HDP 患者抗2- GP1 抗體水平與妊娠結(jié)局的相關(guān)性研究

張穎，武明莉，劉芳，楊小風(fēng)

（鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 鄭州 450000）

妊娠期高血壓疾病(hypertension disorder of pregnancy HDP)是妊娠期產(chǎn)婦特異性常見并發(fā)癥[1],典型臨床癥狀主要表現(xiàn)為高血壓、水腫、蛋白尿等[2]。HDP 是造成不良圍生兒結(jié)局的危險因素[3]。目前關(guān)于HDP 的發(fā)病機制較為復(fù)雜，其中以胎盤缺血缺氧致血管內(nèi)皮細(xì)胞嚴(yán)重?fù)p傷而導(dǎo)致全身小血管痙攣進(jìn)而表現(xiàn)出妊娠期高血壓的臨床癥狀的機制學(xué)說備受專家青睞[4]。 抗磷脂綜合征（antiphospholipid syndrome，APS），以抗磷脂抗體（antiphospholipid antibody，APA） 水平升高為主要病理性改變，參與血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷過程，是HDP 發(fā)病的重要危險因素[5,6]。近年來，有研究報道[7]抗β2-糖蛋白1 （β2-glycoprotein 1，β2-GP1）作為APA 重要的輔助因子也參與HDP 的缺血缺氧損傷過程。 目前國內(nèi)外關(guān)于β2-GP1 與HDP 診斷、 病情及妊娠結(jié)局評估的相關(guān)報道并不多，本研究選取2018年1月至2019年3月在我院治療的HDP 患者按照病情嚴(yán)重程度分為輕度、 重度。 同時選取健康產(chǎn)婦70例作為對照組，對比分析各組血清抗2-GP1 抗體水平及隨訪妊娠結(jié)局差異。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月至2019年3月在我院治療的HDP 患者87 例，其中輕度患者34例，重度患者53 例（輕度：孕周20 周后收縮壓≥140mmHg 和/或舒張壓≥90mmHg，蛋白尿≥0.3g/24h 或隨機尿檢尿蛋白陽性≥（+），重度：收縮壓≥160mmHg 和/或舒張壓≥110mmHg，蛋白尿≥2g/24h 或隨機尿檢尿蛋白陽性≥（++）。 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）診斷符合《婦產(chǎn)科學(xué)》中的標(biāo)準(zhǔn)[8]；（2）初產(chǎn)婦；（3）單胎妊娠；（4）患者及家屬知情同意；（5）入院前未經(jīng)治療。 排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）有胎兒畸形、胎兒遺傳性疾病；（2）產(chǎn)婦有肝腎功能障礙、結(jié)締組織病、HIV 感染等其他疾病；（3）妊娠期糖尿病、妊娠期并發(fā)重癥肝炎、妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥等并發(fā)癥。 同時選取健康產(chǎn)婦70 例作為對照組，HDP 組和對照組一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 HDP 組和對照組一般資料比較

1.2 實驗方法β2-GP1 抗體檢測： 三組研究對象均為孕晚期，分別抽取三組患者住院第一天空腹?fàn)顟B(tài)靜脈血3ml，置于含10%（體積比）枸櫞酸鈉抗凝液的試管中，室溫靜置30min 后，采用離心機以3000r/min 轉(zhuǎn)速離心15min，將上層分離血清置于-20℃冰箱 中保存?zhèn)溆茫捎妹嘎?lián)免疫吸附法（ELISA） 檢測孕婦β2-GP1 抗體水平，所需試劑盒購自蘇州露水生物科技有限公司，操作步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

選取血清樣本用緩沖液以1:20 比例稀釋，再以10 倍濃縮，取干凈吸管取酶結(jié)合物以1∶10 比例用緩沖液稀釋，清洗緩沖液，10 倍濃縮處理，用緩沖液與蒸餾水以1∶10 稀釋處理，并利用恒溫箱控制溫度在2～8℃。 分別于相應(yīng)的微孔中加入100μl 的標(biāo)準(zhǔn)品、陽性對照、陰性對照及稀釋處理后的樣本，并在室溫條件下進(jìn)行30min 的溫育。 洗板操作后進(jìn)行酶結(jié)合物的溫育，操作與處理時間與上述無異，再次進(jìn)行洗板處理，后取100μl 底物進(jìn)行微孔溫育15min，最后于所有微孔中加入終止液，最終進(jìn)行比色處理。

