紅細胞分析參數輔助診斷珠蛋白生成障礙性貧血亞型的研究*

王鍍津,魏莉平

1.鄂東醫療集團市中心醫院/湖北理工學院附屬醫院檢驗科，湖北黃石 435000；2.腎臟疾病發生與干預湖北省重點實驗室，湖北黃石 435000；3.鄂東醫療集團市婦幼保健院檢驗科，湖北黃石 435000

珠蛋白生成障礙性貧血(簡稱地貧)是由于珠蛋白基因缺陷或者點突變導致血紅蛋白的組分和含量發生改變從而導致不同程度溶血性貧血的一組遺傳性疾病[1]。地貧是一種常染色體隱性的單基因遺傳病。地貧分為α地貧、β地貧、δβ地貧、δ地貧，其中以β地貧和α地貧較為常見[2-3]。地貧根據臨床表型可分為輕型、中型、重型3種臨床表型。α地貧是由于16號染色體短臂末端α珠蛋白基因缺陷所致，β地貧為位于11p15.5 上的β珠蛋白基因序列發生插入、缺失及突變等所導致。地貧在我國廣東[4]、廣西[5]及四川地區的發病率高，具有明顯地域差異，但是隨著經濟與社會的發展，人口流動性的增加，不同地區疾病譜也發生重大變化[6]。地貧作為出生缺陷防控的重要組成部分，早發現、早干預手段也應與時俱進。血細胞分析參數與地貧患者或地貧基因攜帶者有極大的相關性，尤其是紅細胞計數(RBC)、紅細胞平均體積(MCV)、血紅蛋白濃度(HGB)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細胞分布寬度(RDW)等都可以為地貧的診斷提供依據。本研究以鄂東醫療集團市中心醫院及市婦幼保健院地貧篩查患者為研究對象。詳細分析了本地區地貧基因型別及對應的血細胞分析參數對地貧的輔助診斷效果，為本地區地貧出生缺陷防控工作提供了有效的參考數據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取 2019 年1月至 2021 年1月在鄂東醫療集團市中心醫院及市婦幼保健院出生的新生兒患者，經過臨床醫師篩選出高度疑似地貧患者190例,全部進行地貧基因及紅細胞相關參數檢測。

1.2儀器與試劑 珠海Hema 9600 PCR擴增儀，亞能生物YN-H96型全自動核酸分子雜交儀。深圳亞能地貧基因檢測試劑盒。希森美康醫用電子(上海)有限公司XN-9000全自動血細胞儀及其配套試劑。

1.3地貧基因及紅細胞參數檢測

1.3.1紅細胞參數分析 使用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管抽取患者2 mL外周靜脈血，XN-9000全自動血細胞儀分析紅細胞各項參數。

1.3.2地貧基因檢測 使用EDTA 抗凝管抽取患者2 mL外周靜脈血，采用中山大學達安基因股份有限公司Smart-32 型自動核酸提取儀磁珠法提取全部外周血基因組 DNA。按照深圳亞能地貧基因檢測試劑盒檢測說明書及實驗室操作規程檢測3種缺失型α地貧(--SEA、-α3.7和-α4.2)、3種非缺失型α地貧(αCSα、αQSα和αWSα)及17種突變型β地貧(41-42M、654M、-28M、71-72M、17M、βEM、IVS-Ⅰ-1M、IVS-Ⅰ-5M、27/28M、43M、-29M、-30M、31M、-32M、14-15M、IntM和CAPM)基因。

2 結 果

2.1地貧基因檢測結果 本研究選取臨床高度懷疑地貧患者190例，經過地貧檢測，檢出地貧基因攜帶者103例，占54.20%，其中攜帶α地貧基因59例，陽性率為57.30%，攜帶α地貧基因中--SEA/αα(東南亞型)及-α3.7/αα (右側α缺失)陽性率較高；攜帶β地貧基因42例，陽性率為40.80%，其中654M (C→T)、41-42M (-TTCT)陽性率較高。αβ復合地貧基因型1例為4.2雜合缺失并654M雜合突變；α缺失復合α突變1例，為3.7缺失復合CSM突變。所有檢測病例中未發現純合子。見表1。

