雛鴨病毒性肝炎的診治與體會

顧振東

（靖遠縣農業農村局農產品質量安全檢驗檢測管理站，甘肅 白銀 730600）

雛鴨是整個養鴨過程的關鍵，關系后期鴨生長發育和生產性能的正常發揮。由于剛出生的雛鴨體質較弱，絨毛少，管理不當容易導致雛鴨感染病毒，危害其健康。鴨病毒性肝炎(Duck Virus Hepatitis，DVH)是由鴨肝炎病毒（DHV）引起雛鴨的一種常見傳染病，具有傳播速度快、病程較短、致死率高等特點。該病主要發生于3周齡以下雛鴨，潛伏期通常為1~2 d，死亡多在發病后的3~4 d。臨床表現精神沉郁、抽搐、轉圈以及角弓反張、全身性痙攣等神經癥狀，剖解有肝臟出血、腫脹、膽汁顏色較淡等病理變化。鴨肝炎分布范圍比較廣，在上世紀50年代有人用雞胚分離出鴨肝炎病毒后，在世界各國逐漸蔓延開來。近年來，鴨肝炎呈大面積流行，部分毒株的毒性大幅增強，抗原性也逐漸發生變異，發病率和死亡率明顯提高，嚴重危害了養鴨業的健康發展。因此，探究雛鴨病毒性肝炎有效的具體診斷與治療方法，對防治該疾病具有重要的意義。

1 發病情況

2021年3 月本縣養殖戶李某從外地購買500羽1周齡的雛鴨，放入提前清掃消毒好的育雛室（用氫氧化鈉2%～3%的水溶液內外環境消毒2次）進行飼養。雛鴨到場后用谷殼做墊料，并用4盞遠紅外線燈保溫，飼喂全價配合飼料，自由采食。飼養到9日齡時，發現部分雛鴨精神萎靡、采食量減少，個別雛鴨不食、行動緩慢，有的出現腹瀉，短短3 d已死亡55羽，另有35余羽患鴨病情嚴重，眼半閉呈昏迷狀。

2 臨床癥狀

發病突然，病程短促。病鴨初期主要表現精神萎靡、行動遲緩、閉眼蹲伏等癥狀，且走幾步便俯臥在地上，食欲明顯下降。發病12~24 h，出現運動失衡、全身抽搐、倒地、雙腿痙攣、呼吸困難等一系列癥狀，有的患鴨側頭原地轉圈，并在10 min后慢慢死亡；有的病鴨有腹瀉癥狀，排白色或灰綠色稀糞便。

3 病理變化

病理變化主要發生在肝臟，患鴨肝臟腫大，色暗發黃，肝表面有不同大小的出血斑點，肝細胞變性及壞死，同時肝細胞脂肪變性。此外，大部分患鴨的腎臟出血、腫脹。

4 診斷

4.1 臨床診斷

該病感染對象主要是雛鴨，尤其是3周齡以下的雛鴨；成年鴨不發病。雛鴨突然發病，逐漸精神萎靡，且無法跟群活動，大部分病鴨眼睛呈半閉狀態，嗜睡癥狀明顯。在上述癥狀出現后的1~3 h，病鴨表現運動失調，身體會不由自主的倒向一側，雙腿出現痙攣性運動，呈角弓反張。根據臨床表現結合肝臟剖解病變，初步診斷為鴨病毒性肝炎。

4.2 實驗室診斷

既有病毒分離、中和試驗等常規方法，也有瓊脂免疫擴散、ELISA方法、膠體金免疫電鏡等免疫學方法，還有近幾年得到推廣和應用的PCR方法，養殖場可以根據自己的情況選擇合適的診斷方法。

4.2.1 病毒分離 這是實驗室比較常用的方法。可無菌取雛鴨肝臟加適量生理鹽水和青、鏈霉素各500 U研磨制成組織懸液，離心取上清液，經尿囊腔接種8~10日齡鴨胚，每胚0.2 mL，繼續孵育，密切觀察胚體病變和死亡狀況，大約2周內接種鴨胚全部死亡，死胚主要表現為皮膚出血、水腫，肝臟腫脹、顏色變暗綠、表面有針尖大的出血斑點[1]；對照組存活。同時收集上述死亡鴨胚的尿囊液接種10日齡健康雛鴨，24 h內雛鴨出現DVH典型癥狀，并能從24~48 h后死亡雛鴨中分離出該病毒。

