老年冠心病患者T淋巴細胞亞群分析及其臨床意義*

全小慶，黃嘉寶，周洪蓮，徐 婷，張存泰

(1.廣東省深圳市龍華區中心醫院全科醫學科，廣東 深圳 518110；2.華中科技大學同濟醫學院 附屬同濟醫院全科醫學科，湖北 武漢 430030；3.中山大學附屬第三醫院全科醫學科，廣東 廣州 510630)

冠心病是嚴重威脅人類健康和生命安全的一種心血管疾病，其發病率與病死率隨年齡增長而顯著增加。有研究表明，年齡每增加10歲，冠心病發病率隨之增加2倍[1]。動脈粥樣硬化斑塊的不穩定性是冠心病常見的病理基礎，動脈粥樣硬化斑塊形成的過程不僅有脂質沉積的參與，還有全身慢性炎癥反應的作用，持續的炎性反應使冠狀動脈斑塊不穩定，容易被侵蝕或破裂，導致血栓形成和心肌梗死；此外，循環中的炎癥細胞(如中性粒細胞、淋巴細胞等)均參與了冠心病病程中的炎性反應及免疫過程[1-2]。有研究表明，動脈粥樣硬化斑塊內T淋巴細胞占所有有核細胞總數的10%～20%[3]。不同表型的T淋巴細胞在冠心病發生、發展中具有不同的作用，如輔助性T淋巴細胞17(Th17)具有促進動脈粥樣硬化發展的作用[4]；而CD4+CD25str+CD127dim/-調節性T淋巴細胞(Treg)則因其在動脈粥樣硬化發展中的保護作用而備受關注[5]。臨床研究表明，Treg可能在動脈粥樣硬化的早期即參與了免疫調節[6]。故本研究探討了老年冠心病患者外周血T淋巴細胞亞群變化，旨在為研究T淋巴細胞在冠心病中的作用提供更多的理論依據。

1 資料與方法

1.1資料

1.1.1一般資料 選取華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院2014年12月至2017年2月的老年住院患者68例，其中男43例(63.24%)，中位年齡81.42歲。按不同疾病類型分為對照組(無冠心病患者24例)、穩定型心絞痛(SAP)組(SAP患者25例)和急性冠狀動脈綜合征(ACS)組(ACS患者19例)。本研究已獲得華中科技大學同濟醫院倫理委員會批準(批準號TJ-C20141112)，并按照《赫爾辛基宣言》條例執行。研究過程嚴格按照納入及排除標準進行患者篩選并對所有研究相關數據真實記錄，確保其準確、原始、完整、清晰且有效。

1.1.2納入標準 (1)年齡大于或等于60歲的老年患者。(2)對照組為無冠心病史患者。(3)SAP組患者根據SAP診斷指南[7]符合SAP診斷標準：①存在胸痛癥狀，多在勞累或情緒激動時發作，部位常在胸骨后或左前胸(范圍常不局限)，呈陣發性，持續時間短(多數不超過10 min)，口服硝酸甘油后可迅速緩解；②體格檢查常無明顯異常；③發作時心電圖可出現ST-T缺血性改變；④生化檢驗顯示血清心肌標志物(優選肌鈣蛋白)陰性。(4)ACS組患者根據ACS診斷指南[8]符合ACS診斷標準：①存在缺血性胸痛癥狀，并持續時間較長，常超過30 min，且含服硝酸甘油后癥狀無明顯緩解；②心電圖存在動態演變或ST-T持續抬高或僅有ST段壓低/T波倒置；③生化檢驗顯示血清心肌標志物(優選肌鈣蛋白)升高。

1.1.3排除標準 (1)年齡小于60歲；(2)患有終末期肝病、腎功能衰竭等；(3)患有重癥感染、消化道出血、嚴重創傷、腦血管疾病急性期、近半個月內曾行重大手術； (4)患有惡性腫瘤、血液系統疾病、自身免疫性疾病等；(5)近期曾服用影響淋巴細胞計數的藥物(如糖皮質激素、免疫抑制劑等)；(6)病歷資料不完整。

1.2方法

1.2.1資料收集 從住院病歷資料中收集三組患者基線數據，即性別、年齡、吸煙史及飲酒史(既往或當前煙草/酒精使用情況)。此外，記錄實驗室分析結果，包括全血細胞計數(白細胞、中性粒細胞、淋巴細胞、血小板計數、血紅蛋白)、腎功能指標(血肌酐)、肝功能指標(谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶)、清蛋白、血脂(總膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白)等。

1.2.2外周血標本采集 采集三組患者入院時或住院第2天清晨外周靜脈血用于全血細胞計數、各生化指標、流式細胞術檢測(由同濟醫院檢驗科實驗室測定)。

1.2.3外周血T淋巴細胞亞群檢測 使用以下單克隆抗體CD3 APC-H7-A、CD4 Pacific Blue-A、CD8 APC-A、CD 19 BV711-A、CD25 PE-Cy7-A、CD 28 FITC-A、CD45 Pacific Orange-A、CD56 ECD-A、CD127 PE-A等。使用未經稀釋的抗體，采用FACSCanto流式細胞儀(BD Biosciences,San Jose,CA)測定淋巴細胞亞群，并使用Diva軟件(BD Biosciences)計算淋巴細胞亞群絕對值和百分比。

