連翹提取物對慢性盆腔炎模型大鼠的干預作用及對ICAM-1和INF-r水平的影響*

張永會 羅福蘭 胡紅娟

(云南省中醫醫院婦科，云南 昆明 650021)

盆腔炎是指女性生殖道及其周圍組織的炎癥，慢性盆腔炎是急性期時未得到有效的治療和診斷，由于患者體質較差而導致形成的。慢性盆腔炎的病情較頑固，有研究表明[1]，此病的發生是局部調節與促炎因子相互作用和共同參與的結果。慢性盆腔炎是一種常見的婦科炎癥，且呈現出遷延不愈的狀態，患者主要表現為盆腔、腰骶部位疼痛，當身體勞累時，會直接導致病情加重[2]。其病癥反復發作，嚴重影響患者的身心健康，是有待解決的重大婦科難題。連翹是木犀科植物連翹的果實，屬于我國常用的40味藥材之一。其具有清熱解毒、消腫散結等功效。有研究表明[3]，連翹具有抗炎、解熱、鎮痛等藥理作用。連翹主要用于急性傳染、感染性炎性疾病等治療中。但目前臨床上連翹提取物對慢性盆腔炎作用的報道鮮少，因此本研究中探討其對慢性盆腔炎小鼠的干預作用，為臨床上此病的治療提供新方向。

1 材料與方法

1.1 一般材料

1.1.1 實驗動物 選取SPF級SD健康大鼠40只，由基爾頓生物科技(上海)有限公司提供，鼠齡(3.6±0.2)個月，體重(219.7±8.5) g。所有大鼠均養殖在干凈籠子里，室溫在(22.1±1.8)℃，相對濕度35%～40%，每天光照12 h，喂飲純凈水，飼養時間一周。本文研究所做實驗均獲得我院倫理委員會批準。

1.1.2 主要試劑 連翹提取物(山東唐正生物科技有限公司)；氟哌酸膠囊劑(廣東恒健制藥有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 分組及建模 雙盲隨機選取40只大鼠中10只作為正常組，其余30只小鼠建立慢性盆腔炎模型，正常組在建模過程中不做任何處理。參照王新斌等[4]研究實驗中慢性盆腔炎大鼠模型建立方法在無菌環境下建立慢性盆腔炎模型，將大鼠使用100 g/L的水合氯醛進行麻醉，將其仰臥固定，下腹手術部位進行去毛，常規消毒下，在腹中線于尿道口上方1 cm處作0.8～1.0 cm切口，將子宮完全暴露，在距離卵巢2 cm處，使用5號針頭將子宮劃傷，使用相同力道將子宮劃傷5次后，分別向右側輸卵管-卵巢方向注入250 g/L苯酚膠漿溶液0.05 mL，分層關腹。建模成功27只(成功標準：大鼠子宮內膜組織進行HE染色，見腺體增生、大量炎性因子浸潤、纖維結締組織增生，表明建模成功)，隨機分為模型組、陽性對照組和連翹提取物組各9只。

1.2.2 給藥 陽性對照組大鼠使用2 mg/kg的地塞米松灌胃處理[4]；連翹提取物組使用連翹提取物250 mg/kg進行灌胃給藥，正常組和模型組不作任何處理。

1.2.3 切片及染色 隨機選取各組大鼠行全麻處理后，采用斷頭法處死，在無菌、低溫條件下取小鼠子宮內膜組織，將小鼠子宮內膜組織在4%多聚甲醛中浸泡、固定，在溫度為4℃的環境下進行保存。之后行HE染色處理，觀察病理組織變化。

1.2.4 樣本采集 抽取4組大鼠頸總動脈血3 mL，在抗凝管中保存，用3000 r/min的離心機離心，10 min后，將離心靜脈血滴入EP試管中，分離上層血清，在-80℃環境下保存，待用。

1.2.5 免疫球蛋白含量檢測 采用酶聯免疫吸附法對(免疫球蛋白G)IgG、(免疫球蛋白A)IgA、(免疫球蛋白M)IgM水平進行檢測。

1.2.6 ICAM-1、INF-γ、TLR4、NF-kB水平檢測 使用免疫組化法對(細胞間黏附分子-1)ICAM-1水平進行檢測；使用采用酶聯免疫雙抗體夾心法(ELISA)對(γ-干擾素)INF-γ水平進行檢測；使用(上海紀寧生物科技有限公司)ELISA 試劑盒對(Toll樣受體4)TLR4、(核轉錄因子-KB)NF-kB水平進行檢測。

