宜春市育齡人群中地中海貧血基因診斷結(jié)果分析

朱小燕，林萌，劉夢姮

（宜春市婦幼保健院，江西 宜春 336000）

地中海貧血是世界上最常見的血紅蛋白病之一，主要是由于遺傳性珠蛋白基因缺陷導(dǎo)致血紅蛋白中珠蛋白鏈合成缺失或不足所引起的貧血或病理狀態(tài)，也稱珠蛋白生產(chǎn)障礙性貧血。 按照存在缺陷的珠蛋白基因的種類，地中海貧血一般可以分為α-、β-、δ-和γ-等類型，其中最為常見的是α-和β-地貧[1]。 地貧患者會(huì)遺傳給下一代，屬于常見的出生缺陷之一，給家庭和社會(huì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)[2]。 因此及早對地貧進(jìn)行篩查和基因型的分析，不僅有利于臨床對該病的治療，還能夠及時(shí)對患者進(jìn)行產(chǎn)前診斷，從而避免重型地貧患兒的出生，對減緩家庭和社會(huì)壓力以及實(shí)現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育具有重要的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2016年2月-2018年12月在我院產(chǎn)科門診或輔助生殖科門診進(jìn)行不孕不育檢查、孕前及孕期檢查，血液分析初篩陽性4345 例，且地中海貧血篩查陽性的育齡人群651 例為研究對象，其中男性163 例，平均年齡27.75±5.205歲；女性488 例，平均年齡26.51±5.046歲。 均在檢測前進(jìn)行知情告知并簽署知情同意書。

1.2 地貧篩查方法

1.2.1 血液分析檢查 采用EDTA-K2 真空抗凝管采集2ml 受檢者外周靜脈血，采用日本Sysmes 公司生產(chǎn)的XT-2000i 型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及配套試劑，對受檢者進(jìn)行血細(xì)胞分析，監(jiān)測紅細(xì)胞平均容積（MCV）、紅細(xì)胞平均血紅蛋白量（MCH）等指標(biāo)。 當(dāng)MCV＜80fL 和（或)MCH＜27pg 為地中海貧血初篩陽性。

1.2.2 血紅蛋白電泳分析 抽取2mlEDTA-K2 抗凝受檢者靜脈血，采用Sebia 公司的Capillarys 2全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行血紅蛋白檢測。 HbA2＜2.5% 或者HbA2＞3.5% 提示異常。

1.2.3 地貧基因檢測 血紅蛋白電泳分析異常者由護(hù)士抽2mlEDTA-K2 抗凝靜脈血，2～8℃冷鏈運(yùn)輸?shù)浇鞯习踩A星醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測。

方法 采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）和反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)進(jìn)行地貧基因檢測（PCR+導(dǎo)流雜交法），檢測3 種缺失型α-地貧（--SEA、-α3.7、-α4.2）、3 種突變型α-地貧（CS、QS、WS）及19 種突變型β-地貧。 α/β 地貧基因擴(kuò)增及檢測采用凱普配套DNA提取試劑盒提取DNA 基因組，提取的樣本DNA進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行導(dǎo)流雜交。 雜交顯色后人工肉眼判讀，陽性結(jié)果為藍(lán)紫色斑點(diǎn)。 操作過程參照凱普地貧基因檢測試劑說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 經(jīng)SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，利用［構(gòu)成比（%）］表示全部計(jì)數(shù)資料，進(jìn)行卡方χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 地貧基因檢出率 4345 例育齡人群中初篩出651 例疑似地貧患者，篩查陽性率14.98%，218 例經(jīng)地貧基因檢測為陽性，檢出率為33.5%，總攜帶率為5.02%。 其中α 地中海貧血檢出56 例，占25.69%,α 地貧攜帶率為1.29%；β 地中海貧血檢出160 例，占73.39%，α 復(fù)合β 地中海貧血2 例，占0.92%，β 地貧的攜帶率為3.73%。

2.2 α 地中海貧血基因類型及其分布 56 例α 地中海貧血基因攜帶者中檢出6 種基因型，以--SEA/αα 基因型為主，構(gòu)成比最大，明顯高于其他幾種基因型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，檢出1 例HbQS 突變型。 見表1。

表1 α- 地貧基因型及構(gòu)成比

2.3 β 地中海貧血基因類型及其分布 160 例β 地中海貧血基因攜帶者中檢出9 種基因型，以IVS-2-654 基因型構(gòu)成比最大，明顯高于其他幾種基因型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05，見表2。