4.2.2 中和試驗 該方法特異性高，是診斷鴨肝炎病毒的經典方法。鴨病毒性肝炎病毒可在雞胚上進行血清中和試驗，雖然該方法復雜、繁瑣、費時，但在診斷鴨病毒性肝炎的流行病學調查和抗體監測中仍有切實的應用價值。王作友等[2]通過雞胚中和試驗進行鴨病毒性肝炎的抗體水平檢測，試驗結果表明選擇合適的雞胚適應毒株對雞胚中和試驗非常關鍵和重要，是保證實驗結果真實可靠的基礎。雛鴨中和試驗是以易感雛鴨為試驗對象，雛鴨感染后的發病癥狀和病變對確診該病有很大說服力。該方法靈敏度高，判斷準確，與雞胚中和試驗相比，所需周期短，操作相對簡單，但由于鴨個體之間的差異，對病毒的抵抗力不同，所以重復性較差。

4.2.3 瓊脂凝膠免疫擴散試驗（AGID試驗） 該方法敏感性不高，但對試驗要求較低，在基層易于推廣，對本病的診斷還是有一定的應用價值。早在1998年，孫泉云等[3]就建立了一種檢測鴨肝炎病毒抗原的AGID方法，該方法不僅能夠在臨床上對本病與鴨黃曲霉毒素中毒、沙門氏菌病等進行鑒別診斷，而且具有試驗特異性；此外，試驗中對病毒抗原的處理方式（病毒材料經過氯仿、PEG透析和硫酸銨等方法處理）既避免了雜蛋白干擾又提高了病毒純度，提高了試驗的靈敏度，有助于病毒的檢出。

4.2.4 膠體金標記免疫電鏡技術 該技術是目前應用最廣的免疫電鏡技術是用膠體金顆粒帶負電的特性吸附抗體，從而將抗體標記，再利用其與許多生物大分子共價結合作為二抗，用于免疫電鏡負染技術檢測相應抗原。與直接電鏡觀察相比，膠體金免疫電鏡下的背景雜質很少，視野中附著金顆粒的病毒量多且清晰可見，易于辨認，定位比酶反應物更精確，大大提高了病毒快速診斷的敏感性和特異性。程安春等[4]建立的膠體金免疫電鏡技術檢測鴨肝炎病毒的效果很理想，具有簡便、快速、靈敏、直觀等特點，可以作為DHV的常規檢測方法。

4.2.5 SPA協同凝集試驗（SPA-CoA） SPA（葡萄球菌A蛋白）是金黃色葡萄球菌細胞壁上的一種表面蛋白，能與特異性抗體IgG的Fc片段結合，而不影響Fab片段的活性，所以以SPA作為抗體致敏的載體與相應抗原接觸，即出現反向間接凝集反應，使結果更易于觀察。王銘書等[5]用富含A蛋白的金黃色葡萄球菌1800株致敏兔抗DHV IgG，建立了檢測鴨肝炎病毒（DHV）的SPA協同凝集試驗，試驗表明最佳的檢測部位為肝臟（檢出率100%），檢出抗原的最低含量為0.4 mg/mL，雖比Dot-ELISA檢測DHV最低抗原量（0.04453 mg/mL）的敏感性低，但用于臨床及基層獸醫診斷其敏感性已經足夠，此方法簡便、快速、便于推廣應用。

4.2.6 ELISA方法 ELISA原理是采用抗原與抗體的特異結合將被測物質與酶標抗體進行直接或間接結合，然后通過標記酶與底物產生顏色反應進行定性和定量分析。但在實際應用中需要根據抗體抗原的特性設計不同的檢測法，如雙抗夾心法、單抗捕捉ELISA法、酶標Dot-ELISA[6]、間接ELISA[7]等，這些檢測方法靈敏度比較高、操作便捷、特異性也更強，能夠用于鴨病毒性肝炎臨床病料和抗體的特異性檢測。

4.2.7 PCR 方法 PCR方法具有高度敏感、快速、特異、操作簡單、易標準化等技術優勢，且可以檢測病原體中特異性的核苷酸序列，比常規診斷方法更能在生產中得到廣泛的推廣和應用。目前為了對鴨病毒性肝炎進行快速、準確的診斷，建立了各種PCR方法，如常規RT-PCR方法[8]、多重PCR方法[9]、鑒別RT-PCR方法[10]、熒光定量PCR方法[11]等，非常適用于Ⅰ型鴨肝炎病毒（DHV-Ⅰ）臨床大量樣品的快速診斷、鑒別診斷和分子流行病學的調查研究。

