采取電泳法檢測RNA完整性，采取紫外可見分光光度計（Amer sham，型號：Ultrospec 2100 pro）檢測RNA純度和濃度。

調查孕婦的相關資料，檢測孕婦的血糖指標，包括孕婦的孕次、年齡、產次、身高、孕周等各項一般資料，檢測并記錄兩組孕婦的空腹血糖水平（FPG）、餐后2 h血糖水平（2 hPG）和外周血miRNA-21水平。通過qRT-PCR對兩組孕婦的miRNA-21表達水平展開檢測，選取實時熒光定量PCR儀（北京金諾美生物技術有限公司，國械注準20153220948，型號：GNM-C7-8）實施qRT-PCR。對于cDNA和合成體系來說，其共計含有總RNA20～25 ng，將反應條件設置為42 ℃，1 h；95 ℃，5 min，PCR反應總體積參數為 20 μL。將實時PCR反應條件設置為先于95 ℃展開預變性，時間為 10 min，然后調整為 95 ℃，10 s;60 ℃，1 min，于實時熒光定量PCR儀上展開擴增反應。根據在內參U6的反應體系中獲取到的Ct值和niiRNA-21來對兩組孕婦的miRNA-21的相對表達水平展開計算。將5'-CGGCTAGCTTATCAGACTGA-3'作為miRNA-21的上游引物，將5'-CGGCTAGCTTATCAGACTGA-3'作為miRNA-21的下游引物，將5'-CGGCTAGCTTATCAGACTGA-3'作為U6上游引物，將5'-CGGCTAGCTTATCAGACTGA-3'作為U6下游引物。

1.3 觀察指標 ①分析妊娠糖尿病發生的影響因素：包括孕婦年齡超過35歲、產前肥胖、妊娠期營養過度、喜食甜食、有糖尿病家族史和外周血miRNA-21。其中產前肥胖的判定依據為肥胖度超過10%，肥胖度=（實際體質量-標準體質量）/標準體質量×100%；妊娠期營養過度的判定依據為妊娠前3個月體質量增加超過3 kg，3個月后每個月體質量增加超過0.35 kg；以孕婦主觀意愿判定其是否喜食甜食。②對妊娠糖尿病發生展開Logistic多因素分析，包括孕婦年齡超過35歲、產前肥胖、妊娠期營養過度、喜食甜食、有糖尿病家族史和外周血miRNA-21。

1.4 統計學分析 采用SPSS 19.0軟件進行數據分析，計量資料用（±s）表示，行t檢驗；應用Logistic回歸分析，行Waldχ2檢驗，P＜0.05差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 妊娠糖尿病發生的影響因素分析 對照組孕婦年齡超過35歲、產前肥胖、妊娠期營養過度、有糖尿病家族史和外周血miRNA-21的占比低于觀察組（P＜0.05），見表1。

表1 妊娠糖尿病發生的影響因素分析[例數（%）]

2.2 妊娠糖尿病患者多因素分析 妊娠糖尿病發生的影響因素主要有孕婦年齡超過35歲、產前肥胖、妊娠期營養過度、喜食甜食、有糖尿病家族史和外周血miRNA-21，OR值分別為 1.661、0.825、1.467、1.579、0.789和1.657（均P＜0.05），見表2。

表2 分析妊娠糖尿病發生的影響因素

3 討論

當下，妊娠糖尿病缺乏統一的臨床診斷和篩查標準，受該病引發病因具有復雜性影響，該病的發生與環境因素和遺傳因素等密切相關，病情監控尚無可靠且明確的生物標志物。miRNA-21來源于長RNA轉錄物，不存在非編碼DNA，是翻譯阻遏物起作用的目標mRNA與核苷酸的3'UTR配對[6]。大多數學者認為miRNA-21是生物病理學的重要控制器和基因表達的關鍵監管者，胰島β細胞在調節胰島素過程中，miRNA-21發揮著非常關鍵的作用[7]。胰島素抵抗作用的主要過程為激活磷脂酰肌醇-3-激酶和絲裂原活化蛋白激酶，對細胞代謝、生長和凋亡過程起到控制作用[8]。

因miRNA-21能夠對妊娠糖尿病的發生起到調控作用，對其表達量進行抑制可以調控患者胰島素水平，經臨床研究推測，miRNA-21能夠對妊娠糖尿病患者的信號通路起到明顯調控作用，可以從更深層次探索該病的相關分子機制，深入研究miRNA-21功能，有利于為妊娠糖尿病患者的臨床診斷和治療開辟全新的渠道[9]。臨床上有關于miRNA-21的研究表明，其作用于基因翻譯以后，在修飾調控過程中發揮著重要意義，可以在轉錄后對靶基因的表達起到負性調控作用，其表達存在較高的特異度，能夠在血液檢測過程中作為疾病診斷的一項重要標志物。妊娠糖尿病屬于一種多因素疾病，主要受環境因素、遺傳因素等影響，但是當下臨床上尚未給出明確的疾病發生機制，需要展開更深入、更徹底的研究。該項指標在糖尿病患者病情進展中發揮著非常重要的作用，但是其于妊娠糖尿病患者中的具體影響尚不清楚。本次研究結果表明，對照組孕婦年齡超過35歲、產前肥胖、妊娠期營養過度、有糖尿病家族史和外周血miRNA-21的占比低于觀察組（P＜0.05）。妊娠糖尿病發生的危險因素主要有孕婦年齡超過35歲、產前肥胖、妊娠期營養過度、喜食甜食、有糖尿病家族史和外周血miRNA-21。與張小燕等學者[10]的研究結論具有一致性。

綜上所述，給予妊娠糖尿病患者外周血miRNA-21檢測能夠顯著提升患者的診斷效果，可以為患者疾病的診斷與評估工作提供重要依據，具有推廣價值。