1.2.7 子宮系數、紅細胞壓積及血漿粘度檢測 取大鼠全部子宮，剪去雙側卵巢，剔除脂肪，用電子天平進行稱重，計算各組大鼠子宮重量系數，子宮系數(mg/g)=子宮重(mg)/體重(g)；取1 mL全血，放入溫室壓積管中，3000 r/min進行離心20 min后讀取紅細胞壓積值；將全血、血漿注入血流變儀，然后檢測血漿粘度。

1.2.8 右側子宮質量、左側子宮質量及腫脹度檢測 子宮腫脹度(g)=右側子宮質量-左側子宮質量。

2 結果

2.1 4組大鼠病理組織學觀察 正常組大鼠子宮內膜組織正常，子宮壁界限清晰，未見明顯炎性細胞浸潤；模型組大鼠漿膜層可發現大量炎性細胞，肌層血管明顯水腫，結蹄組織明顯增生，子宮腔內出現不同程度黏連；陽性對照組大鼠子宮組織結構恢復較好，但仍有炎性介質的參與；連翹提取物組大鼠子宮組織結構基本恢復正常，炎性細胞浸潤和組織增生變少。見圖1。

圖1 4組小鼠子宮組織病理組織學觀察(HE 200×)

2.2 4組大鼠血漿免疫球蛋白含量比較 模型組、陽性對照組、連翹提取物組大鼠血漿免疫球蛋白含量均低于正常組，差異有統計學意義(P<0.05)；陽性對照組、連翹提取物組大鼠血漿免疫球蛋白含量均高于模型組，差異有統計學意義(P<0.05)；連翹提取物組大鼠血漿免疫球蛋白含量均高于陽性對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 4組大鼠血漿免疫球蛋白含量比較

2.3 4組大鼠體內ICAM-1、INF-γ、TLR4、NF-kB水平比較 模型組、陽性對照組、連翹提取物組大鼠體內ICAM-1、TLR4、NF-kB均高于正常組，INF-γ水平低于正常組，差異均有統計學意義(均P<0.05)；陽性對照組、連翹提取物組大鼠體內ICAM-1、TLR4、NF-kB均低于模型組，INF-γ水平高于模型組，差異有統計學意義(均P<0.05)；連翹提取物組大鼠體內ICAM-1、TLR4、NF-kB均低于陽性對照組，INF-γ水平高于陽性對照組，差異均有統計學意義(均P<0.05)。見表2。

表2 4組大鼠體內ICAM-1、INF-γ、TLR4、NF-kB水平比較

2.4 4組大鼠子宮系數、紅細胞壓積、血漿粘度比較 模型組、陽性對照組、連翹提取物組大鼠子宮系數、紅細胞壓積、血漿粘度高于正常組，差異有統計學意義(均P<0.05)；陽性對照組、連翹提取物組大鼠子宮系數、紅細胞壓積、血漿粘度低于模型組，差異均有統計學意義(均P<0.05)；連翹提取物組大鼠子宮系數、紅細胞壓積、血漿粘度低于陽性對照組，差異有統計學意義(均P<0.05)。見表3。

表3 4組大鼠子宮系數、紅細胞壓積、血漿粘度比較

2.5 4組大鼠右側子宮質量、左側子宮質量、腫脹度比較 模型組、陽性對照組、連翹提取物組大鼠右側子宮質量、左側子宮質量高于正常組，差異有統計學意義(P<0.05)；陽性對照組、連翹提取物組大鼠右側子宮質量、左側子宮質量、腫脹度低于模型組，差異有統計學意義(均P<0.05)；連翹提取物組大鼠右側子宮質量、左側子宮質量、腫脹度低于陽性對照組，差異有統計學意義(均P<0.05)。見表4。

