四川省不同產區中川芎藥材質量評價研究

童菊華，鄢章龍，吳經耀，劉志華，馮 瑛

(1.浙江省中藥研究所有限公司，浙江 杭州310023；2.江西藥都樟樹制藥有限公司，江西 宜春 331200)

川芎為臨床常用中藥材，來源于傘形科植物川芎LigusticumChuanxiongHort.的干燥根莖，為活血行氣之要藥[1]。川芎所含多種化學成分，主要包括內酯類、有機酸和酚類化合物[2]。大量的研究表明，川芎對心腦血管、呼吸、泌尿系統及婦科的疾病有一定的治療效果[3]。

隨著2017年《中華人民共和國中醫藥法》的頒布和一系列政策的出臺，中藥配方顆粒、經典名方的開發已成為當前中醫藥研究的熱點之一。而中藥材是中藥制劑研發和生產的源頭，其產地是影響中藥材質量的關鍵因素，固定產地是保證中藥材質量相對穩定的重要方法。

中藥材及飲片質量評價的研究較為成熟，主要有一測多評法、指紋圖譜相似度評價等方法[4-6]，大多是通過測定樣品中有效成分的含量以及共有的特征峰進行評價，對藥材中其他可能影響藥材質量的因素研究較少。本研究為客觀有效地表征道地產區的川芎藥材質量，保證原藥材有效性和安全性，根據2015年版《中國藥典》對川芎的檢測項目，對阿魏酸的含量測定方法進行了優化，同時對21批川芎藥材水分、總灰分、酸不溶性灰分及醇溶性浸出物等常規理化項目進行評價，主要通過SIMCA分析軟件對所得的5個指標性數據進行降維處理，并進行主成分分析，以期為四川道地產區川芎藥材質量控制和種質資源的優選提供理論和實驗依據。

1 儀器與試劑

Agilent1100高效液相色譜系統(美國安捷倫公司)；ME204-E電子分析天平(瑞士梅特勒公司)；DK-S26電熱恒溫水浴鍋(上海精宏實驗設備有限公司)。

阿魏酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110773-201614，純度99.0%)，乙腈為色譜純(默克)；甲醇為分析純；水為超純水，21批川芎藥材來源見表1。

表1 川芎藥材來源

2 方法

2.1 色譜條件

按照2015年版《中國藥典》的方法對阿魏酸以及川芎樣品進行分析，色譜條件為：色譜柱為Agilent XDB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)；流動相：甲醇-1%醋酸水(30∶70)等度洗脫，柱溫30 ℃，流速1.00 mL·min-1，檢測波長321 nm，進樣量10μL。優化后的色譜條件為：色譜柱為Agilent XDB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)；流動相：乙腈-0.1%磷酸水溶液(17∶83)等度洗脫，柱溫30 ℃，流速1.00 mL·min-1，檢測波長321 nm，進樣量10μL，理論塔板數按阿魏酸計算不少于4 000。色譜見圖1。結果表明改用乙腈-0.1%磷酸水溶液后，阿魏酸保留時間為11 min，而藥典方法中阿魏酸的保留時間為20 min左右，極大地縮短了分析時間，節約溶劑，提高效率。

注：A 對照品溶液；B.供試品溶液；1.阿魏酸(藥典方法)；C.對照品溶液；D.供試品溶液(優化后)。

2.2 溶液配制

2.2.1 對照品溶液配制 精密稱取阿魏酸對照品10.59 mg，置50 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得阿魏酸的貯備液，再精密量取1 mL至10 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液制備 取本品S1粉末(過四號篩)約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，過0.45μm濾膜，即得。

2.3 方法學考察

2.3.1 標準曲線的制備 分別精密量取“2.2.1”項下對照品的貯備液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mL至10 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，即得S1～S7對照品溶液。分別按“2.1”項下的色譜條件分析，測定峰面積，以峰面積(Y)對質量(X)進行線性回歸。結果表明，阿魏酸0.083 9～0.335 5μg·mL-1內線性關系良好，回歸方程Y=6 022.992 0X-17.338 6，R2=0.999 9。

