miRNA-23在多發(fā)性子宮肌瘤中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系

陳華忠，李紅梅

(1.建德市第一人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，浙江 杭州 311600；2.紅安縣人民醫(yī)院 超聲科，湖北 黃岡 438400)

子宮肌瘤是婦科臨床最常見的一種良性腫瘤，多見于育齡、喪偶及性生活不協(xié)調(diào)的婦女[1]。據(jù)報道，我國多發(fā)性子宮肌瘤在子宮肌瘤中所占比例較高[2]。多發(fā)性子宮肌瘤的發(fā)生機(jī)制尚不清楚，目前普遍認(rèn)為其發(fā)生是由多因素、多環(huán)節(jié)共同作用，包括正常肌層的細(xì)胞突變、性激素及局部細(xì)胞因子間的相互作用等[3]。miRNA是近年發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源性小RNA[4]，參與細(xì)胞增殖、分化、代謝等過程，并與腫瘤的發(fā)生發(fā)展存在一定關(guān)系[5]。最近有研究報道，miRNA-23參與乳腺癌、宮頸癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌等多種女性特發(fā)性腫瘤的發(fā)生發(fā)展[6]。然而，迄今國內(nèi)有關(guān)miRNA-23與子宮肌瘤關(guān)系的研究較少。本研究分析miRNA-23在多發(fā)性子宮肌瘤患者血清及組織中的表達(dá)及臨床意義，探討其是否參與調(diào)控子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展過程。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2017年3月—2019年3月建德市第一人民醫(yī)院婦科收治的子宮肌瘤手術(shù)患者161例，包括多發(fā)性子宮肌瘤93例(多發(fā)組)、單發(fā)性子宮肌瘤68例(單發(fā)組)。多發(fā)組年齡30～53歲，平均(41.93±10.07)歲；單發(fā)組年齡29～52歲，平均(41.76±9.82)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)超聲或MRI檢查及術(shù)后病理確診為單發(fā)或多發(fā)性子宮肌瘤，無其他婦科疾病，首次接受肌瘤切除術(shù)，患者知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重的心、肺、肝、腎功能障礙者，血液系統(tǒng)疾病者，免疫系統(tǒng)疾病者及合并其他良、惡性腫瘤者。另納入同期到我院體檢的30名健康女性作為對照組，年齡28～53歲，平均(41.59±8.66)歲，3組的年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，本研究經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 樣本收集 收集子宮肌瘤患者術(shù)前及對照組體檢當(dāng)日外周靜脈血4～5 mL，室溫靜置30 min，3 000 r/min離心15 min后，將血清轉(zhuǎn)移至無RNA酶的EP管中，-80℃保存待測，同時收集子宮肌瘤患者術(shù)后新鮮子宮肌瘤組織作為待測組織樣本，將樣本立即置入液氮冷凍處理，于-80℃保存待測。

1.3 主要試劑及儀器 miRNA-23引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成；總RNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄酶試劑盒、實(shí)時熒光定量PCR(qPCR)檢測試劑盒均購自大連寶生物有限公司；Nanodrop核酸檢測儀購自Thermo Fisher 公司；實(shí)時熒光定量PCR儀購自ABI公司。

1.4 實(shí)時逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測 (1)提取血清及經(jīng)超聲勻漿后的組織樣本中總RNA，DEPC水溶解，應(yīng)用Nanodrop核酸檢測儀檢測總RNA的純度及濃度，并利用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測所提RNA的完整性。(2)將miRNA-23逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，反應(yīng)體系：1 μmol/L逆轉(zhuǎn)錄特異性引物2 μL、總RNA 1 μL、100 mmol/L dNTPs 0.15 μL、10×RT buffer 2 μL、50 U/μL MultiScribeTM逆轉(zhuǎn)錄酶1.0 μL、20 U/μL RNA酶抑制劑0.2 μL，加DEPC水補(bǔ)至20 μL；反應(yīng)條件為42℃ 30 min，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA于4℃保存。(3)擴(kuò)增miRNA-23 cDNA。(4)采用2-ΔΔCt法計(jì)算miRNA-23表達(dá)水平，以β-actin為內(nèi)參，取三個復(fù)孔均值作為各樣本的平均Ct 值，先計(jì)算ΔΔCt=ΔCt(miRNA-23)-ΔCt(β-actin)，再計(jì)算2-ΔΔCt值，即為miRNA-23相對表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 血清中miRNA-23表達(dá)水平比較 多發(fā)組患者血清中miRNA-23的相對表達(dá)量(0.82±0.19)低于其他2組，單發(fā)組 (1.07±0.35)低于對照組(2.44±0.73)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖1。

