國內(nèi)常用全血白細(xì)胞濾器應(yīng)用性評價研究*

陳 顯，姜 健

(1.江蘇省血液中心，江蘇 南京 210042;2.無錫市中心血站，江蘇 無錫 214000)

血液制劑不濾白進(jìn)行臨床輸注可引起非溶血性發(fā)熱、血小板輸注無效、免疫抑制，甚至病毒感染等一系列臨床輸血反應(yīng)。目前，國內(nèi)多家采供血機(jī)構(gòu)已開展了血液濾白操作，尤其是江蘇省所有采供血機(jī)構(gòu)已將血液濾白比例需要達(dá)到99%以上作為血站3年一度周期評審驗收標(biāo)準(zhǔn)，要求除卻制備手工濃縮血小板等特殊血液制劑外所有全血必須經(jīng)濾白才可投入臨床使用，從而進(jìn)一步保證用血安全。

血液濾白有多種方法，使用全血白細(xì)胞濾器進(jìn)行濾白作為最便捷的方式已廣泛用于全國各大采供血機(jī)構(gòu)。目前，市場上使用的全血白細(xì)胞濾器基本為第3代產(chǎn)品，主要是采用聚酯纖維無紡布作濾膜,并在纖維中添加了特殊的高分子聚合材料，通過攔截過濾和細(xì)胞黏附等方式，可以濾除全血中99.9%的白細(xì)胞，使過濾后殘余白細(xì)胞的數(shù)值達(dá)到國標(biāo)甚至歐標(biāo)的效果。本研究調(diào)研了市場上常見的幾種全血白細(xì)胞濾器，通過測試比較了不同濾器的濾白效果及濾器在血液制備流程中對部分血液制劑成分的影響，旨在為各家采供血機(jī)構(gòu)選擇合適的濾器提供數(shù)據(jù)支持。

1 資料與方法

1.1資料

1.1.1標(biāo)本來源 血液樣品采集在江蘇省血液中心流動獻(xiàn)血車上進(jìn)行，體采科按照《GB18467-2011獻(xiàn)血者健康檢查要求》對獻(xiàn)血者健康征詢、初篩檢測后進(jìn)行全方位評估，完全合格者方可獻(xiàn)血，采集后的400 mL全血需滿足2019版《血站技術(shù)操作規(guī)程》和《GB18469-2012全血及成分血質(zhì)量要求》，采集時間需小于13 min，全血肉眼觀察無色澤異常、溶血、凝塊、氣泡及重度乳糜等情況。2020年3月共采集160份(血袋廠家：山東威高集團(tuán)醫(yī)用高分子制品股份有限公司，保存液為ACD，批號：202002)。采集后全程冷鏈至成分制備科完成血液交接，將全血充分混勻，使用無菌接駁設(shè)備和全自動成分血分離機(jī)將該全血均勻分為2份，每份200 mL。對其中一份(對照組)全血不經(jīng)白細(xì)胞濾器直接離心分離速凍后制備成新鮮冰凍血漿(FFP)，另一份(研究組)則使用目前國內(nèi)常用的4種全血白細(xì)胞濾器(即A、B、C、D組，A、B組為國產(chǎn)硬殼濾器，C組為進(jìn)口軟殼濾器，D組為進(jìn)口硬殼濾器)進(jìn)行濾白后截取少量全血，剩余部分離心分離后速凍制備成FFP。

1.1.2儀器 SEPAMTIC-SL(Ⅲ)全自動成分血分離機(jī)(德國LMB公司)，MBF-21速凍機(jī)(盧森堡多美達(dá)公司)、TSCDⅡ無菌接駁機(jī)(日本泰爾茂比司特公司)、殘余白細(xì)胞計數(shù)器Adam-rWBC(韓國NanoEnTeK公司)、ACL7000血凝儀(德國貝克曼公司)、西斯美康XP-100(日本西斯美康公司)等。

1.1.3試劑 白細(xì)胞計數(shù)試劑盒(NanoEntek公司，批號3RW16303)、游離血紅蛋白(Hb)測定試劑盒(北京瑞爾達(dá)生物科技有限公司，批號200409)、Ⅷ因子試劑盒(Hemosil公司，批號495571)等。

1.2方法

1.2.1殘余白細(xì)胞計數(shù) 4組截取的少量全血充分混勻后使用Adam-rWBC系統(tǒng)進(jìn)行殘余白細(xì)胞計數(shù)，并同《GB18469-2012全血及成分血質(zhì)量要求》中濾過后白細(xì)胞殘余量進(jìn)行比對，計算合格率。按照《GB18469-2012全血及成分血質(zhì)量要求》白細(xì)胞殘留量應(yīng)≤2.5×106個/U，根據(jù)2019版《血站技術(shù)操作規(guī)程》，75%的抽檢結(jié)果應(yīng)落在質(zhì)量控制指標(biāo)范圍內(nèi)。

1.2.2濾器吸附量 對4種濾器濾前、濾后進(jìn)行稱重，計算濾器的全血吸附量。

1.2.3儲存期末溶血率 將濾白后全血在6 h內(nèi)分離制備成1 U去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞和FFP，使用西斯美康XP-100測量去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞中血紅蛋白(Hb)含量和血細(xì)胞比容(Hct)，應(yīng)用血漿游離Hb測定試劑盒 (Trinder法) 檢測上清液游離Hb濃度，根據(jù)公式(1- Hct)×游離Hb濃度/Hb濃度×1 000×100%計算儲存期末溶血率。按照《GB18469-2012全血及成分血質(zhì)量要求》儲存期末溶血率小于紅細(xì)胞總量的0.8%。

