牛病毒性腹瀉疫苗的免疫效果觀察

高祥軍

摘要：目的：觀察牛病毒性腹瀉疫苗對(duì)牛病毒性腹瀉病的免疫效果;方法：選取BVDV檢測(cè)顯示陰性的健康牛8頭，用制備好的成品實(shí)驗(yàn)疫苗為8頭健康牛注射，不同時(shí)間段采集血清進(jìn)行抗體檢測(cè)并觀察其臨床變化與抗體水平增減情況;結(jié)果：該疫苗具有安全可行性，免疫后不同階段抗體水平都維持在有效保護(hù)范圍內(nèi)，保護(hù)率非常高，具有良好的免疫原性，可用于牛病毒性腹瀉病的安全防控，為BVDV滅活疫苗自主研發(fā)提供了良好基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：牛病毒性腹瀉病毒;疫苗;抗體;免疫效果

牛病毒性腹瀉病（ bovine viral diarrhea，BVD） 是由黃病毒科、瘟病毒屬的牛病毒性腹瀉病毒引起的，這種傳染病極其復(fù)雜，臨川表現(xiàn)繁復(fù)，多以腹瀉、發(fā)熱、呼吸道癥狀、流產(chǎn)、死胎或畸胎、黏膜潰爛等為主要表現(xiàn)，是一種會(huì)引起免疫機(jī)能障礙的急、熱性傳染病。牛病毒性腹瀉病在我國(guó)流行很廣泛[1]。這種病毒進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體后會(huì)引起長(zhǎng)期的持續(xù)性的感染，同時(shí)引起免疫抑制[2]，這種感染可以持續(xù)很長(zhǎng)時(shí)間甚至終身攜帶并持續(xù)不斷向外界排出可致病性的牛病毒性腹瀉病病毒，致使本病的防治難度大大提高并造成了長(zhǎng)期的危害[3]。連續(xù)幾年，牛病毒性腹瀉病毒都對(duì)我國(guó)養(yǎng)殖戶特別是規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)造成了不小的影響，蔓延迅猛，造成的經(jīng)濟(jì)損失日益嚴(yán)重[4]。目前，對(duì)牛病毒性腹瀉病的防控措施還主要是有效的疫苗接種，只是國(guó)內(nèi)關(guān)于牛病毒性腹瀉病的商品化疫苗缺口很大，因此，本研究旨在制備出具有有效免疫效力的牛病毒性腹瀉病滅活疫苗，對(duì)牛病毒性腹瀉病病毒檢測(cè)陰性的牛進(jìn)行接種并觀察其是否具備安全性與免疫效果，希望可以為牛病毒性腹瀉病的防治提供些許參考。

1? 材料與方法

1.1? 試驗(yàn)動(dòng)物

青海民和縣地區(qū)8頭健康牛，試驗(yàn)組6頭（1月齡2頭、4月齡4頭），對(duì)照組2頭，牛病毒性腹瀉病毒抗體檢測(cè)都為陰性。

1.2? 牛病毒性腹瀉疫苗

南京某生物技術(shù)有限公司提供的牛病毒性腹瀉疫苗Ⅰ型疫苗，所提供疫苗為試驗(yàn)后期成品。

1.3? 安全性測(cè)試

1.3.1 免疫注射

選取1月齡健康犢牛2頭，注射前，先將疫苗拿到室溫下平衡溫度，達(dá)到室溫后充分搖勻，每頭牛進(jìn)行頸部肌肉注射疫苗2mL，首免注射后21日再進(jìn)行第二次加強(qiáng)免疫注射，每頭牛接種2mL。

1.3.2? 臨床觀察

疫苗注射后，觀察牛的精神狀態(tài)、體溫、采食飲水等情況，查看注射部位是否有異常變化。

1.3.3? 采集血清

免疫后的第5天、第15天、第30天、第60天、第120天、第180天，分別用真空采血管進(jìn)行頸靜脈采血，分離血清后-20℃凍存待檢。

1.3.4? 抗體檢測(cè)

采集的血清用ELISA方法檢測(cè)抗體，直接使用牛病毒性腹瀉病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，記錄結(jié)果。

1.4 免疫原性測(cè)試

1.4.1 免疫注射

選取4月齡健康牛4頭，注射前，先將疫苗拿到室溫下平衡溫度，達(dá)到室溫后充分搖勻，每頭牛進(jìn)行頸部肌肉注射疫苗2mL，首免注射后21日再進(jìn)行第二次加強(qiáng)免疫注射，每頭牛接種2mL。對(duì)照組2頭健康牛不注射疫苗，正常飼養(yǎng)。