表2 β- 地貧基因型及構(gòu)成比

3 討論

地中海貧血是一種常染色體隱性遺傳病，根據(jù)遺傳組合和臨床癥狀的不同，可把地中海貧血分為靜止型、輕型、中間型和重型。 靜止型或輕型地貧無明顯癥狀或僅有輕度貧血，不影響日常生活與工作，無需特殊治療；中間型地貧臨床表現(xiàn)個(gè)體差異較大，貧血程度不一，嚴(yán)重者需要長期靠輸血維持生命； 重型地貧包括重型α 地貧和重型β地貧，重型α 地貧又稱巴氏水腫胎，胎兒重度貧血、全身水腫、肝脾腫大，常見于孕晚期胎死宮內(nèi)或出生后數(shù)小時(shí)內(nèi)死亡； 重型β 地貧通常表現(xiàn)為重度貧血，黃疸，發(fā)育不良，如不進(jìn)行規(guī)范性治療，多在5歲左右死亡。

地中海貧血廣泛分布在全世界的沿海地區(qū)，在我國廣東、廣西、海南、四川等地區(qū)有較高的發(fā)病率，是我國南方地區(qū)重點(diǎn)防治的遺傳性貧血。 江西省宜春市雖不是地中海貧血的高發(fā)地區(qū)，但由于現(xiàn)在交通便利，人口流動(dòng)日益頻繁，地貧篩查陽性也較高，在我國南方各地報(bào)道的地貧攜帶率高低不等，范圍在2.5%～20.00%[3]之間，由于地貧基因攜帶率存在明顯的地域差異，在不同種族、不同地域具有不同的分布特點(diǎn)，宜春市4345 例疑似患者檢出地貧基因攜帶者218 例，總攜帶率為5.02%，α 地貧攜帶率為1.29%，略低于游雪云等[4]對江西省地區(qū)孕婦α 地貧發(fā)生率為1.59%的報(bào)道，β 地貧的攜帶率為3.73%，高于劉萍等[5]報(bào)道的江西省贛南地區(qū)2.46%。

研究發(fā)現(xiàn)中國地區(qū)常見的3 種α-地貧主要由-- SEA(東南亞缺失)、-α3.7 缺失(右缺失)、-α4.2缺失(左缺失)和αCS、αQS、αWS 三種突變引起，本研究α 地貧56 例，檢出6 種α 地貧基因類型，主要以東南亞型--SEA ／αα 缺失型為主 （69.64%），其次為-α3,7/αα 缺失型占17.86%，與鐘田雨[6]、賀鈺磊等[7]報(bào)道相似。-α4,2/αα 缺失型，--SEA ／ α3.7缺失型，-α4.2 ／ αα缺失型各檢出2 例，分別占3.57%，檢出1 例HbQS 突變型。

本研究β 地貧160 例，檢出9 種基因型，前四位依次為IVS-2-654、CD41-42、CD17、-28。 這4類基因型總例數(shù)為148 例，占92.50%。宜春市β 地貧主要基因型為IVS-2-654，與聶益軍等[8]研究結(jié)果相似，與唐敏[9]報(bào)道的四川川南地區(qū)以CD17 突變型為主和周冰燚[10]報(bào)道的廣東地區(qū)以CD41-42突變型為主有差異。

為了推進(jìn)預(yù)防出生缺陷工作，降低全市重型地中海貧血發(fā)生率，宜春市政府在江西省率先推出了政府買單，免費(fèi)防控地中海貧血，從2018年4月開始，在對宜春市免費(fèi)婚前檢 查對象中，血常規(guī)（MCV 和MCH）兩項(xiàng)指標(biāo)異常者，免費(fèi)進(jìn)行血紅蛋白電泳檢查，2019年起地中海貧血基因檢測經(jīng)費(fèi)也納入了財(cái)政預(yù)算，對于夫婦雙方基因診斷確診為都攜帶有α 地貧或都攜帶有β 地貧的育齡人群進(jìn)行產(chǎn)前咨詢和診斷[11,12]。 我院作為宜春市地中海貧血篩查中心，承擔(dān)了大部分的地貧篩查、診斷和干預(yù)等工作，大大降低了中間型或重型地貧患兒的出生率，提高了出生人口素質(zhì)。 本研究對宜春市的地貧基因類型進(jìn)行了分析，結(jié)合本地區(qū)基因型分布特點(diǎn)，有效進(jìn)行遺傳咨詢及產(chǎn)前診斷，對于本地區(qū)地中海貧血的預(yù)防、治療均具有重要的意義。