2.2 組織中miRNA-23表達(dá)水平比較 多發(fā)組患者子宮肌瘤組織中miRNA-23的相對表達(dá)量(0.76±0.24)低于單發(fā)組 (0.99±0.27)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖2。

2.3 miRNA-23 水平與多發(fā)性子宮肌瘤患者臨床病理特征的關(guān)系 比較不同臨床資料多發(fā)性子宮肌瘤患者的miRNA-23 水平，結(jié)果顯示：不同年齡及是否絕經(jīng)的多發(fā)性子宮肌瘤患者血清及組織中miRNA-23表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但不同肌瘤數(shù)量、肌瘤體積、最大肌瘤直徑的患者血清及組織中miRNA-23表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 血清及組織中miRNA-23 水平與多發(fā)性子宮肌瘤患者臨床病理特征的關(guān)系Table 1 The relationship between the expression of miRNA-23 in serum and tissues and the clinicopathological features of patients with multiple uterine leiomyoma

3 討論

多發(fā)性子宮肌瘤是女性生殖系統(tǒng)最常見的良性腫瘤，多發(fā)生于 35～50歲[7]。研究顯示，我國多發(fā)性子宮肌瘤的發(fā)病呈逐年增加和年輕化的趨勢[8]。以往的研究顯示正常肌層的細(xì)胞突變、性激素及局部生長因子間的相互作用與多發(fā)性子宮肌瘤的形成和生長有關(guān)[9-10]，此外，子宮肌瘤的發(fā)病還可能與妊娠史、流產(chǎn)史、遺傳因素等有關(guān)[11-12]。然而，目前尚不十分清楚多發(fā)性子宮肌瘤發(fā)生的確切病因。

miRNA是一類高度保守的內(nèi)源性小RNA，在細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境中具有高度的穩(wěn)定性及組織來源特異性[13-14]，然而，在病理狀態(tài)下往往異常表達(dá)，可能發(fā)揮促進(jìn)腫瘤發(fā)生的作用[15]。近年隨著基因組學(xué)的快速發(fā)展，學(xué)者們對miRNA與肌瘤的關(guān)系有了更深的認(rèn)識[16]。史凡黎等[17]研究結(jié)果表明miRNA-23為子宮肌瘤組織中表達(dá)顯著失調(diào)的 microRNA之一。本研究結(jié)果顯示，多發(fā)性子宮肌瘤患者血清及肌瘤組織中miRNA-23表達(dá)水平顯著下調(diào)，表明miRNA-23可能發(fā)揮抑癌基因的作用參與多發(fā)性子宮肌瘤的發(fā)生與發(fā)展。這一結(jié)果與劉烜等[18]報道的miRNA-23在子宮肌瘤組織中表達(dá)異常降低相類似，而且，該研究還發(fā)現(xiàn)低表達(dá)的miRNA-23可能通過促進(jìn)孕激素受體 A蛋白的表達(dá)而促進(jìn)子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展，盡管該研究未涉及多發(fā)性子宮肌瘤。

本研究結(jié)果還顯示，不同肌瘤數(shù)量、肌瘤體積、最大肌瘤直徑的多發(fā)性子宮肌瘤患者血清及組織中miRNA-23表達(dá)水平差異顯著，表明子宮肌瘤數(shù)量越多、體積越大，則其血清及子宮肌瘤組織中miRNA-23的表達(dá)水平越低，這進(jìn)一步提示miRNA-23低表達(dá)可能參與多發(fā)性子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展，而且我們還發(fā)現(xiàn)miRNA-23的表達(dá)不易受個體因素或其他因素影響。

綜上所述，miRNA-23在多發(fā)性子宮肌瘤患者血清及組織中表達(dá)下調(diào)，并與肌瘤數(shù)量、體積及最大直徑密切相關(guān)，表明miRNA-23低表達(dá)可能與多發(fā)性子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展有一定關(guān)系。今后，研究者會擴(kuò)大病例的收集量，對miRNA-23在多發(fā)性子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展中的作用進(jìn)行更加深入的研究，以期為多發(fā)性子宮肌瘤患者的臨床診治提供更有價值的參考依據(jù)。