1.3 隨訪方法 所有對象定期每個月去醫(yī)院復(fù)查一次。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 本次研究的數(shù)據(jù)分析采用SPSS22.0 軟件，抗β2-GP1 抗體、年齡、孕周等資料采用（±s)形式表示，獨立樣本t 檢驗比較組間差異；不良妊娠結(jié)局等資料采用頻數(shù)或百分比表示，χ2檢驗分析組間差異。 檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 HDP 組和對照組血清抗β2-GP1 抗體、妊娠結(jié)局比較HDP 組血清抗β2-GP1 抗體水平明顯高于對照組（P＜0.05）；HDP 組胎兒生長受限、早產(chǎn)比例明顯高于對照組（P＜0.05）。 見表2。

表2 HDP 組和對照組血清β2- GP1 抗體、妊娠結(jié)局比較

2.2 HDP 組不同病情患者血清抗β2-GP1 抗體、妊娠結(jié)局比較HDP 組重度患者血清抗β2-GP1 抗體水平明顯高于輕度患者（P＜0.05）；HDP 組重度和輕度患者不良妊娠結(jié)局比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。 見表3。

表3 HDP 組不同病情患者血清抗β2- GP1 抗體、妊娠結(jié)局比較

2.3 HDP 組有無不良妊娠結(jié)局患者血清抗β2-GP1抗體比較 HDP 組不良妊娠結(jié)局患者血清抗β2-GP1 抗體水平明顯高于良好妊娠結(jié)局患者（P＜0.05）。 見表4。

表4 HDP 組有無不良妊娠結(jié)局患者血清抗β2- GP1 抗體比較

2.4 血清抗β2-GP1 抗體判斷不良妊娠結(jié)局的價值血清抗β2-GP1 抗體判斷不良妊娠結(jié)局的ROC 曲線下面積為0.686 (P＜0.05)，截斷值為5.80U/ml，靈敏性和特異性分別為70.00% 和62.00%，見圖1。

圖1 ROC 曲線圖

3 討論

妊娠期高血壓（HDP）一般為發(fā)生在妊娠20 周后孕婦以高血壓、 蛋白尿或全身器官功能紊亂為典型病理特征的妊娠特有疾病，發(fā)病率為2.5%～3%，可導(dǎo)致母親及胎兒器官出現(xiàn)不同程度的損傷，甚至危及母嬰生命安全,是導(dǎo)致母親及胎兒死亡的重要危險因素。 研究HDP 發(fā)病機制對及早診斷該疾病并尋找新的治療思路具有重要意義。 既往文獻(xiàn)報道[9,10]免疫、遺傳或血管內(nèi)皮損傷學(xué)說是HDP常見的發(fā)病機制。 血栓是貫穿HDP 發(fā)病機制全過程的主要病理性改變，同時血小板下降、血管內(nèi)皮損傷、病理性妊娠等也較為常見。 有學(xué)說報道[11]抗磷脂抗體（ACA）是誘發(fā)上述臨床病理性改變-ACA陽性綜合征的主要誘因，對孕嬰預(yù)后產(chǎn)生較大影響。 Singh 等[12]研究表明,抗磷脂綜合征(APS) 是HDP 發(fā)病的高危因素，ACA 在誘發(fā)ACA 陽性反應(yīng)間接誘導(dǎo)APS 的發(fā)生過程中具有一定意義。 近年來，有研究發(fā)現(xiàn)[13]抗2-糖蛋白1（抗β2-GP1）抗體是誘發(fā)ACA 陽性反應(yīng)影響更大的物質(zhì)，甚至可直接誘發(fā)APS 的發(fā)生，增加HDP 發(fā)病風(fēng)險。