1.2.4FFP中Ⅷ因子含量 將待測FFP置于37 ℃水浴箱中迅速融化，使用ACL7000血凝儀檢測2組全血6 h內(nèi)分離制備的FFP中Ⅷ因子含量。

2 結(jié) 果

2.14組全血濾白后殘余白細(xì)胞合格率和濾器吸附量比較 A組全血濾白后殘余白細(xì)胞合格率未達(dá)到要求，與B、C、D組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 4組全血濾白后殘余白細(xì)胞合格率和濾器吸附量比較

2.24組全血濾白后去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞中Hb含量、Hct、35 d儲存期末溶血率比較 4組全血濾白后均達(dá)到要求。C、D組全血濾白后儲存期末溶血率略優(yōu)于A、B組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 4組全血濾白后去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞中Hb含量、Hc儲存期末溶血率比較

2.34組全血濾白前后對FFP中Ⅷ因子含量的影響比較 A、B、D組全血濾白前后FFP中Ⅷ因子含量比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 4組全血濾白后對FFP中Ⅷ因子含量的影響比較

3 討 論

血液中含有的白細(xì)胞是人體免疫系統(tǒng)中重要的組成成分,不僅是導(dǎo)致臨床非溶血性發(fā)熱反應(yīng)的元兇,也是經(jīng)血傳播病原體在血液中的主要載體，還能引起免疫抑制、同種免疫等一系列輸血反應(yīng)，危及受血者生命安全。另外，全血若不濾白進(jìn)行儲存，白細(xì)胞易崩解后產(chǎn)生白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子等一系列生物活性分子，同樣也會引起臨床輸血過敏等反應(yīng)。自20世紀(jì)60年代開始研發(fā)全血白細(xì)胞濾器，發(fā)展至今已是第3代濾器，通過攔截過濾和細(xì)胞黏附去除全血中白細(xì)胞，可去除99.9%以上的白細(xì)胞，并使殘留白細(xì)胞≤2.5×106個/U，極大地提升了白細(xì)胞清除率，同時，血小板在過濾過程中也能黏附在濾膜上,從而促進(jìn)白細(xì)胞的進(jìn)一步黏附,進(jìn)一步提升過濾效率，從而進(jìn)一步保證臨床用血的安全性。

本研究采用4種國內(nèi)常用的全血白細(xì)胞濾器驗證了其實(shí)用性。白細(xì)胞濾器關(guān)鍵指標(biāo)是濾過后白細(xì)胞殘留量符合《GB18469-2012全血及成分血質(zhì)量要求》。從表1可見，A組全血濾白后殘余白細(xì)胞合格率僅為60.0%，B、C、D組全血濾白后殘余白細(xì)胞合格率均在97.5%。由于本中心對冷沉淀凝血因子的需求量較大，血液采集后需及時送往本中心成分制備科開展FFP制備。所以，多數(shù)血液自采集開始到成分科交接時血液的儲存時間還不滿3 h，血液自身溫度很難達(dá)到2～6 ℃，存在熱血過濾的情況較多，不同溫度的血液過濾對白細(xì)胞的清除是有區(qū)別的[1-5]，尤其是熱血過濾，對濾器自身的質(zhì)量要求較高。本研究結(jié)果顯示，B、C、D組全血經(jīng)熱血過濾后白細(xì)胞可達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)，而A組40%沒有達(dá)到國標(biāo)，若將A組血液溫度降至2～6 ℃再進(jìn)行過濾，濾白合格率可提升至80.0%。但由于全血降溫所需時間較長，會影響本中心后續(xù)FFP的制備效率，建議需要制備較大量FFP的采供血機(jī)構(gòu)可以選擇B、C、D組可以承受熱血過濾的白細(xì)胞濾器，保證濾白質(zhì)量。另外，本研究結(jié)果顯示，4組濾器吸附量差異不大，提示4組濾器對全血的吸附程度相當(dāng)。

本研究隨后針對濾白后的去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞進(jìn)行了Hb、Hct及儲存期末溶血率(35 d)檢測，結(jié)果顯示，4組全血濾白后去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞中Hb、Hct均達(dá)到國標(biāo)要求。影響白細(xì)胞濾器實(shí)用性的另一個質(zhì)量問題是溶血[6-8]。從本研究結(jié)果來看，4組35 d儲存期末溶血率在全血濾白后均達(dá)到<0.8%的標(biāo)準(zhǔn)，但C、D組全血濾白后期末溶血率略優(yōu)于A、B組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

FFP和冷沉淀凝血因子的質(zhì)量一直是關(guān)注的重點(diǎn)，影響Ⅷ因子的因素很多，濾器的質(zhì)量也是其中之一。濾器作為外源性生物材料，主要通過物理攔截和細(xì)胞黏附等方式對白細(xì)胞進(jìn)行過濾清除[9]。據(jù)文獻(xiàn)報道，濾白同時會引起血液中部分凝血因子活性的變化，從而對后續(xù)血液制劑質(zhì)量造成影響[10-13]。所以，為探討濾器對FFP中Ⅷ因子活性有無影響，本研究對4組全血濾白前后FFP中Ⅷ因子含量進(jìn)行了統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示，A、B、D組全血濾白后Ⅷ因子含量明顯降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而C組則無明顯差異。證明了不同材質(zhì)濾器確實(shí)可以影響凝血因子的變化，也同時為血站選擇合適濾器從而提高成分制備產(chǎn)品尤其是FFP、冷沉淀凝血因子的質(zhì)量提供了數(shù)據(jù)支持。