2 結 果

2.1三組患者一般資料比較 三組患者年齡、吸煙及飲酒史、肝功能、白細胞、淋巴細胞、血紅蛋白、血小板計數、低密度脂蛋白、總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；SAP組和ACS組患者肌酐水平均較對照組高，ACS組患者中性粒細胞、低密度脂蛋白更高，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 三組患者一般資料比較

2.2三組患者外周血T淋巴細胞亞群水平比較 SAP組患者各淋巴細胞亞群百分比與對照組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。與對照組比較，ACS組患者Treg亞群百分比明顯降低，差異有統計學意義(P<0.05)；與SAP組比較，ACS組患者CD3+CD45+、CD3+CD4+、Treg 3個T淋巴細胞亞群水平下降，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 三組患者外周血T淋巴細胞亞群水平比較

續表2 三組患者外周血T淋巴細胞亞群水平比較

2.3Treg比例與各項臨床指標的相關性 年齡、甘油三酯與Treg比例均呈負相關(P<0.05)；其他臨床指標與Treg比例無關(P>0.05)。見表3。

表3 Treg比例與各項臨床指標的相關性

3 討 論

動脈粥樣硬化引起的冠狀動脈疾病是導致老年人死亡的常見疾病之一。目前，我國心血管疾病患者約有3億人，每年因心臟病致死的患者中有10%～20%是由冠心病引起的[9-10]。冠心病發生、發展的機制較為復雜，其中已得到證實的主要有三方面，即脂質浸潤、血栓形成及內皮細胞損傷。有研究表明，冠心病患者冠狀動脈粥樣斑塊中存在免疫細胞浸潤及免疫復合物沉積[11]。冠心病患者病程中伴隨的局部或全身炎癥反應說明了冠狀動脈粥樣硬化的病變過程與免疫應答(體液免疫與細胞免疫)密切相關[9-12]。因此，本研究分析并比較了老年冠心病患者T淋巴細胞亞群比例，以期為冠心病的機制研究提供進一步的理論依據。

T淋巴細胞是來源于骨髓的多能干細胞，經誘導分化成熟后可發揮細胞免疫及免疫調節等功能。T淋巴細胞在機體內不斷更新、循環，在同一時間可存在不同發育階段或功能的亞群。Treg主要負責調節機體免疫反應，維持自身免疫耐受和避免免疫損傷，Treg是目前研究關注的熱點。Treg占健康者外周血CD4+T淋巴細胞的5%～10%，由SAKAGUEHI在1995年首次報道，是一類可高表達白細胞介素-2受體的α鏈(CD25)分子的具有免疫負調節作用的CD4+T淋巴細胞[11,13]。目前，關于ACS患者外周血Treg變化的文獻報道較少見。本研究結果顯示，與對照組比較，SAP組和ACS組患者Treg比例均下降，并且ACS組患者外周血Treg明顯低于SAP組。推測其原因可能是ACS患者病程中存在細胞免疫激活，各淋巴細胞表面特性改變，Treg數量下降，Th1顯著激活，免疫平衡破壞，進而導致斑塊不穩定性增加和冠狀動脈自身免疫損傷加重。程翔等[14]發現，不穩定型心絞痛患者外周血Treg比例下降，并且明顯低于對照組。有臨床試驗對不同類型冠心病患者冠狀動脈斑塊進行免疫學檢測，結果顯示，隨著斑塊不穩定性增加，Treg比例隨之下降[15]。

本研究結果顯示，老年冠心病患者Treg比例與年齡呈明顯負相關(P<0.05)，表明隨年齡增大Treg比例隨之下降。江敏等[16]報道，50～60歲健康者Treg明顯低于30～40歲者。越來越多證據表明，Treg活性、數量、功能均可能與脂蛋白分數有關。動脈粥樣硬化患者血清氧化低密度脂蛋白水平與Treg比例呈負相關，氧化低密度脂蛋白介導的細胞凋亡信號通路可能導致了Treg凋亡增加，引起Th17/Treg失衡，加劇了動脈硬化斑塊的形成和失穩[17]。本研究結果顯示，冠心病患者Treg比例與甘油三酯呈負相關(P<0.05)，提示Treg或在動脈粥樣硬化發展中具有保護作用。目前，這種表現的原因尚未闡明，加之本研究樣本量有限，故尚需擴大樣本量進一步研究。

綜上所述，老年ACS患者外周血T淋巴細胞亞群比例發生異常改變，可能與冠狀動脈粥樣硬化病變程度密切相關。通過改善Treg亞群的細胞免疫功能可能有助于改善冠心病患者的療效或成為冠心病治療的新靶點。