銀黃解毒消腫膠囊對急性咽炎模型鼠的抗炎止痛作用*

黃 莉，王 興，羅黎霞，楊 寧，賀 燦，陳 可，謝嘉馳，羅純清△

（1.湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，湖南 長沙 410007；2.湖南省湘潭市中醫(yī)醫(yī)院，湖南 湘潭 411100）

銀黃解毒消腫方為湘潭市中醫(yī)醫(yī)院臨床經(jīng)驗方，有清熱解毒、散結活血功效，臨床多用于治療急性咽炎和慢性咽炎急性發(fā)作，療效較好，目前擬開發(fā)成膠囊劑［1］。本研究中通過考察銀黃解毒消腫膠囊對急性咽炎模型鼠的抗炎止痛作用及相關炎性指標的影響，探討其可能的抗炎作用機制。現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與動物

儀器：BC-5500型五分類血液細胞分析儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）；B203LED 型生物顯微鏡（重慶奧特光學儀器有限公司）；YLS-6B 型智能熱板儀（上海精密儀器儀表有限公司）；EnSpire 型多功能酶標儀（美國Perkin Elmer公司）；RM2235型石蠟切片機、TP1020 型全自動脫水機、HI1220 型烤片機、HI1210 型攤片機、EG1150H+C 型組織包埋機、DFC 420C 型病理成像系統(tǒng)，均購自德國Leica公司。

試藥：銀黃解毒消腫膠囊（湘潭市中醫(yī)醫(yī)院制劑科自制，每粒含牡丹皮、赤芍、知母、連翹、山銀花、黃連、黃芩藥材各10 g，大黃5 g；生藥量為5.34 g/g）；羅通定片（四川迪菲特有限公司，批號為191902，規(guī)格為每片30 mg）；咽炎含片（西安博愛制藥有限公司，批號為20190206，每片相當于原生藥2.6 g）。蘇木素-伊紅（HE）染液、4%多聚甲醛，以及白細胞介素1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和前列腺素E2（PGE2）酶聯(lián)免疫試劑盒（批號分別為abs551801，abs551818，abs124338，均購自愛必信上海生物科技有限公司）；氨水、水合氯醛、冰醋酸均為分析純，水為純化水。

動物：健康SD 大鼠60 只，雌雄各半，體質量180～220 g；ICR 小鼠100 只，雌性，體質量18～22 g。均購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，實驗動物生產(chǎn)許可證號SCXK（湘）2019-0004。所有動物均于湖南省藥物安全評價研究中心屏障環(huán)境中正常飼養(yǎng)，自由飲水、進食，飼養(yǎng)溫度18～20 ℃，相對濕度65%～70%。

1.2 方法

1.2.1 急性咽炎模型大鼠實驗

建模與分組：將60 只SD 大鼠隨機分為空白對照組（A 組，0.9%氯化鈉溶液灌胃）、模型組（B1組，0.9%氯化鈉溶液灌胃）、陽性藥物組（C1組，咽炎含片1.1 g/kg，喉頭噴霧給藥）及銀黃解毒消腫膠囊低、中、高劑量組（D1，D2，D3組，2.02，4.04，8.08 g/kg，喉頭噴霧給藥）各10只。除A組外，其余組大鼠喉頭噴霧25%氨水，每日2次（上午、下午各1次），每次噴3下（約0.5 mL），連續(xù)噴3 d，以復制大鼠急性煙炎模型。建模成功（大鼠咽部出現(xiàn)黏膜充血、腫脹及撓抓口咽）［2-5］后第4 天起，各組大鼠分別給予相應藥物或0.9%氯化鈉溶液，每日1 次，連續(xù)7 d。

檢測指標：1）血常規(guī)與炎性因子。末次給藥1 h 后麻醉大鼠，腹主動脈采血2份，1份用于檢測中性粒細胞和白細胞計數(shù)；另1份以4 000 r/min的速率離心10 min，取上清液，置EP 管中，-80 ℃保存，采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測血清IL-1β，TNF-α，PGE2水平。2）咽部黏膜病理形態(tài)學。取大鼠咽部黏膜及黏膜下組織，常規(guī)切片、石蠟包埋、HE 染色后，在顯微鏡下觀察病理組織形態(tài)學，并評分。評分標準，黏膜上皮增生程度，無增生計0分，偶見增生計1分，部分增生計2分，明顯增生計3分；炎性細胞浸潤程度，無炎性細胞計0分，偶見炎性細胞計1分，散在炎性細胞計2分，大量炎性細胞計3分。

