鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液細菌內毒素方法學確認

李佳 王謀琛

摘要：目的： 建立鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液實驗室轉移的細菌內毒素方法學確認。方法：采用《中國藥典》細菌內毒素檢查法-凝膠法。結果：鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液稀釋最大濃度為0.625mg/ml時，對鱟試劑檢查無干擾作用。結論：鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液在實驗室轉移后，按此方法進行細菌內毒素檢查法是可行的。

關鍵詞：鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液;細菌內毒素檢查法;干擾試驗

【中圖分類號】R97 【文獻標識碼】A 【文章編號】2107-2306（2021）14-01

一、目的

根據《鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液》質量標準【細菌內毒素】檢查項下規定，進行實驗室轉移的細菌內毒素方法學確認，確定樣品對不同廠家鱟試劑的最小不干擾倍數或最大不干擾濃度，以及樣品日常檢驗的稀釋倍數或稀釋濃度。

二、試驗方案：

1、試驗依據：《鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液》質量標準

《中國藥典》細菌內毒素檢查法-凝膠法

2、限值：L=0.6 EU/mg

3、方法：選擇兩個廠家的鱟試劑分別進行鱟試劑靈敏度復核、干擾試驗預實驗、干擾試驗、細菌內毒素試驗，試驗溫度：37±1℃，試驗保溫時間60±2min。

4、儀器和試藥：

恒溫水浴鍋、漩渦混合器、無熱原吸頭、移液槍、0.25 EU/ml鱟試劑（湛江安度斯生物有限公司、福州新北生化工業有限公司）、細菌內毒素工作標準品、細菌內毒素檢查用水（BET）（均為湛江安度斯生物有限公司）、3批樣品（規格：100ml：左氧氟沙星0.5g與氯化鈉0.9g）。

三、試驗操作及結果：

1、靈敏度復核試驗

取細菌內毒素工作標準品用BET水溶解稀釋，制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四個濃度的內毒素標準溶液，分別加入兩廠家鱟試劑中，結果兩廠家鱟試劑靈敏度測定值λC均為0.25EU/ml，均在0.5～2.0λ之間，鱟試劑靈敏度復核合格，可用于細菌內毒素檢查。

2、干擾試驗預試驗

2.1樣品有效稀釋（MVC）的計算

公式MVC=λ/L

其中：L為樣品限值L=0.6 EU/mg，λ為鱟試劑標示靈敏度，取目前市售鱟試劑最小靈敏度λ=0.03EU/ml，確定最大稀釋倍數不得超過MVD=cL/λ0.03=100。

2.2試驗操作

取細菌內毒素標準品，加樣品溶液稀釋，制成含2λ的供試品原液陽性對照溶液;另取樣品，加BET水制成稀釋2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍的樣品溶液（NPC組1、NPC組2），分別取原液、稀釋2倍、4倍、8倍、16倍、32倍的樣品溶液，分別加入1.0EU/ml內毒素標準品溶液，即得含2λ的稀釋2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍的樣品陽性對照溶液（PPC組1、 PPC組2）。采用兩個廠家的鱟試劑分別進行試驗，同時加BET水作陰性對照（NC），加2λ濃度內毒素標準品溶液作陽性對照（PC），結果見表1。

由表1可見，樣品1的最大不干擾濃度為0.625mg/ml，在該濃度下樣品對鱟試劑檢查無干擾作用，可進行正式干擾試驗。

3、干擾試驗

取3批樣品，根據干擾預試驗結果，將樣品稀釋終濃度為0.625mg/ml做為3批樣品溶液。分別用兩廠家鱟試劑進行干擾試驗，將細菌內毒素工作標準品用0.625mg/ml樣品溶液溶解稀釋，制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四個濃度的內毒素標準溶液，每個濃度平行做4管，作為干擾試驗系列（Et系列）;另將細菌內毒素工作標準品用BET水溶解稀釋，制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四個濃度的內毒素標準溶液，每個濃度平行做4管，作為鱟試劑標示靈敏度的對照系列（Es系列）;2管作為供試品溶液檢查（S），另外2管作為陰性對照（NC），結果見表2。

由表2可見，ES=0.25，在0.5λ～2.0λ之間，Et也在0.5 ES～2.0 ES之間，認為樣品在該濃度時對細菌內毒素檢查無干擾作用，符合細菌內毒素檢查有效性的要求，可以確定樣品的最大不干擾濃度為0.625mg/ml。

4、細菌內毒素檢查

取樣品3批，分別加BET水稀釋成濃度為0.625mg/ml的溶液，進行細菌內毒素檢查，結果樣品和陰性對照均為陰性，樣品陽性和陽性對照均為陽性，表明實驗有效。樣品管均為陰性，表明3批樣品中均未檢出細菌內毒素，與干擾試驗結果一致。

四、結論：

經以上試驗結果確定，樣品在最大不干擾濃度為0.625mg/ml的濃度下對兩個廠家鱟試劑不干擾。實驗室轉移后，鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液按此方法進行細菌內毒素檢測和質量控制是可行的。

參考文獻：

[1]《中國藥典》細菌內毒素檢查法

[2]《中國藥品檢驗標準操作規范》細菌內毒素檢查法