EB病毒DNA載量在傳染性單核細胞增多癥中的應用價值

章婷婷，金速速，陳華樂，李向陽

溫州醫科大學附屬第二醫院育英兒童醫院 臨床檢驗中心，浙江 溫州 325027

傳染性單核細胞增多癥（infectious mononucleosis, IM）是由EB病毒（Epstein-Barr virus, EBV）急性感染引起的一種急性全身性疾病。典型臨床表現為發熱、咽峽炎、淺表淋巴結腫大和皮疹，還可能出現乏力、肌痛等非典型癥狀，嚴重時可發展為噬血細胞綜合征、慢性活動性EBV感染等多種疾病[1]。IM雖為自限性疾病，但可因心肌炎、肝損等多種并發癥死亡，病死率可達1%～2%[2]。有研究報道顯示EBV DNA載量與EBV相關性噬血綜合征、慢性活動性EBV感染、鼻咽癌等疾病的發生、發展、療效及預后相關[3-5]。但對EBV載量是否和兒童IM疾病嚴重程度或預后相關，結果存在爭議[6-7]，尚未見溫州地區的此類相關研究報道。本研究回顧性分析溫州地區兒童IM患者的病歷資料和相關實驗室檢查，探討EBV載量與兒童IM臨床指標變化及疾病的嚴重程度和預后的相關性。

1 對象和方法

1.1 對象 本研究納入了從2018年1月至2020年12月在溫州醫科大學附屬第二醫院育英兒童醫院住院治療IM患兒1 155例。納入標準：①符合2016年中華醫學會兒科學分會感染學組《兒童主要非腫瘤性IM感染相關疾病的診斷和治療原則建議》[8]中的IM的診斷標準；②年齡≤14歲；③受檢者監護人充分知情同意，并簽署知情同意書。排除標準：①病例資料和（或）實驗室檢查結果不完整；②年齡大于14歲；③近期服用有肝損害藥物；④近期服用中藥；⑤有乙肝等肝炎病毒感染；⑥有肝臟相關疾病，如：肝炎、肝臟腫瘤等；⑦有風濕病、組織病及自身免疫性疾病的患者。本研究經溫州醫科大學附屬第二醫院育英兒童醫院倫理委員會審核批準。

1.2 方法

1.2.1 資料收集：收集患兒的年齡、性別、住院時長、異型淋巴細胞百分比最大值、生化指標包括谷丙 轉氨酶（glutamic pyruvic transaminase, ALT）、谷草轉氨酶（glutamic oxaloacetic transaminase,AST）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase, LDH）、EBV DNA、淋巴細胞亞群。

1.2.2 檢測方法：血涂片經瑞氏-吉姆薩染色后在油鏡下計數100個白細胞，計算異型淋巴細胞百分率；生化指標（ALT、AST、LDH）由ADVIA2400生化分析儀及其配套試劑測定；采用實時熒光PCR法檢測外周血EBV DNA載量，試劑由中山大學達安基因股份有限公司生產，檢測下限為500 copies/mL，檢測儀器為美國ABI公司的7500實時熒光定量PCR儀；采用FACS Canto II型流式細胞分析儀（美國BD公司）及配套試劑檢測；外周血CD3+T淋巴細胞，CD4+T淋巴細胞，CD8+T淋巴細胞，CD19+T淋巴細胞，采用FACS DIVA軟件計算各亞群細胞百分比。

1.3 統計學處理方法 采用SPSS26.0軟件進行分析。符合正態分布的計量資料用±s表示，2組間比較用t檢驗；不符合正態分布的計量資料以M（P25，P75）表示，組間比較采用秩和檢驗；計數資料用率表示，采用χ2檢驗。兩變量的相關性采用Pearson相關性分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 入選患兒基線資料 符合納入標準者共1 155例，其中男665例（57.6%），女490例（42.4%）；年齡8月～14歲，其中嬰兒組（＜1歲）21例（1.8%），幼兒組（1～3歲）575例（49.8%），學齡前組（4～7歲）445例（38.5%），學齡組（8～14）歲114例（9.9%）。IM患兒中EBV陰性49例，陽性1 106例。EBV陰性組與EBV陽性組IM患兒的ALT、LDH及各項淋巴細胞亞群百分比差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 一般資料比較

2.2 EBV DNA不同載量間實驗室檢查結果的比較 1 106例IM患兒酶學指標檢測中，高載量組（＞106copies/mL）患兒的ALT、AST、LDH與低載量組（500～104copies/mL）比較有升高（P＜0.05）。高載量組（＞106copies/mL）患兒的T淋巴細胞亞群CD3+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞升高，CD4+T細胞和CD4+/CD8+T細胞比值降低，與低載量組（500～104copies/mL）比較差異有統計學意義（P＜0.05）。EBV DNA高載量組（＞106copies/mL）的住院時長與低載量組（500～104copies/mL）比有升高，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 EBV DNA不同載量間實驗室檢查結果的比較