1.2.2 小鼠熱板實驗

小鼠篩選及分組、給藥：將小鼠放至已預熱至（52±0.5）℃的恒溫金屬板上，記錄每只小鼠的反應時間，以熱板反應的潛伏期表示其痛閾值。選擇痛閾值在5～30 s 之間的小鼠50只，隨機分為模型組（B2組，等體積0.9%氯化鈉溶液）、陽性藥物組（C2組，羅通定片0.02 g/kg）及銀黃解毒消腫膠囊低、中、高（D4，D5，D6組，2.92，5.84，11.68 g/ kg），各10 只，均稱定質量后灌胃相應藥物或0.9%氯化鈉溶液，每日1 次，連續(xù)3 d。給藥前重復測定其正常痛閾值，取2次正常痛閾平均值作為該小鼠給藥前的痛閾值［6-9］。

檢測指標：末次給藥后30，60，90，120 min 測定小鼠痛閾值，若60 s仍無反應，其痛閾值以60 s計。

1.2.3 小鼠扭體實驗

動物分組及給藥：同1.2.2 項下操作，僅組名變?yōu)椋˙3組、C3組及D7-D9組）。

檢測指標：記錄15 min 內各組小鼠扭體反應次數(shù)，并計算扭體反應抑制率。扭體反應抑制率（%）=（B 組扭體次數(shù)-給藥組扭體次數(shù)）/B組扭體次數(shù)×100%。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用Graphpad Prism 8.3 統(tǒng)計學軟件分析。計量資料以表示，組間比較行單因素方差分析，兩兩比較用LSD檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 急性咽炎模型大鼠實驗

血白細胞、中性粒細胞計數(shù)：與A組比較，B1組大鼠血液中的白細胞計數(shù)、中性粒細胞計數(shù)均顯著升高（P ＜0.01）；與B1組比較，C1組、D1組、D2組、D3組大鼠的白細胞及中性粒細胞計數(shù)均顯著降低（P ＜0.01）。詳見表1。

表1 各組大鼠白細胞、中性粒細胞計數(shù)及咽部黏膜病理組織形態(tài)學評分比較（，n=10）Tab.1 Comparison of the WBC，neutrophils count and pathomorphological scores of pharyngeal mucosa in each group（，n=10）

表1 各組大鼠白細胞、中性粒細胞計數(shù)及咽部黏膜病理組織形態(tài)學評分比較（，n=10）Tab.1 Comparison of the WBC，neutrophils count and pathomorphological scores of pharyngeal mucosa in each group（，n=10）

注：與A組比較，#P ＜0.01；與B1/B2/B3組比較，*P ＜0.01。圖1、表2同。Note：Compared with those in group A，#P ＜ 0.01（for Tab.1，Tab.2 and Fig.1）；Compared with those in groups B1，B2 and B3，*P ＜0.01（for Tab.1，Tab.2 and Fig.1）.

血清炎性因子水平：與A 組比較，B1組大鼠血清IL-1β，TNF-α，PGE2水平均顯著升高（P ＜0.01）；與B1組比較，C1組、D1組、D2組、D3組大鼠血清IL-1β，TNF-α，PGE2水平均顯著降低（P ＜0.01）。詳見圖1。

咽部黏膜病理組織形態(tài)學：與A 組比較，B1組病理組織形態(tài)學評分顯著升高（P ＜0.01）；與B1組比較，C1組、D1組、D2組、D3組大鼠的病理組織形態(tài)學評分顯著降低（P ＜0.01）。詳見表1。A組大鼠黏膜上皮完整，排列整齊，固有層未見水腫、血管充血、炎性細胞浸潤等變化；B1組大鼠黏膜上皮層明顯增生，固有層水腫，小血管擴張、充血，大量炎性細胞浸潤；C1組大鼠黏膜上皮層輕度增生，固有層區(qū)域有少量的炎性細胞浸潤；D1組大鼠黏膜上皮層明顯增生，固有層水腫，少量炎性細胞浸潤；D2組大鼠黏膜上皮層輕度增生，固有層少量炎性細胞浸潤；D3組大鼠黏膜上皮完整，排列整齊，固有層未見水腫、血管充血、炎性細胞浸潤等變化。詳見圖2。

