食用菌菌渣中9 種農藥多殘留檢測研究

謝正林，吳夢雅，許俊齊，趙婉寧，代升飛

（1.江蘇農林職業技術學院，江蘇 句容 212400；2.江蘇農林檢測中心，江蘇 句容 212400）

近年來，隨著食用菌產業規模不斷擴大，產量日益提升，在消耗大量栽培原料的同時，菌渣產量也不斷增加。面對大量菌渣的產生，為避免環境污染，提高生態效益，推動綠色生態農業可持續發展，菌渣高效循環利用產業化也初見雛形。

食用菌菌渣作為優質資源在農作物種植、園藝作物栽培基質、養殖飼料等產業上發揮著不小作用。菌渣主要是棉子殼、玉米芯、木屑等一些作物秸稈，在經過菌絲降解后，農藥殘留一部分會轉移到食用菌中，大部分還會殘留在菌渣中。目前，面對食品安全，人們大部分注意力放在食用菌農殘的檢測上，而對于食用菌菌渣安全利用，關注度不夠。因而，建立一種安全有效的菌渣農殘檢測，分析菌渣中農藥殘留成分，防控菌渣中農藥殘留進一步轉移，對菌渣資源化安全循環利用有重要意義。為此，本研究基于氣相色譜法檢測農藥殘留的基礎上，探討菌渣中9 種農藥多殘留：乙烯菌核利、三唑酮、腐霉利、異菌脲、甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、氟氨氰菊酯的檢測方法，以期為菌渣資源化利用過程中安全使用奠定研究基礎。

1 材料和方法

1.1 儀器設備

氣相色譜儀（Agilent 7890A，配ECD 檢測器）；臺式高速冷凍離心機：sigma G-26C 最大轉速，26 000 轉·min（賽多利斯）；電子天平：ME204E/02（梅特勒上海有限公司）；漩渦混合器：Mixplus（艾本森）；超聲波儀：SB25-12DTD（寧波新芝）；旋轉蒸發儀：RE-52AA（上海亞榮公司）；全自動平行濃縮儀：AutoEVA-60（廈門睿科公司）；分散機：IKAT10（德國IKA 公司）；磨粉機：SS-1022（圣順機械）；離心管、移液器以及其它實驗室常用儀器設備等。

1.2 試劑、耗材

乙腈、丙酮、正己烷：HPLC 級德國默克公司；固相萃取柱：弗羅里矽柱（Florisil），容積6 mL，填充物1 000 mg；濾膜：0.2 μm，有機溶劑膜，鋁箔；菌渣：秀珍菇菌渣，由江蘇農林食用菌教學工場提供；農藥標準品采購于天津阿爾塔科技有限公司，濃度均為1 000 mg·mL。

1.3 儀器條件

色譜柱：Agilent 色譜柱HP-5MS（30 m×0.250 mm×0.25 mm-60～325 ℃）；柱流量：1.0 mL·min；進樣量：1 μL；進樣口溫度：250 ℃；載氣：高純氮氣純度≥99.99%；進樣方式：不分流進樣；升溫程序：150℃保持0.5 min，10 ℃·min升至260 ℃保持5 min，25 ℃·min升至300 ℃，保持12 min。

1.4 樣品前處理

1.4.1 試樣的制備與保存 取新鮮菌渣，高速勻漿，放入離心管中，于-20～-18 ℃條件下保存，備用。

1.4.2 試樣前處理 參考NY/T 761-2008 標準：準確稱取25.0 g 菌渣置離心管中，移取50.0 mL 乙腈，高速振蕩2 min 后，超聲提取，濾液收集到裝有7 g NaCl 的具塞量筒中，收集濾液40～50 mL，蓋上塞子，劇烈震蕩1 min，在室溫下靜置，使乙腈相和水相分層。