1.4.2? 臨床觀察

疫苗注射后，觀察牛的精神狀態(tài)、體溫、采食飲水等情況，查看注射部位是否有異常變化。

1.4.3? 采集血清

免疫后的第5天、第15天、第30天、第60天、第120天、第180天，分別用真空采血管進(jìn)行頸靜脈采血，分離血清后-20℃凍存待檢。

1.4.4? 抗體檢測(cè)

采集的血清用ELISA方法檢測(cè)抗體，直接使用牛病毒性腹瀉病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，記錄結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 安全性測(cè)試結(jié)果

2.1.1 疫苗注射后臨床觀察

注射疫苗后，2頭1月齡牛采食、飲水一切正常，體溫?zé)o明顯升高，精神良好，臨床表現(xiàn)未見(jiàn)異常。可證明疫苗的安全性很好。

2.1.2 抗體檢測(cè)

疫苗免疫后的第5天、第15天、第30天、第60天、第120天、第180天，2頭1月齡牛的血清ELISA抗體檢測(cè)都為陽(yáng)性，2頭牛在各個(gè)時(shí)間段的OD280值檢測(cè)結(jié)果可見(jiàn)圖1。由圖1可以看出，疫苗免疫后的第5天開(kāi)始產(chǎn)生抗體，抗體形成是在第15天達(dá)到最高，隨后抗體水平緩慢下降，但一直維持在一定高度，疫苗免疫后180天還可以檢測(cè)出牛病毒性腹瀉病毒抗體。

2.2 免疫原性測(cè)試結(jié)果

2.2.1 疫苗注射后臨床觀察

注射疫苗后，4頭4月齡牛采食、飲水一切正常，體溫?zé)o明顯升高，精神良好，臨床表現(xiàn)未見(jiàn)異常。與對(duì)照組無(wú)異。

2.2.2 抗體檢測(cè)

疫苗免疫后的第5天、第15天、第30天、第60天、第120天、第180天，4頭4月齡牛的血清ELISA抗體檢測(cè)都為陽(yáng)性，2頭對(duì)照組4月齡牛的血清ELISA抗體檢測(cè)仍為陰性，4頭實(shí)驗(yàn)組牛在各個(gè)時(shí)間段的OD280值檢測(cè)結(jié)果可見(jiàn)圖2。由圖2可以看出，疫苗免疫后的第5天開(kāi)始產(chǎn)生抗體，抗體形成是在第15天達(dá)到最高，隨后抗體水平緩慢下降，但一直維持在一定高度，疫苗免疫后180天還可以檢測(cè)出牛病毒性腹瀉病毒抗體。

3 討論

牛病毒性腹瀉病具有高度傳染性，防控困難，早年間的傳播速度驚人，國(guó)內(nèi)、國(guó)外多地都有相關(guān)報(bào)道，集約化養(yǎng)殖場(chǎng)發(fā)病率居高不下，調(diào)研表明此病長(zhǎng)期存在于我國(guó)各地大中型牛場(chǎng)，在養(yǎng)牛業(yè)中造成的經(jīng)濟(jì)及其他損失不計(jì)其數(shù)[5-6]。目前，牛病毒性腹瀉病的防控措施還主要是有效的疫苗接種，但有效且長(zhǎng)期具有保護(hù)效力的疫苗屈指可數(shù)，需要疫苗在刺激機(jī)體的細(xì)胞免疫的同時(shí)又可以剌激機(jī)體產(chǎn)生體液免疫，牛在注射疫苗后可以快速產(chǎn)生抗體，并且抗體可以持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間的免疫保護(hù)[7]。目前，我國(guó)多地區(qū)都在努力研發(fā)有效的BVDV疫苗，本文所用疫苗為試驗(yàn)后期成品，我們對(duì)其進(jìn)行了安全性測(cè)試及免疫原性測(cè)試，結(jié)果表明，1月齡犢牛接種后各方面體征正常，無(wú)明顯臨床癥狀，表明其安全性有所保證;常規(guī)免疫4月齡易感染牛時(shí)，各方面體征正常，無(wú)明顯臨床癥狀，抗體檢測(cè)水平結(jié)果良好，正常劑量即可正常產(chǎn)生抗體且保護(hù)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)半年。可作為防控牛病毒性腹瀉病的優(yōu)質(zhì)候選疫苗。

參考文獻(xiàn)：

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[2]陶潔，洪天旗，王亨，張信軍，劉惠莉，朱國(guó)強(qiáng).我國(guó)牛病毒性腹瀉流行現(xiàn)狀與防控策略[J].微生物學(xué)通報(bào)，2019，46（07）：1850-1858.

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