自制羊肚菌菌種實現大田生產的經驗

葛志標 管燕 廖明亮

摘? ?要? ?羊肚菌栽培具有高投入、高風險、高效益特點，其菌種必須含有兩種交配型基因才能出菇，普通羊肚菌菌種分離技術均有可能缺失交配型基因，而科研院所可以通過PCR技術檢測菌種后用于生產，導致羊肚菌菌種市場價高并趨于壟斷。可以自行制作羊肚菌菌種，利用冷庫進行出菇效果對比試驗，篩選出菌種用于大田栽培。通過3年生產實踐，方法可行，具有推廣價值。

關鍵詞? ?羊肚菌;菌種;冷庫;出菇試驗

羊肚菌栽培具有高投入、高風險、高效益特點，其菌種必須含有兩種交配型基因才能出菇。采用普通的羊肚菌菌種分離技術，可能造成菌種缺失交配型基因，需要專業科研院所通過PCR技術進行菌種檢測篩選，由此導致羊肚菌菌種市場價高并趨于壟斷。

為了解決普通食用菌種植戶自制羊肚菌母種，擴繁后生產出的羊肚菌栽培種因交配型基因缺失而造成大田生產不出菇的問題，貴州市遵義縣中信食用菌專業合作社組織課題組自制母種后，利用冷庫進行菌種出菇試驗，篩選出菌種用于大面積大田栽培，3年平均畝產150 kg以上，與科研院所采用PCR技術生產的菌種大田栽培產量相當，具有實用推廣價值。以下是這一實踐經驗的操作流程總結，供參考。

1? ?母種分離

1.1? ?多孢子分離? 選大田栽培中個大、形好、肉厚的羊肚菌頭茬菇，用于菌種分離。分離步驟如下：

用市售標準PDA培養基40.1 g，加水? ? ? 1 000 mL煮沸，分裝入試管和100 mL組培瓶、錐形瓶中，高壓滅菌鍋121 ℃保持30分鐘，試管擺成斜面，組培瓶內置100 mL培養基，冷卻后備用。

準備回形針、刀片、鑷子、吹風機、羊肚菌子實體等。在超凈工作臺內進行如下無菌操作：

用吹風機冷風吹羊肚菌菌蓋表面，達到干凈的效果，用刀片把菌蓋表面切成1 cm見方的小塊;用酒精給回形針消毒，制成“Z”字形掛鉤，用一頭鉤住小塊羊肚菌菌蓋，另一頭掛在組培瓶或錐形瓶上，塞緊棉塞。

放置20 ℃恒溫箱內12～24小時后，取出組培瓶或錐形瓶，在超凈工作臺內將掛鉤連同組織塊取出，繼續塞緊棉塞，20 ℃下培養，2～5天即可見到彈射出的孢子萌發出的小菌落。

仔細觀察辨認菌落，挑取少量菌絲轉入試管中，編號標記。待5天左右長滿試管后，用體視鏡或顯微鏡檢測，選出9支純菌種編號標記，按編號標記一一對應進行擴繁備用，9個編號標記的母種各用1支接種原種，剩余保存至出菇試驗后確定淘汰或繼續擴繁。

1.2? ?組織分離? ?PDA培養基，采用柄蓋交接處組織分離獲得純菌種，每支試管進行編號標記。分離步驟如下：

用市售標準PDA培養基40.1 g，加1 000 mL水煮沸，分裝入試管中，高溫滅菌鍋121 ℃下保持30分鐘，試管擺成斜面，冷卻后備用。

準備刀片、鑷子、吹風機、酒精燈、羊肚菌子實體等。在超凈工作臺內進行如下無菌操作：

先用75%酒精擦拭雙手，再用吹風機冷風吹羊肚菌菌蓋表面，達到干凈的效果，用75%酒精棉球擦拭羊肚菌表面，器械用酒精燈火焰滅菌冷卻后，縱向切開羊肚菌子實體，挑取柄蓋交接處組織，置入斜面培養基試管中，編號標記。