濃縮：吸取10.00 mL 上清液置于試管中，將試管插入全自動平行濃縮儀，50 ℃氮吹至近干，用2.0 mL 正己烷復溶，密封，待凈化。

凈化：將萃取柱依次用5.0 mL 丙酮+正己烷（1∶9，V/V）、5.0 mL 正己烷潤洗活化，隨后立即倒入待凈化液，收集過濾液，用5.0 mL 丙酮+正己烷（1∶9，V/V）沖洗萃取柱，并重復1 次。收集的過濾液置于全自動平行濃縮儀上，50 ℃氮吹至4 mL，用正己烷定容至5.0 mL，混勻，移入儀器進樣品瓶中，待測。

1.5 菌渣中9 種農藥多殘留提取條件優化

在前期檢測試驗基礎上，分別設定超聲時間、靜置時間、氮吹時間范圍對農殘回收率和精密度的具體影響，具體水平詳見表1，以回收率和精密度為評價指標，在其它條件相同的情況下，重復3 次前處理提取回收，每次做3 個平行。

表1 提取條件優化試驗因素水平

1.6 標準曲線及線性范圍

1.6.1 標準儲備溶液 準確移取乙烯菌核利、三唑酮、腐霉利、異菌脲、甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、氟氨氰菊酯標準品，用正己烷溶解配制成40 mg·L的標準儲備溶液，于0～4 ℃保存。

1.6.2 標準工作溶液 外標法：分別將9 種農藥儲備液配制成0.001，0.002，0.005，0.01，0.02，0.05，0.1 mg·L的標準工作液，進樣分析，以標準溶液中各化合物的峰面積為縱坐標，以標準溶液中各化合物的濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

1.7 檢出限和定量限

1.7.1 檢出限 9 種農藥組分添加濃度為0.001 mg·kg的樣品的信噪比，根據式（1）可計算得檢出限。

1.7.2 定量限 9 種農藥組分添加濃度為0.001 mg·kg的樣品的信噪比，根據式（2）可計算得定量限。

1.8 方法能力驗證試驗

取不含本底的菌渣樣品共18 份，按照優化提取方法進行高中低3 濃度添加回收試驗，測定出9 種農藥組分的含量，以峰面積分別計算9 種農藥組分在不同添加水平的回收率，分別計算9 種農藥組分平均添加回收率及相對標準偏差。

2 結果與分析

2.1 超聲時間對回收率和精密度影響

超聲波高頻振動可以使菌渣基質中的農藥和提取液充分接觸，利于提高回收率。由表2 可知，各試驗在超聲10 min 后，回收率基本變化小，且與其他組相比，差異不顯著，考慮到試驗成本和效率，選擇超聲時間控制在10 min 最佳。

表2 超聲時間對回收率和精密度影響

2.2 靜置時間對回收率和精密度影響

由表3 可知，隨著靜置時間推移，9 種農藥組分回收率也逐漸增加，但超過10 min 后，回收率增加并不明顯。當靜置15 min 時，雖然回收率達到最高96.2%，但是精密度為4.34%～16.7%，，提取率雖達到檢測要求，但精密度超過了10%，故不選擇為最佳靜置時間。當靜置20 min 后，提取率在77.2%～94.4%，精密度在控制在10%以下，達到檢測要求，綜合以上，選擇靜置時間控制在20 min 時最佳。

表3 靜置時間對回收率和精密度的影響

2.3 氮吹時間對回收率和精密度影響

氮吹濃縮時間對農藥回收率有至關重要，由表4 可知，隨著時間推移，回收率逐漸提高，當氮吹到29 min 時，回收率達到最高94.4%，精密度在3.45%～7.42%之間，符合既定的檢測要求，隨著氮吹濃縮時間進一步延長，回收率隨之減低，故認為氮吹時間控制在29 min 時最佳。

