蒙藥蘇格木勒-3湯對IDCM心律失常作用研究

胡鵬飛，解玉蘭，耿婉如，馬奎影，邵立群，于 淼，陳少青，王 羽，趙 明

（1.內蒙古民族大學附屬醫院心內科，內蒙古 通遼 028007；2.內蒙古民族大學，內蒙古 通遼 028043；3.內蒙古民族大學醫學院，內蒙古 通遼 028043）

獲得性擴張型心肌病（dilated cardiomyopathy，DCM）是心血管疾病中常見的疾病，其中最常見的是免疫性DCM（Immune dilated cardiomyopathy，IDCM）.研究發現病毒性心肌炎（viralmyoearditis，VMC）可演變為IDCM［1］.蒙藥SD-3作為傳統蒙藥，可以調節三根、七素平衡，起到鎮靜、安神等作用，筆者臨床研究中發現其有減少房早、室早發生率同時改善心率變異性，抗心律失常具有一定效果［2］.而蒙藥SD-3對IDCM并發心律失常作用尚未見報道，本研究目的是明確蒙藥SD-3對IDCM并發心律失常作用及可能的機制.

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗動物為30只Balb/c雄性小鼠（13～15 g），購買于吉林大學基礎醫學院動物中心，許可證號：scxk（吉）2011-0004；CVB3（Nancy株）由吉林大學基礎醫學院微生物教研室贈送，病毒原液效價為10-5TCID50/L.CX40抗體、CX43抗體、內參抗體β-actin購于Abcam公司.

1.2 免疫性擴張型心肌病動物模型構建及給藥

小鼠適應性喂養后，隨機分成對照組（每組10只），IDCM組（每組10只），蒙藥SD-3組（每組10只）.IDCM組、蒙藥SD-3組腹腔內注射0.1 mL10-5TCID50CVB3，以后每4周腹腔內重復接種0.1 mL 10-5TCID50CVB3，對照組腹腔注射不含病毒的培養液，共3個月模型制備成功后，蒙藥SD-3組給予蒙藥SD-3（15 mg·kg-1），灌胃處理，一日一次；對照組和IDCM組小鼠則分別灌胃給予0.9% NaCl 0.2 mL，給藥4周.

1.3 心電圖檢查及病理取材、切片制作

給藥4周后，行心電圖檢測后高濃度CO2處死動物，4%多聚合甲醛（500 mL）經腔靜脈灌流心臟，固定心臟，包埋，切片后，進行病理檢測.

1.4 免疫印跡檢測相關蛋白的表達

免疫印跡實驗檢測心肌組織中縫隙連接蛋白的表達情況.

1.5 統計學方法

應用統計軟件SPSS17.0對相關的數據進行方差分析檢驗判斷均數差異的顯著性，統計的數據用（±s）表示.

2 結果

2.1 小鼠的一般情況

對照組小鼠活動自如無死亡；IDCM組小鼠在實驗開始第2周，出現明顯的活動減少、精神不佳、毛蜷縮無光澤、進食量減少，無死亡；蒙藥SD-3組小鼠一般狀態不如對照組小鼠，但強于IDCM組小鼠.

2.2 病理學改變

通過HE染色結果可知，對照組小鼠的心臟心肌組織整齊，無心肌壞死病理改變；IDCM組小鼠心肌排列紊亂，間質出現水腫，心肌間隔變寬，并出現淋巴細胞聚集等現象，給予蒙藥SD-3后上面現象有所改善.通過Masson染色結果可知，與對照組相比，IDCM組小鼠心肌纖維化明顯，而給予蒙藥SD-3后，心肌纖維化明顯受到抑制，見圖1、圖2.

圖1 各組小鼠心肌HE染色（×200）Fig.1 HE staining of mouse myocardial muscle in each group(×200)

圖2 各組小鼠心肌masson染色（×200）Fig.2 Masson staining of mouse myocardial muscle in each group(×200)

2.3 各組小鼠心肌組織CX40、CX43表達變化

較對照組小鼠心肌組織中蛋白CX40（1900±280）、CX43（545±57），IDCM組小鼠心肌組織CX40（733±89）、CX43（323±46）表達減少；與IDCM組小鼠相比，蒙藥SD-3組小鼠CX40（1869±341）、CX43（538±72）表達明顯增加（P＜0.05），見圖3.

圖3 蒙藥蘇格木勒-3對小鼠心肌組織中CX40、CX43表達的影響Fig.3 Effect of Mongolian medicine Sugemule-3 decoction on CX40 and CX43 expression in mouse myocardium

2.4 各組小鼠心電圖變化

對照組小鼠未見明顯心律失常，IDCM組小鼠室早明顯增多，與IDCM組小鼠相比，蒙藥SD-3組小鼠室早明顯減少，見圖4.

圖4 各組小鼠心電圖變化Fig.4 Changes of mouse electrocardiograms in each group

3 討論

心肌病是由于多種原因導致的心肌發生炎癥性的改變，其中由于病毒感染繼發的免疫調節異常，即IDCM，在青少年中發病率呈逐年上漲的趨勢.而目前IDCM的治病機制不明且尚未找到有效抵抗病毒的藥物.因此，探索IDCM的致病機制和尋找到有效的干預手段已成為國內外研究的重點內容.

心肌細胞之間通過閏盤連接，閏盤作為一個蛋白網，參與心肌電傳導等生理過程，當發生心肌纖維化、心肌重構等病理改變時，閏盤蛋白在上述病理改變后也會發生改變.閏盤中包括縫隙連接，其是由兩個六聚體在細胞間相互對接形成，負責心肌細胞之間電信號的傳導，心肌細胞縫隙連接蛋白由connex-in40、connexin43和connexin45構成［3］.大量文獻報道，當各種原因導致connexin蛋白表達減少，可誘發心律失常［4-5］.本研究團隊也在前期實驗發現，阿霉素心肌病并發心律失常大鼠的心肌中，通過電子顯微鏡檢測，可觀察大鼠心室肌的閏盤結構被破壞，connexin40、connexin43及p-connexin43的表達明顯減低［6-7］，文獻報道，病毒性心肌炎小鼠心肌中CX 43和CX 45表達明顯減少［8］.筆者在臨床研究中發現蒙藥蘇格木勒-3湯有抗心律失常作用，但對IDCM心律失常作用及機制尚未清楚.本研究結果明確蒙藥SD-3可減少IDCM并發心律失常，其作用機制可能與降低IDCM心肌纖維水平，提高心肌組織中Cx40、Cx43表達相關.