2.3.2 精密度試驗 精密吸取同一對照品溶液，在“2.1”項下優化后的色譜條件進樣測定，連續進樣6次，測得阿魏酸峰面積RSD為0.1%，表明儀器的精密度良好。

2.3.3 重復性試驗 取S1樣品粉末，按“2.2.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣分析，計算阿魏酸的含量，阿魏酸含量的RSD為0.8%。結果表明，本法具有良好的重復性。

2.3.4 加樣回收率試驗 取已知含量的S1粉末 0.25 g(阿魏酸含量為1.1 mg·g-1)共 6 份，精密稱定。加入2.5 mL“2.2.1”項下對照品貯備液，按“2.2.2”項下方法制備，依法測定，計算阿魏酸的平均回收率為 98.7%，RSD為0.8%，表明方法的回收率良好，結果見表2。

2.3.5 穩定性試驗 取S1樣品按“2.1”項下色譜條件進樣，分別于0，3，6，9，12，24，36 h測定，記錄阿魏酸的峰面積。其峰面積的RSD為0.7(n=6)。結果表明36 h內樣品穩定性良好。

2.3.6 川芎藥材含量測定 取21批川芎藥材粉末，精密稱定，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別進樣測定。川芎樣品中阿魏酸的含量結果見表2。

表2 加樣回收率試驗結果

2.3.7 川芎藥材水分、浸出物、總灰分以及酸不溶性灰分的測定 按2015年版《中國藥典》一部川芎質量標準項下的要求分別對21批川芎藥材樣品進行測定，結果見表3。

表3 樣品含量測定結果 (%)

2.3.8 統計學分析 以不同產區川芎藥材阿魏酸的峰面積為原始數據，運用SPSS 19.0 軟件進行系統聚類分析，采用組間聯結，結果見圖2。同時對阿魏酸的含量、水分、浸出物、總灰分及酸不溶性灰分等5個指標進行主成分分析，利用模式識別對數據降維處理，得到主成分的得分圖和載荷圖，結果見圖3。

圖2 川芎樣品聚類分析樹狀圖

3 結果

由聚類分析圖可知(圖2)，當組間距為15時，川芎藥材被分為3類，S3為Ⅰ類；S2，S9，S10，S15，S19，S20為Ⅱ類；其他為Ⅲ類。以阿魏酸的含量為評價標準，S3(四川夾江)質量最優。由主成分得分圖(圖3a)可知[R2X(cum)=1；Q2(cum)=0.936]，說明此模型可靠性高；圖3b表示各個主成分對模型分類的相關性，水分對模型分類呈負相關，阿魏酸的含量、醇溶性浸出物、總灰分及酸不溶性灰分呈正相關；圖3c為得分圖對應的載荷圖，反映了變量對樣品分類的貢獻程度，由圖3可知，浸出物對樣品分類的貢獻程度最高，水分次之，含量的貢獻程度較低，說明21批川芎藥材阿魏酸的含量差異不明顯。

圖3 川芎樣品主成分分析

4 結論

4.1 色譜條件的選擇

本實驗分別考察了甲醇-水、乙腈-0.085%磷酸水溶液與乙腈-0.1%磷酸水溶液，結果顯示以上3種流動相均能達到較好的分離，考慮分析時間及溶液配制的簡便性，最后選擇乙腈-0.1%磷酸。同時考察了不同品牌的色譜柱，結果顯示阿魏酸對色譜柱的耐用性較好，均能達到基線分離。

4.2 分析方法評價

本研究運用HPLC測定了21批阿魏酸的含量，說明該液相方法可靠、靈敏，與超高效液相相比，成本較低，儀器維護簡單。從聚類分析圖與主成分分析圖可知，僅用阿魏酸的含量作為分類依據與用多指標作為分類依據，對藥材質量產地的劃分有一定的區別。因此，同時運用CA和PCA分析，兩者相互驗證和補充，可為川芎藥材質量評價提供參考。從主成分得分圖可看出，同一產地的川芎分散到不同的區域，說明，川芎藥材的質量可能與天氣溫濕度、采挖粗加工方式以及曬干溫度等因素相關。后續可收集更多產地川芎藥材進行篩選，找出質量最優產地。而主成分分析可篩選出共有的特征成分，得到決定因素，為川芎藥材質量評價提供更多參考依據，進而從源頭保證中藥材的質量。