卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 表達及與預后的關系

張欣萍，李恩萍，史天云

（南陽市第一人民醫院婦科，河南 南陽 473000）

卵巢癌是發病率僅低于宮頸癌、 子宮內膜癌的婦科生殖系統惡性腫瘤，具有較高病死率[1]。 卵巢癌早期臨床癥狀不典型，患者確診時多為中晚期，腫瘤已擴散至盆腔器官，加之術后腫瘤易復發和轉移，患者預后極差[2,3]。 因此，尋找敏感、高效的腫瘤標記物對改善卵巢癌患者預后具有重要的臨床價值。 近年來，國內外研究均發現，基質金屬蛋白酶-3（matrix metalloproteinase-3，MMP3）能夠降解、 重塑細胞外基質，促進了癌細胞的侵襲及轉移，在結腸癌、卵巢癌等惡性腫瘤中均呈高表達[4,5]。基質金屬蛋白酶組織抑制物-3（tissue inhibitors of metalloproteinase-3，TIMP3）能抑制MMP3 活性，影響腫瘤的浸潤及轉移，在膽囊癌、卵巢癌等組織中表達異常[6,7]。 為了揭示血清MMP3、TIMP3 表達與卵巢癌預后的關系，從而為臨床卵巢癌患者的預后評估提供參考，本研究選取我院2015年10月-2017年10月收治的74 例卵巢癌患者，探討了血清MMP3、TIMP3 表達及其與預后的關系，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2015年10月-2017年10月收治的74 例卵巢癌患者作為卵巢癌組。 納入標準：⑴符合《婦產科學》[8]中卵巢癌診斷標準；⑵經病理學證實為卵巢癌；⑶無其他惡性腫瘤；⑷患者簽署知情同意書。 排除標準：⑴合并認知、血液系統疾病者；⑵腎、肝、肺等多器官功能嚴重損傷者；⑶接受內分泌治療、放療、化療者；⑷臨床資料不全者。 另取同期于我院接受治療的60 例卵巢囊腫患者作為對照組。 卵巢癌組：年齡37～69歲，平均52.18±7.14歲； 體質量指數19.50～27.85kg/m2，平均23.25±1.56kg/m2。 對照組：年齡36～71歲，平均51.65±6.57歲； 體質量指數19.50～27.85kg/m2，平均23.25±1.56kg/m2。 兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 樣本收集與保存 卵巢癌組、 對照組均在住院第2d 清晨采集空腹靜脈血約4ml，室溫下靜置2h，經離心機離心后取上清液，存于-80℃環境待測。

1.2.2 血清MMP3、TIMP3 表達水平檢測 采用酶聯免疫吸附試驗檢測兩組血清MMP3、TIMP3 表達水平，操作過程嚴格遵循試劑盒說明書進行。 試劑盒購自上海江萊生物科技有限公司，KHBST-360酶標儀購自科華生物有限公司。 血清MMP3、TIMP3 表達水平＞均值，為高表達； 血清MMP3、TIMP3 表達水平≤均值，為低表達。

1.3 隨訪 對所有患者術后進行3年隨訪，隨訪期間患者死亡即終止，隨訪方式為電話或門診復診，記錄患者生存期。 術后1年內，1 次/月； 術后第2年，1 次/季；術后第3年，1 次/半年。

1.4 觀察指標 ⑴比較卵巢癌組、 對照組血清MMP3、TIMP3 表達水平。 ⑵分析卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 表達水平與不同病理學特征的關系。 根據術后病理判斷淋巴結是否轉移。 ⑶分析影響卵巢癌患者預后的危險因素。 ⑷根據Kaplan-Merier 生存曲線分析血清MMP3、TIMP3 表達水平與卵巢癌預后的關系。

1.5 統計學方法 采用SPSS20.0 軟件進行數據分析。 計數資料以例數或率表示，采用χ2檢驗；符合正態分布的計量數據以（±s）表示，組間比較采用t檢驗； 采用Cox 比例風險回歸模型分析影響卵巢癌患者預后的危險因素；采用Kaplan-Merier 生存曲線分析分析生存率。 P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 卵巢癌組、 對照組血清MMP3、TIMP3 表達水平比較 卵巢癌組血清MMP3、TIMP3 表達水平高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。 見表1。

表1 卵巢癌組、對照組血清MMP3、TIMP3 表達水平比較（±s）

表1 卵巢癌組、對照組血清MMP3、TIMP3 表達水平比較（±s）

組別 n卵巢癌組對照組t 值P 值74 60 MMP3（ng/ml）256.79±47.12 121.86±24.38 20.097 0.000 TIMP3（pg/ml）340.64±64.13 214.97±40.25 13.210 0.000

2.2 卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 表達水平與不同病理學特征的關系 血清MMP3、TIMP3 表達水平與卵巢癌患者國際婦產聯盟（Federation International of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期、分化程度、淋巴結轉移、腹腔積液量有關（P＜0.05）。 見表2。

表2 卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 表達水平與不同病理學特征的關系[n（%）]

2.3 影響卵巢癌患者預后的危險因素分析 74 例卵巢癌患者，隨訪3年，失訪5 例，存活26 例，死亡43 例，3年存活率為37.68%。Cox 比例風險回歸模型分析結果顯示，FIGO 分期增高、高分化、淋巴結轉移、腹腔積液量＞200ml、血清MMP3 及TIMP3表達水平過高是影響卵巢癌患者預后的獨立危險因素（P＜0.05）。 見表3。