5 防治措施

5.1 加強飼養管理

該病的治療目前尚無有效藥物，重在日常預防。發病后第一時間隔離病鴨，與健康鴨分開飼養。處死無治療價值的病鴨，病死鴨及其污染物一起進行無害化處理；對鴨舍內外環境、飼養工具等用3%苛性鈉溶液或0.2%過氧乙酸徹底消毒。保持鴨舍干燥衛生、通風良好以及溫濕度適宜、飼養密度合理等，更換無污染的新墊料，禁止外來人員隨意進入鴨場，盡量減少應激因素；同時給鴨群提供營養豐富的全價配合飼料和清潔飲水，并在飲水中添加葡萄糖和復合維生素供其自由飲用。

5.2 主動免疫

5.2.1 弱毒疫苗 種鴨：一般在產蛋前1個月皮下注射1 mL雞胚傳代致弱后制成的DHV疫苗，獲得免疫的種鴨所產種蛋孵出的雛鴨能夠獲取母源抗體保護，保護期在2周左右；在10日齡時對雛鴨加強免疫1次，可取得不錯的免疫效果。對沒有母源抗體的雛鴨或母源抗體不明的引入鴨群，可在1日齡接種弱毒疫苗，3~7 d即可產生免疫力，后期根據實際情況檢測抗體水平，確定第二次免疫時間。當在某些地區出現DHV-I變異株，使用標準DHV-I型弱毒疫苗進行免疫會發現免疫效果并不好，這是因為病毒變異后在血清學上可能存在某些差異，無交叉免疫性。

5.2.2 滅活疫苗 分為雞胚組織滅活苗和鴨胚組織滅活苗。有研究表明，鴨胚滅活苗的免疫效果要明顯好于雞胚滅活苗，但如果鴨沒有進行弱毒苗基礎免疫，只免疫了滅活苗，則鴨體內的抗體水平會很低。由于母源抗體的存在會影響免疫效果，因此沒有母源抗體的雛鴨才可以進行免疫；對引入的雛鴨在母源抗體情況不明時可通過肌肉注射高免血清獲取保護力。有試驗使用鴨漿膜炎、鴨病毒性肝炎二聯滅活疫苗免疫2周齡雛鴨，結果顯示該二聯疫苗對2 周后鴨病毒性肝炎保護力達78以上，免疫保護期可達12 周以上。

5.3 被動免疫

生產上一般是將鴨DVH病毒油乳劑滅活苗接種于雞來獲取特異性卵黃抗體。出殼鴨苗在24~28 h內皮下注射鴨病毒性肝炎高免卵黃液或康復鴨血清（當中含有能夠有效中和病毒的抗體），用于治療病鴨或進行被動免疫，效果良好。有試驗報道，給1日齡雛鴨皮下注射抗鴨病毒性肝炎二價（Ⅰ＋Ⅲ型）高免抗體，可有效預防Ⅰ型和Ⅲ型鴨病毒性肝炎。

5.4 中草藥 使用荊防敗毒散（荊介、防風、羌活、獨活、銀花、連召、柴胡、枳 殼、川芎、竹葉、甘草等組成）拌料輔助治療3 d，可獲得很好的治療效果，鴨群死亡停止，病情逐漸好轉；或將茵陳、龍膽草、黃芩、黃柏、金銀花、板藍根、梔子、柴胡、防風、鉤藤、神曲、荊芥、甘草等13味中藥按比例煎煮兩次，兩次煎液合并濃縮至含生藥0.5 g/L治療鴨病毒性肝炎，其效果與高免卵黃抗體相當，而且不易復發。

6 體會

雛鴨病毒性肝炎是一種急性傳染疾病，主要是通過呼吸道以及消化道傳染，可經過病鴨的分泌物、被污染的水、飼料用具等進行傳播，飼養管理不當、鴨群缺乏維生素以及礦物質、飼養密度太大、鴨舍環境潮濕、衛生條件比較差等誘發或加重病情。流行初期，應當及時注射高免卵黃液或康復鴨血清，同時輔以疏肝理氣、調整氣血、清熱解毒的中草藥治療，這樣能夠有效預防感染，并且明顯減少死亡。