ACA 是一類針對各種帶負(fù)電荷磷脂的自身抗體的代表，其靶抗原是存在于細(xì)胞膜或線粒體膜中具有甘油磷脂類結(jié)構(gòu)的帶負(fù)電荷的心磷脂，病理狀態(tài)下該類心磷脂轉(zhuǎn)移至細(xì)胞外通過與血清中的β2-糖蛋白1 型結(jié)合暴露抗原位點而激活產(chǎn)生自身抗體即抗β2-糖蛋白1 抗體（抗β2-GP1）。 有研究報道[14]抗β2-GP1 水平與血栓狀態(tài)密切相關(guān)，可間接反應(yīng)HDP 患者的病理性改變進(jìn)展情況，同時，抗β2-GP1 診斷特異性較強，其水平超過正常范圍一般見于自身免疫性疾病，可作為自身免疫血栓水平的標(biāo)志物，區(qū)別于感染性疾病。 有研究報道[15]抗β2-GP1 水平升高對反應(yīng)ACP 綜合征的診斷靈敏性為30%～60%，特異性98%，由此推測抗β2-GP1 水平檢測有利于間接反映HDP 患者血栓狀態(tài)和ACP 發(fā)展進(jìn)程，對診斷其疾病發(fā)展和指導(dǎo)臨床治療具有重要意義。 本研究結(jié)果顯示，HDP組血清抗β2-GP1 抗體明顯高于對照組（P＜0.05）；且HDP 組重度患者血清抗β2-GP1 抗體水平明顯高于輕度患者（P＜0.05）；提示，抗β2-GP1 水平升高不僅可作為診斷HDP 的重要指標(biāo)，還可反映HDP發(fā)病嚴(yán)重程度。 這與Ames 等[16]通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA) 檢測分析HDP 組和健康組孕婦抗β2-GP1 水平的差異發(fā)現(xiàn)前者患者水平顯著高于后者的結(jié)論一致。

本研究結(jié)果顯示，隨著HDP 患者抗β2-GP1抗體水平升高不良妊娠結(jié)局發(fā)生率升高; 提示，抗β2-GP1 抗體對HDP 患者產(chǎn)生一定負(fù)性作用，是導(dǎo)致孕婦不良妊娠結(jié)局的重要危險因素。 但本研究進(jìn)一步研究未發(fā)現(xiàn)抗β2-GP1 抗體水平升高對HDP 組重度和輕度患者不良妊娠結(jié)局的顯著影響，這與Zhang 等[17]報道結(jié)果不同，該學(xué)者發(fā)現(xiàn)，重度HDP 患者較輕度HDP 患者抗β2-GP1 抗體水平顯著升高且具有更高的不良妊娠結(jié)局。 這可能與研究對象不同和樣本量有限等有關(guān)，后期需擴大樣本進(jìn)一步確定抗β2-GP1 抗體水平在不同病情程度的HDP 患者妊娠結(jié)局的影響。

綜上所述，HDP 患者抗β2-GP1 水平升高，與不良妊娠結(jié)局可能存在一定關(guān)系。 既往文獻(xiàn)僅報道抗β2-GP1 抗體水平與HDP 發(fā)生率的相關(guān)性，很少有關(guān)于抗β2-GP1 抗體水平與HDP 發(fā)生嚴(yán)重程度和致不良妊娠結(jié)局發(fā)生率的關(guān)系。 既往文獻(xiàn)僅確定抗β2-GP1 抗體水平升高在診斷HDP 的價值，并未發(fā)現(xiàn)β2-GP1 抗體水平與疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性，本研究則基于既往文獻(xiàn)研究基礎(chǔ)，深入確定其水平與輕重度HDP 發(fā)生率和導(dǎo)致胎兒生長受限、早產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局發(fā)生率的關(guān)系，研究更深化HDP 發(fā)病機制的免疫學(xué)碩，更全面客觀，有利于為HDP 的治療提供新的免疫學(xué)思路。