早期宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的臨床病理特征及與EZH2、BRMS1蛋白表達(dá)的相關(guān)性研究

張娟，孫麗莎，王虹

（焦作市第二人民醫(yī)院婦科，河南 焦作 454150）

宮頸癌是原發(fā)于子宮頸部位的惡性腫瘤，在宮頸癌早期及時(shí)進(jìn)行手術(shù)治療，治愈率可達(dá)到80%以上，但單一的宮頸癌根治術(shù)仍可能出現(xiàn)宮頸癌復(fù)發(fā)情況[1]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌復(fù)發(fā)部位從高到低依次為盆壁、宮旁和宮頸，復(fù)發(fā)因素主要包括術(shù)后恢復(fù)、治療方法、疾病分期與疾病類(lèi)型，術(shù)后護(hù)理及術(shù)后飲食也是導(dǎo)致宮頸癌復(fù)發(fā)的重要因素[2]。Zeste基因增強(qiáng)子人類(lèi)同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)是一種組蛋白賴(lài)氨酸N-甲基轉(zhuǎn)移酶，其過(guò)表達(dá)與多種癌癥的發(fā)生發(fā)展相關(guān)[3]。乳腺癌轉(zhuǎn)移抑制基因1(breast cancer metastasis suppressor 1，BRMS1)是在乳腺癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，可降低乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛能[4]；早期宮頸癌復(fù)發(fā)與其臨床病理特征有密切相關(guān)性，但其臨床病理特征與EZH2、BRMS1蛋白表達(dá)的相關(guān)性尚無(wú)明確報(bào)道。因此，本研究旨在探討早期宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)的臨床病理特征及與EZH2、BRMS1蛋白表達(dá)的相關(guān)性，以期為臨床預(yù)防宮頸癌復(fù)發(fā)提供更多循證數(shù)據(jù)支持。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2015年6月至2020年6月在本院收治的238例行宮頸癌根治術(shù)治療的早期宮頸癌患者，根據(jù)術(shù)后1年隨訪(fǎng)有無(wú)復(fù)發(fā)分為復(fù)發(fā)組64例與未復(fù)發(fā)組174例。納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合《婦產(chǎn)科學(xué)》[5]中宮頸癌的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，病理診斷為宮頸癌；FIGO臨床分期均為ⅠA2～ⅡA2期；臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并嚴(yán)重精神障礙疾病者；妊娠期或哺乳期者；合并嚴(yán)重心腦、肝腎功能障礙者；合并其他腫瘤疾病者。

1.2 EZH2、BRMS1蛋白免疫組化檢測(cè)方法 儀器與試劑：EZH2多克隆抗體（美國(guó)艾美捷Epigentek，貨號(hào)A-2019-050）、BRMS1兔抗人多克隆抗體（美國(guó)艾美捷Epigentek，貨號(hào)ABP52889）。

選擇鏈酶卵白素-過(guò)氧化物酶免疫組織化學(xué)法檢測(cè)EZH2、BRMS1蛋白表達(dá)水平。將所有患者的石蠟包埋組織準(zhǔn)確切片，再經(jīng)常規(guī)脫蠟（放入二甲苯中10 min）及水化處理（無(wú)水乙醇-95%酒精-85%酒精-75%酒精各5 min逐級(jí)進(jìn)行）后，加入枸櫞酸鈉緩沖液進(jìn)行抗原熱修復(fù)，滴加一抗[EZH2抗體（1∶100）及BRMS1抗體（1∶410）]4℃過(guò)夜，PBS緩沖液沖洗5 min，重復(fù)3次，滴加生物素二抗孵育，37℃孵育30 min后，進(jìn)行PBS沖洗，加入適量DAB顯色液進(jìn)行顯色，蘇木素染色2 min，1%鹽酸酒精分化10 s，二甲苯透明1 min，中性樹(shù)脂封片，顯微鏡下觀察切片癌細(xì)胞細(xì)胞核。

結(jié)果判定[6]：染色結(jié)果均以細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性染色。免疫組織化學(xué)評(píng)分包括染色強(qiáng)度（0分：無(wú)明顯著色，1分：黃色，2分：棕黃色，3分：黃褐色）、陽(yáng)性細(xì)胞所占比例（0分：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5%，1分：5%～25%，2分：26%～50%為，3分＞50%），總分≥2分定義為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3 觀察指標(biāo) 根據(jù)本研究目的，自行設(shè)計(jì)調(diào)查表，通過(guò)電子病例系統(tǒng)收集所有納入對(duì)象的年齡、組織學(xué)類(lèi)型、臨床分期、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮頸浸潤(rùn)深度、分化程度等臨床資料，資料收集工作由醫(yī)院專(zhuān)職人員完成。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料（±s）組間差異采用獨(dú)立t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用（n，%）組間差異比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床資料比較 兩組患者的組織學(xué)類(lèi)型、腫瘤直徑、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮頸浸潤(rùn)深度有顯著差異（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 臨床資料比較（n，%）