表4 4組大鼠右側子宮質量、左側子宮質量、腫脹度比較

3 討論

慢性盆腔炎屬于增生性炎癥，其隨著病程的變化而加重，是臨床上難以解決的問題，也是今年來需要解決的重要問題[5-6]。慢性炎癥黏連的形成與多種因素有關，在正常生理狀態下，腹膜間皮細胞纖維蛋白原與蛋白溶解之間處于平衡狀態，若此關系遭到破壞，導致纖維蛋白的不斷增加，溶解障礙，進而形成纖維蛋白性黏連[7]。盆腔炎主要累及子宮、輸卵管、卵巢和周圍結締組織等，并可波及盆腹腔腹膜的炎癥的總稱，因此其治療準確性不高，其還會由性傳播疾病感染、產后、流產后以及婦科手術后細菌進入創面感染而得病，發病可局限于一個部位、幾個部位或整個盆腔，因此延誤治療有可能導致盆腔炎后遺癥的發生[8-9]。

連翹提取物含有連翹苷、連翹脂素、松脂素-β-D-葡萄糖苷、異連翹脂苷等化學成分，其中連翹質感A、蘆丁等被證實具有抗炎療效，屬于連翹提取物的抗炎有效成分[10]。連翹提取物收載與《藥典》中，其主要應用于臨床和食品保鮮中，并沒有明確的實驗證實連翹與抗炎作用一致。孫佳瑋等[11]研究表明，連翹根醇提物(FSEER)可以顯著提高小鼠機體的免疫功能，恢復由Cy誘導的小鼠免疫抑制狀態。在本文研究中顯示，連翹提取物組大鼠血漿免疫球蛋白含量均高于陽性對照組和模型組，此結果說明，連翹提取物還能夠有效改善大鼠機體的免疫功能，效果較好。有學者研究發現[12]，將連翹干燥果實的甲醇提取液、正己烷萃取甲醇提取液后所得到的正己烷可溶物和水可溶物分別進行真空冷凍干燥，通過小鼠毛細血管通透性、扭體反應、足趾腫脹和肉芽腫實驗表明，連翹甲醇提取物和正己烷可溶物具有消炎和鎮痛作用。在本文研究中，連翹提取物組大鼠子宮系數、紅細胞壓積、血漿粘度低于陽性對照組和模型組，此結果說明，連翹提取物能夠改善大鼠的子宮系數和紅細胞壓積，效果較為突出。武明紅等[13]研究表明，慢性盆腔炎患者采用物理療法與中藥連翹炎寧合劑聯合進行治療，可以減少藥物不良反應，迅速控制炎癥反應，縮短用藥時間，提高治療效果。在本研究中還發現，連翹提取物組大鼠右側子宮質量、左側子宮質量、腫脹度低于陽性對照組，此結果說明，連翹提取物能夠促進子宮恢復，使各方面恢復正常。與劉玉玲等[14]研究結果一致。

ICAM-1屬于免疫球蛋白家族的一員，其分布交廣，且在組織局部炎癥炎癥中發揮著重要作用。ICAM-1的生理作用不僅能夠調節細胞，還能夠參與細胞的信號轉導、細胞的生長移行、腫瘤轉移的浸潤等一系列的生理和病理發展的過程[15-16]。其還能夠介導白細胞的穩定、粘附和穿越內皮細胞，能夠通過白細胞的激活，而釋放出大量的炎性介質[17]。岳秀永等[9]研究表明，當歸四逆湯有治療慢性盆腔炎的作用，作用機理與改善慢性盆腔炎大鼠血流動力學狀況，調節粘連相關免疫分子ICAM-1、FGF-2的表達有關。在本研究中發現，連翹提取物組大鼠體內ICAM-1、TLR4、NF-kB均低于陽性對照組和模型組，此結果說明，連翹提取物能夠有效改善慢性盆腔炎大鼠的炎性因子水平，減緩病情進展。INF-γ具有抗增殖、免疫抑制及抗纖維化活性，能夠有效抑制轉化生長因子的合成以及成纖維細胞的增殖，是一種重要的抗纖維化因子[18]。當抗纖維化因子水平較高時，會直接阻止過度纖維化的過程，使組織結構損傷后能夠適當的修復，進而不會導致盆腔組織的過度黏連。在本文中，連翹提取物組大鼠體內INF-γ水平高于陽性對照組和模型組，此結果說明，連翹提取物能夠有效提高慢性盆腔炎大鼠體內INF-γ水平，能夠有效阻止纖維化的發展。與張志鵬等[19]研究結果一致。

4 結論

連翹提取物能夠有效緩解大鼠子宮黏連，改善體內炎癥反應及血流病變異常，其機制可能與子宮組織ICAM-1、INF-γ表達有關。