放置于20 ℃恒溫培養箱中培養，2～5天菌絲萌發，挑取菌絲轉管培養，按編號標記，5天左右長滿試管，選擇9支進行編號擴繁標記，將9個編號標記的母種各用1支接種原種，剩余保存至出菇試驗后確定淘汰或繼續擴繁。

2? ?原種制作

1）制作培養基。按照木屑68%、麥粒22%、土壤7%、石灰2%、石膏1%的比例配制培養基。步驟如下：稱取麥粒，加石灰浸泡24小時或煮沸后保持30分鐘左右，以麥粒吸水飽滿且麥皮不開裂為度，加木屑（0.5 cm）、土壤、石膏等混勻裝瓶，高壓或常壓滅菌，冷卻后接種培養。

2）接種培養。用多孢分離或組織分離后編號標記的9支斜面母種，每支接種1瓶原種培養基進行培養，按母種編號標記，共9瓶。10天左右長滿菌種瓶。

3? ?栽培種制作

1）制作培養基。按照木屑45%、麥粒45%、土壤7%、石灰2%、石膏1%的比例配制培養基。步驟如下：稱取麥粒，加石灰浸泡24小時或煮沸后保持30分鐘左右，以麥粒吸水飽滿且麥皮不開裂為度，加木屑（0.5 cm）、土壤、石膏等混勻裝袋，高壓或常壓滅菌，冷卻后接種培養。

2）接種培養。將9瓶編號標記的原種，1瓶接種1個栽培袋，按原種編號標記，共9袋。15天左右長滿菌種袋。

4? ?營養袋制作

準備12 cm×24 cm聚丙烯袋，玉米芯100 g，麥粒150 g，石膏2 g，石灰2 g。將麥粒用石灰水浸泡12～24小時;玉米芯加水，24小時翻1次，悶48小時后與石灰、石膏、浸泡的麥粒混勻，裝入聚丙烯袋，高溫高壓滅菌8小時，冷卻備用。每袋營養袋濕重350 g左右。

5? ?篩選菌種

通過冷庫出菇試驗篩選菌種。

5.1? ?試驗過程

1）準備長方形或正方形容器，保證底部能夠瀝水。

2）選取壤土，用石灰混勻消毒，根據土壤干濕度進行水分調節，至土壤手握成團，自由落下能散開為宜。

3）容器底部及四周用地膜鋪蓋。地膜要超出容器至完全覆蓋上部，地膜上橫豎20 cm均勻打孔通水通氣，然后裝入消毒處理后的土壤至容器4/5處。

4）撒播栽培種。播種后覆蓋2 cm厚的土壤，栽培容器按栽培種編號標記，共9個處理，每個處理重復3次。以科研院所的菌種作對照（1個）。共28個處理。

5）調控出菇環境。將播種后的容器放置在可調溫冷庫中，調節溫度上限為19 ℃，溫度下限為10 ℃，溫差9 ℃。

6）日常管理。播種5天左右，菌絲長滿土面，放置營養袋。把覆蓋打孔的黑地膜蓋在營養袋上，保溫保濕。每周檢查1次土壤濕度，土壤含水量保持在50%～60%。營養袋放置30天左右后，噴出菇水，開啟燈光，土面菌霜消退，原基開始分化。

5.2? ?試驗結果與應用? ?16個處理出現原基，其中包括對照（1個），試驗和對照出現原基的密度基本相當;其余12個處理無原基，淘汰。

選擇出現原基的5支栽培種試管進行擴繁，生產菌種，用于大田栽培。

6? ?應注意的問題

1）配方中的原材料要新鮮，玉米芯、麥粒、木屑等處理要到位。

2）母種轉管時要橫向截取菌塊，不要縱向截取。

3）培養溫度一定不要超過22 ℃，菌種用冷藏車運輸，保證低溫環境。

4）菌種一定要放置在通風、涼爽的地方儲存，不能堆碼。

5）控制轉管次數，不要超過5代。