2.2 EZH2、BRMS1蛋白表達(dá)情況比較 238例宮頸癌組織中EZH2表達(dá)陽(yáng)性例數(shù)為128例，陽(yáng)性率為53.78%，見(jiàn)圖1；BRMS1表達(dá)陽(yáng)性例數(shù)為38例，陽(yáng)性率為15.97%，見(jiàn)圖2。復(fù)發(fā)組宮頸癌組織中EZH2陽(yáng)性表達(dá)率為70.31%（45/64），BRMS1陽(yáng)性表達(dá)率為7.81%（5/64），未復(fù)發(fā)組宮頸癌組織中EZH2陽(yáng)性表達(dá)率為56.32%（83/174），BRMS1陽(yáng)性表達(dá)率為18.97%（33/174）；復(fù)發(fā)組中EZH2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于未復(fù)發(fā)組（P＜0.05），復(fù)發(fā)組中BRMS1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于未復(fù)發(fā)組（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 EZH2、BRMS1蛋白表達(dá)情況比較（n，%）

圖1 EZH2蛋白在宮頸癌組織中表達(dá)陽(yáng)性；陰性

圖2 BRMS1蛋白在宮頸癌組織中表達(dá)陽(yáng)性；陰性

2.3 EZH2、BRMS1蛋白表達(dá)與宮頸癌術(shù)后復(fù)發(fā)患者的臨床特征的關(guān)系 宮頸癌術(shù)后復(fù)發(fā)患者EZH2、BRMS1蛋白表達(dá)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮頸浸潤(rùn)深度有關(guān)（P＜0.05），與組織學(xué)類(lèi)型、腫瘤直徑（P＞0.05）。見(jiàn)表3。

3 討論

多項(xiàng)臨床研究表明[7]，宮頸癌早期手術(shù)治療后會(huì)復(fù)發(fā)，1年內(nèi)的復(fù)發(fā)率大概為50%左右，且復(fù)發(fā)后患者死亡風(fēng)險(xiǎn)極高。因此，若能早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，可以有較好的根治及預(yù)后效果。相關(guān)研究報(bào)道[8]，早期宮頸癌術(shù)后復(fù)發(fā)與患者的多種臨床特征密切相關(guān)。本次研究中，術(shù)后1年隨訪(fǎng)發(fā)現(xiàn)有64例患者癌癥復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為26.89%；同時(shí)分析患者的臨床資料發(fā)現(xiàn)，組織學(xué)類(lèi)型、腫瘤直徑、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮頸浸潤(rùn)深度與宮頸癌術(shù)后復(fù)發(fā)有相關(guān)性，分析其原因可能是：在組織學(xué)類(lèi)型方面，鱗癌細(xì)胞更容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，形成繼發(fā)腫瘤；臨床分期高、宮頸浸潤(rùn)較深、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，其腫瘤惡化程度更嚴(yán)重，部分患者及時(shí)做了根治手術(shù)，也有復(fù)發(fā)的可能。提示臨床需重點(diǎn)關(guān)注宮頸癌患者的組織學(xué)類(lèi)型、腫瘤直徑、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮頸浸潤(rùn)深度，慎重考慮手術(shù)方案，是否需要進(jìn)行術(shù)后放化療，預(yù)防腫瘤擴(kuò)散導(dǎo)致癌癥復(fù)發(fā)。

腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是癌癥復(fù)發(fā)的重要階段，是成功根治腫瘤的最大障礙。已有研究發(fā)現(xiàn)[9-10]，EZH2參與多種惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，BRMS1具有降低癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的作用。本次研究中，復(fù)發(fā)組中EZH2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于未復(fù)發(fā)組，BRMS1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于未復(fù)發(fā)組，進(jìn)一步說(shuō)明早期宮頸癌患者若癌組織中BRMS1陽(yáng)性表達(dá)率較高，可抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，控制病情發(fā)展；同時(shí)，若EZH2高表達(dá)，可能抑制BRMS1，促進(jìn)癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，進(jìn)而導(dǎo)致宮頸癌復(fù)發(fā)。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)[11]，EZH2蛋白在乳腺癌、肝癌、前列腺癌以及宮頸癌等惡性腫瘤中陽(yáng)性表達(dá)明顯增高，且與腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移、生存時(shí)間和不良預(yù)后密切相關(guān)。本此研究結(jié)果與上述報(bào)道基本一致，分析原因可能是，EZH2是位于7號(hào)染色體的基因，是多梳基因家族的主要成員，屬于轉(zhuǎn)錄抑制因子[12]，能夠抑制多種抑癌基因和腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移，因此在復(fù)發(fā)患者體內(nèi)呈現(xiàn)高表達(dá)；BRMS1表達(dá)能夠通過(guò)與其他分子形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，因此在未復(fù)發(fā)患者體內(nèi)BRMS1表達(dá)相對(duì)較高。本次研究還發(fā)現(xiàn)，宮頸癌術(shù)后復(fù)發(fā)患者EZH2、BRMS1蛋白表達(dá)水平與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮頸浸潤(rùn)深度有關(guān)。說(shuō)明患者臨床分期越晚，宮頸浸潤(rùn)越深，且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其EZH2表達(dá)越高，則BRMS1表達(dá)下調(diào)或缺失。

綜上所述，早期宮頸癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)患者，其臨床分期越晚、宮頸浸潤(rùn)越深、有淋巴轉(zhuǎn)移，則EZH2蛋白表達(dá)越高、BRMS1蛋白表達(dá)越低。但本研究仍存在一定的局限性，一是本次研究樣本數(shù)量較少；二是本次研究為回顧性研究，可能存在個(gè)體差異。還需進(jìn)一步采用大樣本研究對(duì)相應(yīng)的治療手段進(jìn)行深入研究，如EZH2抑制劑的使用對(duì)預(yù)防宮頸癌復(fù)發(fā)的效果。