多基源大黃藥材的梯度全信息薄層色譜鑒別法研究

劉 勇，安 靜，董占軍

（河北省人民醫(yī)院藥學(xué)部，河北 石家莊 050051）

中藥大黃為歷版《中國藥典》收載品種，其基源藥材有藥用大黃、掌葉大黃、唐古特大黃［1］，具有瀉下攻積、清熱瀉火、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)、利濕退黃之功效，臨床多用于治療實(shí)熱積滯便秘、血熱吐衄、目赤咽腫、癰腫疔瘡、腸癰腹痛、瘀血經(jīng)閉等癥。中藥大黃主含蒽醌類成分，游離型蒽醌類包括大黃素、大黃酸、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚等成分，結(jié)合型蒽醌類包括上述游離型成分與糖結(jié)合成的各種苷，以及蒽酮類成分和二苯乙烯苷類成分［2］等。進(jìn)行定性鑒別和定量測定時(shí)，多以脂溶性大黃素、大黃酚等苷元為指標(biāo)性成分，但操作煩瑣、費(fèi)時(shí)［1，3-4］。目前多采用高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜及超高效液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜（UPLC-Q-TOF-MS）法［5-6］分析3 種基源大黃成分的差異，但費(fèi)用高昂。本研究中對3 種不同基源大黃藥材進(jìn)行了梯度全信息薄層色譜鑒別研究。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

KH-800KDE 型超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；ZF-2型三用紫外分析儀（上海市安亭電子儀器廠）；硅膠G薄層板、硅膠GF254薄層板（青島海洋化工有限公司，規(guī)格為100 mm × 100 mm，厚度為0.20～0.25 mm）。

1.2 試藥

大黃對照藥材（批號為120984-200301）、掌葉大黃對照藥材（批號為121249-201304）、唐古特大黃對照藥材（批號為120902-200609）、土大黃苷對照品（批號為110794-201909，含量＞98%），均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇、環(huán)己烷、乙酸乙酯、甲酸、三氯甲烷、濃氨試液、丁酮均為分析純，水為純化水。土大黃藥材（國藥樂仁堂河北匯編業(yè)有限公司，批號為17051401）。

2 方法與結(jié)果

2.1 醇提取溶液中脂溶性成分薄層色譜鑒別

取大黃、掌葉大黃、唐古特大黃對照藥材各0.2 g，精密稱定，分別加甲醇3 mL，超聲（功率250 W，頻率40 kHz，下同）處理15 min，取上清液，即得對照藥材醇提取溶液。精密吸取上述3種溶液各5～6 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸試液（12∶3∶0.1，V/V/V）為展開劑，展開，取出，用熱風(fēng)吹干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果3 種對照藥材醇提取溶液色譜中，在相同位置顯示相同的亮黃色熒光斑點(diǎn)（圖1）。

2.2 醇提取溶液中中極性成分薄層色譜鑒別

精密吸取2.1 項(xiàng)下3 種溶液各3～5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液（8∶2∶4∶1，V/V/V/ V）為展開劑，展開，取出，用熱風(fēng)吹干，置紫外光燈（365 nm）下檢視，結(jié)果3種對照藥材醇提取溶液色譜中，在相同位置上顯相同的熒光斑點(diǎn)（圖2 A）。置紫外光燈（254 nm）下檢視，結(jié)果3種對照藥材醇提取溶液色譜中，在相同位置上顯示相同的棕褐色斑點(diǎn)（圖2 B）；噴以10%硫酸乙醇溶液，再以105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視，結(jié)果3 種對照藥材醇提取溶液色譜中，在相同位置上顯示相同的熒光斑點(diǎn)（圖2 C）。

2.3 水提取溶液中中極性成分薄層色譜鑒別

取大黃、掌葉大黃、唐古特大黃對照藥材各0.5 g，精密稱定，分別加水40 mL，小火煎煮20 min，以棉花濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL 使溶解，即得對照藥材水提取溶液。吸取上述3種溶液各4～5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液（8∶5∶3∶0.5，V/V/V/ V）為展開劑，展開，取出，用熱風(fēng)吹干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果3種對照藥材水提取溶液色譜中，在相同位置上顯示相同的熒光斑點(diǎn)（圖3 A）。噴以5%香草醛硫酸溶液-乙醇溶液（1∶6，V/V），再以105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下檢視，結(jié)果3 種對照藥材水提取溶液色譜中，在相同位置上顯示相同顏色的斑點(diǎn)（圖3 B）。