表1 地貧基因陽性分布情況

2.2各種地貧基因攜帶者的紅細胞參數比較 為保證參考范圍及分析結果的一致性，本研究從103例地貧基因攜帶者中篩選出攜帶α地貧基因43例，攜帶β地貧基因25例，無地貧基因攜帶者22例，分別檢測RBC、紅細胞比容(HCT)、HGB、MCV、MCH、MCHC、紅細胞體積分布寬度-變異系數(RDW-CV)、網織紅細胞(RET)。α地貧基因攜帶者與無地貧基因攜帶者RBC、MCV、MCH、MCHC比較，差異均有統計學意義(P<0.05)；β地貧基因攜帶者與無地貧基因攜帶者MCV、MCH、MCHC、RDW-CV比較，差異均有統計學意義(P<0.05)；α地貧基因攜帶者與β地貧基因攜帶者RBC、HCT、HGB、MCHC、RDW-CV、RET比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 各種地貧基因攜帶者的紅細胞參數比較

項目nMCH(pg)MCHC(g/L)RDW-CV(%)RET(×106/L)α地貧基因攜帶者4326.45±0.53a325.10±1.52ac15.64±0.25c48.78±3.63cβ地貧基因攜帶者2527.41±1.02a331.00±2.14a20.15±0.73b67.17±7.26無地貧基因攜帶者2231.48±0.75338.00±2.1214.85±0.4252.96±6.06

3 討 論

地貧是出生缺陷防控的重點方向之一，只有充分了解本地區地貧發病率，才能更有針對性地做好預防措施，防止重度地貧患兒出生。地貧發病有明顯的地域特征，不同地區的基因突變頻率也存在很大差異，隨著經濟社會的發展，人口大量流動，各地區地貧疾病譜也發生改變。鄂東南地區地處鄂贛皖交界地區，地貧基因譜受周邊人口流動影響很大。文獻[7-8]報道武漢主要以β地貧基因(69.23%)為主。江西省部分地市的基因型以α地貧基因為主，其中α地貧以αα/--SEA基因型突變為主,β地貧以IVS-Ⅱ-654、CD41-42雜合子基因型突變為主,這跟鄂東南地區的地貧基因型較為接近[9]。

本研究選取了190例經臨床醫師充分評估后高度疑似地貧患者進行基因檢測，確診103例地貧基因攜帶者。其中攜帶α地貧基因基因59例，--SEA/αα(東南亞型)以及-α3.7/αα (右側α缺失) 陽性率較高。攜帶β地貧基因42例，其中654M(C→T)、41-42M(-TTCT)陽性率較高。攜帶αβ復合地貧基因型1例，為4.2雜合缺失并654M雜合突變，α缺失復合α突變1例，為3.7缺失復合CSM突變。

本研究結果顯示，α地貧基因攜帶者、β地貧基因攜帶者均可以通過MCV、MCH、MCHC與無地貧基因攜帶者相互區分。α地貧基因攜帶者及β地貧基因攜帶者紅細胞分析參數之間也存在不同，α地貧基因攜帶者與β地貧基因攜帶者RBC、HCT、HGB、MCHC、RDW-CV、RET比較，差異均有統計學意義(P<0.05)，也就是以上紅細胞分析參數可以用來輔助診斷α地貧與β地貧。有研究報道紅細胞檢測參數對β地貧基因型之間也有鑒別作用[10-12],這說明要足夠重視對疑似地貧病例的血常規參數的分析，其對地貧及亞型診斷具有積極作用。本研究顯示，RET可以用來鑒別α地貧與β地貧。

地貧防治是一項長期且艱巨的任務，疾病基因譜在不同區域、不同種族之間都處于動態變化，因此，提高地貧的篩查技術具有重要意義。本研究為紅細胞檢測參數對地貧的診斷提供了新的思路。隨著檢測手段的不斷更新，遺傳疾病的檢測能力也在不斷提高，但是技術的更新離不開臨床經驗的積累，臨床醫師要足夠重視對傳統檢驗項目的深入分析，這樣才能提高檢驗項目輔助診斷疾病的能力。