膠質母細胞瘤lncRNA-ROR的表達及其臨床意義

金 曉 連 燁 王 鵬 馮三江

膠質母細胞瘤（glioblastoma multiforme，GBM）惡性程度非常高，即使采用手術輔助放化療等綜合治療，預后仍不理想[1]。GBM的發生、發展過程比較復雜，涉及多種基因的異常表達。研究顯示長鏈非編碼RNA（long chain non-coding RNA，lncRNA）屬于轉錄調節因子，調控基因表達，與膠質瘤細胞侵襲、增殖、凋亡、遷移等有關[2]。黃立寧等[3]報道lncRNA 重編程調節因子（lncRNA reprogramming regulator，lncRNA-ROR）在乳腺癌、肝癌、膠質瘤、胃癌、胰腺癌等多種惡性腫瘤中，可通過不同路徑發揮促腫瘤或者抗腫瘤作用。本文探討人腦膠質瘤lncRNAROR的表達變化及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 研究對象 納入標準：術后病理證實為GBM；年齡≥18歲；術前無放療、化療史；近3個月內無激素類藥物、免疫抑制劑治療史；明確知曉研究內容，并簽署同意書者。排除標準：患其他惡性腫瘤；合并肝、腎等臟器功能不全；患心腦血管疾病；患血液系統疾病、自身免疫性疾病；復發性GBM。

選取2015年6月至2019年6月手術切除的符合標準的GBM組織145例，其中男77例，女68例；年齡42～75 歲，平均（58.94±12.54）歲。取同期因顱腦損傷內減壓術切除的非腫瘤腦組織56例為對照，其中男30例，女26例；年齡40～75歲，平均（56.46±13.95）歲。本研究方案獲醫院倫理委員會批準。

1.2 lncRNA-ROR 的檢測 采用qRT-PCR 法檢測ln?cRNA-ROR 的相對表達量。采用Trizol 法（美國Sig?ma公司）提取總RNA，逆轉錄合成cDNA（美國Sigma公司）。實時定量PCR擴增引物：lncRNA-ROR上游引物5'-GAAGGTTCAACATGGAAACTGG-3'，下游引 物5'-TGAGACCTGCTGATCCCATTC-3'；內參GAPDH 上游引物 5'-CTCAGACAGGAT?GGGGAAGGTGA-3'，下游引物5'-ATGATCTT?GACCCTGTTGTCATA-3'。PCR 反應條件：94 ℃、30 s預變性；95 ℃、10 s變性；56 ℃、20 s退火；70 ℃、10 s延伸；循環45 次。采用2-△△CT法計算lncRNA-ROR相對表達水平。根據lncRNA-ROR平均表達水平分為高表達和低表達。

1.3 隨訪GBM 病人術后隨訪24 個月，采用門診方式進行隨訪，記錄無進展生存期、總生存期。

1.4 統計學方法 采用SPSS 20.0軟件分析；計量資料以x±s表示，采用t檢驗；計數資料采用χ2檢驗；利用多因素Cox比例回歸風險模型分析生存預后危險因素；采用生存曲線分析lncRNA-ROR 表達水平與病人無進展生存、總生存預后的關系；P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 GBM 組織lncRNA-ROR 表達水平GBM 組織ln?cRNA-ROR 相對表達水平（1.54±0.38）明顯低于對照組（3.76±1.12；P<0.001）。

2.2 GBM 生存預后的影響因素 術后隨訪2 年，生存41例，死亡104例。單因素分析顯示腫瘤大小、腫瘤切除程度、術后放療、術后化療、lncRNA-ROR 表達水平與GBM 病人生存預后有關（P<0.05，表1）。多因素Cox比例回歸風險模型分析顯示，腫瘤全切除、術后放療、術后化療GBM病人生存預后的保護因素（P<0.05，表2），而lncRNA-ROR 低表達、腫瘤直徑≥5 cm是GBM病人生存預后不良的獨立危險因素（P<0.05，表2）。

表1 本文病人生存預后影響因素的單因素分析

表2 本文病人生存預后影響因素的多因素Cox回歸分析

2.3 lncRNA-ROR 表達水平與膠質瘤病人生存預后的關系 生存曲線分析顯示，lncRNA-ROR高表達組GBM病人2年累積無進展生存率（40.12%）與2年累積總生存率（48.56%）明顯高于低表達組（分別為16.25%、19.85%；P<0.05；圖1）。

圖1 生存曲線分析lncRNA-ROR表達水平與膠質瘤病人生存預后的關系

3 討論

GBM 是膠質瘤中惡變程度最高的一種類型，具有侵襲性強、浸潤性生長等特點，全切除率低，術后復發風險高，預后差[4]。GBM 的發生與多基因的調控作用有關[5]。研究表明lncRNA 與腫瘤發生、進展有關[6]。Li等[7]研究顯示lncRNA-ROR與多種腫瘤發生密切相關，與腫瘤的大小、淋巴結轉移等病理特征有關，表明其異常表達參與腫瘤進展。既往研究報道lncRNA-ROR在多種惡性腫瘤中表現出促腫瘤作用。李會儉等[8]發現漿液性卵巢癌組織lncRNAROR 呈過表達，與腫瘤大小、臨床分期、淋巴結轉移等存在關聯。吳立春等[9]則發現乳腺癌組織、血清lncRNA-ROR 表達明顯增高，促進乳腺癌進展。本文結果顯示GBM組織lncRNA-ROR 表達明顯下調，提示lncRNA-ROR 過表達可能抑制GBM 發生、發展。Feng等[10]報道lncRNA-ROR 表達可通過對干細胞因子KLF4進行靶向抑制，從而抑制膠質瘤細胞的更新與增殖。

因惡性程度高、手術全切難度大等因素影響，GBM預后普遍欠佳[11]。本文結果顯示腫瘤切除程度以及術后放/化療與GBM 預后密切相關。這與既往研究報道一致[12]。本研究顯示lncRNA-ROR 低表達是GBM病人生存預后不良的獨立危險因素，生存曲線分析顯示lncRNA-ROR低表達組GBM病人2年累積無進展生存率與2 年累積總生存率明顯降低。Li等[13]發現lncRNA-ROR 抑制mTORC2 關鍵成分Rictor 的表達，從而抑制Akt 信號通路。這提示lncRNA-ROR過表達能抑制Akt信號通路，從而抑制GBM細胞增殖。

綜上所述，GBM 組織lncRNA-ROR 呈低表達，與病人不良生存預后密切相關。這提示檢測lncRNA-ROR對GBM病人預后具有一定評估價值。