表3 影響卵巢癌患者預后的危險因素分析

2.4 血清MMP3、TIMP3 表達水平與卵巢癌預后的關系 Kaplan-Merier 生存曲線分析顯示，血清MMP3、TIMP3 高表達患者的3年生存率分別為20.41%、18.61% 均低于低表達患者的80.00%、69.23%（P＜0.05）。 見圖1、圖2。

圖1 血清MMP3 表達生存曲線

圖2 血清TIMP3 表達生存曲線

3 討論

卵巢癌的發生機制及影響因素較為復雜，卵巢癌帶瘤患者的生存時間較短，易出現腫瘤向遠處臟器轉移，增加病死風險[8,9]。 目前臨床以綜合性措施治療卵巢癌，包括手術治療、放化療等，患者的病情得到了緩解，但治療后無瘤生存期仍然較短[10]。 雖然人附睪蛋白、糖鏈蛋白125（CA125）可以作為臨床診斷卵巢癌及評估預后的參考指標，但其診斷不同類型卵巢癌的特異性存在局限性，整體診斷靈敏度較低[11]。 而本研究對卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 表達的探討，具有以下兩個方面的價值： ⑴揭示了MMP3、TIMP3 與卵巢癌發生及發展的關系； ⑵為臨床卵巢癌患者預后評估提供理論依據。

MMP3 是鋅離子依賴的內分泌蛋白酶，屬于亞類金屬蛋白超家族，可以降解細胞外基質中的蛋白成分，維持機體正常代謝及重組[12]。 Bufu 等[13]研究發現，MMP3 高表達表明了對細胞外基質屏障的破壞增強，促進了癌細胞的侵襲及轉移。 TIMP3 是MMP3 的抑制劑，不僅可以抑制MMP3 對細胞外基質中蛋白成分的講解，還可以促進癌細胞的生長及轉移[14]。 部分研究者探討了MMP 及TIMP3 在惡性腫瘤患者中的表達情況，但缺乏MMP3、TIMP3表達與卵巢癌患者臨床病例特征及預后關系的研究。

本次研究對于卵巢癌患者和卵巢囊腫患者血清MMP3、TIMP3 表達水平的分析研究可見，卵巢癌組血清MMP3、TIMP3 表達水平明顯升高，遠高于卵巢囊腫患者，提示MMP3、TIMP3 均參與了卵巢癌的發生及發展。 通過匯總分析不同相關文獻，筆者認為這主要由于MMP3、TIMP3 的下面幾個方面的作用相關[15-17]：(1)卵巢癌細胞出現浸潤及轉移的關鍵是能降低細胞外基質，MMP3 能降解幾乎所有的細胞外基質，降低細胞之間的黏附狀態，增強卵巢癌細胞在侵襲過程中突破各種屏障的能力；(2)MMP3 過量表達后還可以降低卵巢癌細胞脈管基膜,使腫瘤可以更加容易的轉移至脈管系統及周圍組織,進而形成連鎖反應,有利于腫瘤的生長及侵襲;(3)具有轉移傾向的卵巢癌細胞還能自身分泌或誘導其他細胞分泌MMP3，破壞基底膜完整性，向卵巢外器官轉移；(4)TIMP3 能與活化的間質膠質酶、 溶解素及MMP3 形成1:1 共價化合物，當MMP3 表達水平升高時，機體反應性地調節升高TIMP3。 國內外研究發現[18]，MMP3、TIMP3 在卵巢癌患者血清中存在過高表達，患者更容易出現腫瘤轉移，佐證了本研究結果。 在探討卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 表達水平與不同病理學特征的關系過程中，本研究發現，FIGO 分期較晚、分化程度較高、存在淋巴結轉移、腹腔積液量＞200ml 的卵巢癌患者，血清MMP3、TIMP3 高表達的占比越高，提示血清MMP3、TIMP3 表達與卵巢癌患者的臨床病理特征有關，這主要由于血清MMP3、TIMP3 表達過高會增強卵巢癌細胞對盆腔內臟器組織的浸潤能力及向卵巢外器官轉移的能力。 對影響卵巢癌患者預后的危險因素分析可見，FIGO 分期增高、高分化、淋巴結轉移、腹腔積液量＞200ml、血清MMP3及TIMP3 表達水平過高是影響卵巢癌患者預后的獨立危險因素，提示血清MMP3、TIMP3 表達與卵巢癌患者臨床預后的關系密切，臨床可以通過隨訪血清MMP3、TIMP3 表達情況，進而評估卵巢癌患者的預后情況。 進一步分析血清MMP3、TIMP3表達水平與卵巢癌預后的關系發現，血清MMP3、TIMP3 高表達患者的3年生存率均低于低表達患者，表明血清MMP3、TIMP3 高表達的卵巢癌患者生存時間更短，預后較差。 分析原因可能為：血清MMP3、TIMP3 高表達預示著卵巢腫瘤細胞的增殖活性較高，患者的FIGO 分期、分化程度及遠處轉移風險相對較高，治療難度大，更可能導致不良預后，降低生存率。

卵巢癌患者血清MMP3、TIMP3 呈高水平表達，不同臨床病理特征患者血清MMP3、TIMP3 表達存在差異，兩者有望成為卵巢癌預后的評估指標。