表4 氮吹時間對回收率和精密度的影響

2.4 標準曲線及線性范圍

在優化后的試驗條件下，根據峰面積對9 種農藥的相應濃度制作標準曲線，測定其線性回歸方程、相關系數及線性范圍，詳見表5，其相關系數均＞0.99，標準曲線擬合良好。

表5 9 種農藥線形回歸方程、相關系數及線性范圍

2.5 檢出限和定量限

由表6 可知，菌渣9 種農藥的檢出限和定量限均達到標準檢測要求，且均低于標準檢出限，可滿足實際樣品的測定。由表7 可知，在截取0.5～0.6 min范圍內，9 種農藥組分的信噪比均大于3，達到儀器可檢出要求。

表6 9 種農藥組分的檢出限和定量限

表7 9 種農藥組分的信噪比

2.6 方法能力驗證

取不含本底的菌渣樣品共18 份，進行3 檔濃度添加回收試驗，每個濃度6 個平行。按優化好的試驗方法先分別測定出的9 種農藥含量，以峰面積計算9 種農藥在不同添加水平的回收率，計算9 種農藥組分平均添加回收率及相對標準偏差（表8），樣品中各組分的平均加標回收率范圍控制在76.5%～112.2%，相對標準偏差范圍是1.60%～11.9%，符合檢測標準要求。

表8 樣品回收率及精密度（n=6）

2.7 方法應用

2.7.1 空白樣品農藥殘留測定 空白樣品譜圖見圖1，圖中可知空白中未出現9 種待測農藥。由圖2 可知，9 種農藥色譜圖如下，各農藥峰形較好，響應值較高。因此，可利用優化好的前處理方法對樣品進行農藥提取，并進行檢測。2.7.2 菌渣樣品農藥殘留量測定 按照優化好提取的方法，對菌渣樣品進行農藥殘留提取及測定。用于定量的標樣濃度為0.01 mg·L，質控回收樣添加濃度為0.05 mg·kg，加標樣品平行2 次，待測菌渣樣品平行2 次。采用2.3 所述中的儀器條件進行檢測，結果見表8。由表8 可知，空白樣均未檢出目標農藥，9 種農藥加標樣平均回收率為94.0%～104.2%，RSD 值為0.206%～8.71%，說明檢測方法與檢測能力均可達到檢測要求。菌渣樣品中乙烯菌核利、三唑酮、甲氰菊酯、氟氨氰菊酯4 種農藥未檢出，但腐霉利、異菌脲、高效氯氟氰菊酯、氟氯氰菊酯、氟氰戊菊酯5 種農藥有檢出，平均含量分別為：3.535，0.278，0.428，0.129，0.134 mg·kg。

圖1 空白樣品色譜圖

表8 菌渣樣品檢測結果

圖2 9 種農藥氣相色譜圖

3 結論與討論

本研究建立了測定菌渣中9 農藥多殘留量的方法，反復試驗確定前處理最佳提取條件為，超聲時間10 min、靜置時間20 min、氮吹時間29 min。

通過前處理和儀器檢測方法確定9 種農藥組分檢出限分別為：乙烯菌核利0.140 μg·kg、三唑酮0.069 μg·kg、腐霉利0.048 μg·kg、異菌脲0.417 μg·kg、甲氰菊酯0.085 μg·kg、高效氯氟氰菊酯0.732 μg·kg、氟氯氰菊酯0.133 μg·kg、氟氰戊菊酯0.055 μg·kg、氟氨氰菊酯0.349 μg·kg；經過低、中、高多次方法驗證試驗表明，樣品中9 種農藥的平均加標回收率范圍控制為76.5%～112.2%，相對標準偏差范圍為1.60%～11.9%，均符合檢測要求，具備檢測菌渣未知樣能力。對未知菌渣樣的檢測結果表明：菌渣9 種農藥殘留未檢出4 種，檢出5 種，且5 種檢出農藥殘留的含量均小于限定值，表明菌渣的安全利用較為樂觀。

本研究建立了菌渣中農藥多殘留量檢測方法，且該方法具有前處理簡便、操作可控性高、儀器設備需求小、靈敏度高、檢測準確，且安全等特點，對于食用菌產業中菌渣高效循環利用具有重要意義。