2.2 小鼠熱板實驗及扭體實驗

與B2組比較，C2組、D4組、D5組、D6組小鼠的熱板痛閾值明顯升高，且痛閾值均在給藥后90 min 時達峰值；與B3組比較，C3組、D7組、D8組、D9組小鼠的扭體次數(shù)明顯減少（P ＜0.01）。詳見表2。

表2 各組小鼠痛閾值和扭體次數(shù)比較（，n=10）Tab.2 Comparison of pain threshold and writhing times of mice in each group（，n=10）

表2 各組小鼠痛閾值和扭體次數(shù)比較（，n=10）Tab.2 Comparison of pain threshold and writhing times of mice in each group（，n=10）

3 討論

急性咽炎以病毒、細菌感染多見，屬中醫(yī)“急喉痹”范疇，外因多與風、寒、熱之邪氣侵襲，上犯咽喉及肺胃熱盛，上攻咽喉有關，內因多與臟腑功能失調有關。其起病迅速，伴有咽痛、咽喉黏膜腫脹等癥狀［10-11］。西醫(yī)多采用青霉素及大環(huán)內酯類等抗菌藥物治療，但長期使用易產(chǎn)生耐藥性［12］。

銀黃解毒消腫膠囊組方中，牡丹皮味苦性寒，善清營分、血分實熱；赤芍味苦性寒，入肝經(jīng)，清風熱所致赤目腫痛。兩者配伍，共奏清熱涼血之功效。大黃苦降，使上炎之火下泄；知母主入肺經(jīng)，長于瀉肺熱、潤肺燥；連翹、山銀花、黃連共清心火，散上焦風熱，能緩解咽喉腫痛。諸藥配伍，可涼血解毒，散結消腫。現(xiàn)代藥理學研究表明，其處方藥味中所含丹皮酚、知母總多糖、連翹苷、赤芍總苷等有效成分能抑制毛細血管通透性，抑制白細胞炎性趨向性，從而降低炎癥部位白細胞計數(shù)水平；大黃蒽醌、山銀花酚酸類、小檗堿等有效成分具有廣譜抗病原微生物作用，通過抑制細菌核酸、蛋白質合成、糖代謝等途徑改善模型大鼠機體發(fā)熱、疼痛及腫脹癥狀［13-19］。

現(xiàn)代藥理學研究表明，IL-1β 通過促進B 細胞增殖、分化產(chǎn)生抗體從而誘導細胞發(fā)生炎癥；TNF-α 是炎癥啟動的細胞因子，能促進炎性細胞聚集、炎性介質釋放；兩者釋放相互促進，可加重炎癥癥狀。PEG2是重要的免疫負調節(jié)劑，能抑制TNF-α，IL-2 等促炎介質的合成，增加IL-4，IL-10 等抗炎介質的合成［20-22］。本研究結果顯示，與B1組比較，D1組、D2組、D3組大鼠給藥后，咽喉黏膜病變癥狀明顯改善，血清IL-1β，TNF-α，PGE2水平均明顯降低（P＜0.01）。

急性咽炎患者出現(xiàn)的咽痛多為灼痛，吞咽動作可加重其疼痛感，病程多在1 周左右。熱板法和扭體法均為評價藥物止痛作用的常用動物疼痛模型。本研究結果表明，銀黃解毒消腫膠囊對中樞性和外周性疼痛均有良好的鎮(zhèn)痛作用，鎮(zhèn)痛強度與羅通定片相似，但其止痛機制有待后續(xù)進一步研究。

綜上所述，銀黃解毒消腫膠囊能緩解急性咽炎模型鼠的炎性程度及疼痛，其抗炎機制可能與下調血清IL-1β，TNF-α，PGE2水平有關。