2.3 EBV DNA載量與實驗室指標變化的相關性分析 IM患者EBV DNA病毒載量與CD8+T淋巴細胞呈正相關（r=0.156，P＜0.05）；與CD4+T淋巴細胞、CD4+/CD8+T淋巴細胞比值呈負相關（r=-0.224、-0.213，P＜0.05），見表3。

表3 EBV DNA與淋巴亞群變化的相關性分析

3 討論

EBV為雙鏈DNA病毒，是一種嗜人B淋巴細胞病毒，屬于皰疹病毒γ亞科家族中的一員，是導致IM的病原體[8]。有研究[8]表明，IM為免疫病理性疾病，癥狀似乎源于激活增殖的CD8+T淋巴細胞對病毒的反應，而非病毒感染本身所致。也有研究[9]顯示IM中病毒DNA載量與CD8+T淋巴細胞數量呈正相關關系，可能是高病毒載量驅動了CD8+T淋巴細胞增殖從而導致病情加重。然而，國內外均有研究顯示EBV DNA載量與IM患兒臨床特點之間的相關性尚未確定[8，10]。本研究發現，IM患兒的EBV DNA載量與ALT、LDH、淋巴細胞亞群變化以及患兒住院時間具有相關性。這提示病毒載量與IM患兒疾病嚴重程度相關，EBV DNA載量是可用于臨床觀測患兒疾病嚴重程度的實驗室指標，從而指導臨床診治。

CD3抗原是所有T細胞表面的特征性標志，CD4是輔助性T細胞表面標志，CD8是細胞毒T細胞的表面標志，CD4+/CD8+T淋巴細胞比值反映機體的免疫水平[11]，比值降低說明細胞免疫功能下降。EBV入侵機體后，能夠刺激CD23+B淋巴細胞增殖，從而引起CD4+T和CD8+T淋巴細胞增殖。CD4+T淋巴細胞通過釋放細胞因子調節炎癥反應，而CD8+T淋巴細胞則通過細胞毒作用殺傷被感染的B淋巴細胞。本研究結果顯示，EBV DNA拷貝數高于106copies/mL其ALT、AST、LDH、CD8+T淋巴細胞及住院時長較EBV DNA拷貝數低于104copies/mL明顯升高，而CD4+T淋巴細胞、CD4+/CD8+T淋巴細胞比值明顯降低，這提示高病毒載量組的IM患兒存在明顯的細胞免疫功能紊亂，EBV DNA載量越高，對免疫功能及免疫調節的抑制作用就越強。本研究結果與相關研究的結果一致，EBV感染導致的免疫功能缺陷是腫瘤發生的主要原因[12]，因而在臨床治療過程中，臨床醫師應加強對機體免疫功能的調節。

EBV感染可累及全身各組織臟器，肝功能損害是最常見的并發癥[13]。肝功能損害多發生于病程的第1～2周，甚至最早可出現于病程第2天。IM患兒肝功能損害主要表現為酶學改變，其中以ALT、AST、LDH為常見。本研究1 155例IM患兒中，肝損傷932例，占80.69%，EBV陽性IM組較EBV陰性組的ALT及LDH水平更高，且EBV DNA高載量組的ALT、LDH值較低載量組有顯著升高，差異均有統計學意義，肝損傷的程度也隨著EBV DNA載量的升高而逐漸加重。這提示病毒可能引起肝細胞膽管面或者膽管損傷，抑或是全身及肝內的促炎癥因子影響了肝竇及小膽管轉運系統。也有研究表明EBV肝炎嚴重程度似與EBV病毒血癥相關[14]。因此，EBV DNA檢測在臨床中具有重要的診斷及預后價值[15]。

本研究顯示不同載量EBV陽性組各項實驗室檢測指標與EBV陰性組比較均有變化，其中EBV DNA高載量的患兒各項臨床指標變化更明顯，淋巴細胞亞群更明顯變化趨勢提示存在更嚴重的免疫紊亂，ALT、AST、LDH等指標提示患兒存在更明顯的肝損情況，患兒的住院時間也有較明顯的增長。綜上所述，EBV DNA載量與兒童IM各項指標具有一定的相關性，尤其是在患兒體內病毒載量高于106copies/mL 時，可以提示患兒病情嚴重程度，是較好的臨床觀測患兒疾病嚴重程度的指標。