2.4 醇提取溶液中水溶性成分薄層色譜鑒別

精密吸取2.1 項(xiàng)下3 種溶液各3～5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10∶7∶1∶1，V/V/V/ V）為展開劑，展開，取出，熱風(fēng)吹干。置紫外光燈（365 nm）下檢視，結(jié)果3 種對照藥材水提取溶液色譜中，在相同位置上顯示相同的熒光斑點(diǎn)（圖4 A）；置紫外光燈（254 nm）下檢視，3 種對照藥材水提取溶液色譜中，在相同位置上顯示相同的棕褐色斑點(diǎn)（圖4 B）。

2.5 醇提取溶液中水溶性成分與土大黃苷薄層色譜鑒別

取土大黃苷對照品適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度為0.3 mg/ mL 的土大黃苷對照品溶液；另取土大黃藥材0.1 g，加甲醇3 mL，超聲處理15 min，取上清液，即得土大黃藥材供試品溶液。精密吸取2.1 項(xiàng)下3 種溶液各2～3 μL、土大黃苷對照品溶液2 μL、土大黃藥材供試品溶液2～3 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（10∶3∶0.2∶0.3，V/V/V/V）為展開劑，展開，取出，用熱風(fēng)吹干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果3 種對照藥材醇提取溶液色譜中，在與土大黃苷對照品溶液色譜相應(yīng)位置上，土大黃藥材供試品溶液色譜顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)，3 種基源大黃藥材均無相應(yīng)熒光斑點(diǎn)呈現(xiàn)；同時(shí)3種基源大黃醇提取溶液在相應(yīng)位置顯示相同的熒光斑點(diǎn)（圖5）。

3 討論

全信息是指在脂溶性成分的檢測部分，其薄層板的最前沿已無任何信息斑點(diǎn)呈現(xiàn)，而在水溶性成分的檢測部分在薄層板的基線處也不再有明顯的斑點(diǎn)殘痕，說明所有的信息斑點(diǎn)都已包括在梯度薄層展開范圍內(nèi)。梯度是指將高效液相梯度洗脫的內(nèi)涵引申到中藥薄層色譜鑒別領(lǐng)域，采用相似相容的極性梯度展開劑將藥材中的脂溶性、中極性、水溶性成分展開后，將具有檢測信息的大部分有效成分按極性大小，在極少數(shù)的薄層板上及不同的檢視條件下，獲得盡可能全的斑點(diǎn)信息圖譜，由此組成1套從脂溶性到水溶性成分的全信息薄層色譜圖，從而進(jìn)行藥材與制劑的多信息質(zhì)量評價(jià)。

大黃的薄層色譜鑒別一直采用脂溶性苷元為指標(biāo)［7-9］。本研究中初次提供了中極性和水溶性成分的42 種新鑒別特征點(diǎn)，加上6個(gè)脂溶性信息斑點(diǎn)和土大黃苷鑒別中的5個(gè)信息斑點(diǎn)，共53個(gè)信息斑點(diǎn)。結(jié)果顯示，3 種基源大黃的斑點(diǎn)均完全一致，以其中任一基源的大黃對照藥材為對照，均不影響結(jié)果判斷。同一塊薄層板，在不同檢視條件下呈現(xiàn)的信息斑點(diǎn)不一樣，雖然相互重疊，但在各自檢視條件下互不干擾，做到了斑點(diǎn)互補(bǔ)，提高了檢測信息量，大幅度提升了3種基源大黃的薄層色譜鑒別指標(biāo)，利于市售藥材、復(fù)方制劑的質(zhì)量檢測與評價(jià)。其中土大黃苷的檢測手段，還可識別真?zhèn)未簏S藥材。

與已有相關(guān)指紋圖譜［10-11］比較，本研究中僅需幾塊薄層板，少許提取溶劑和展開劑，即可發(fā)揮指紋圖譜的類似質(zhì)控效果，不但檢測信息量大、結(jié)果直觀，而且方法簡便、快捷、效率高。