蒸汽溫潤法對化橘紅中柚皮苷含量的影響*

梁文琳，吳彩霞，林泳儀，朱海燕，楊文康，桂 林

(廣州大學生命科學學院，廣東 廣州 510006)

化橘紅為蕓香科植物化州柚Citrus grandis Tomentosa或柚Citrus grandis(L.)Osbeck的未成熟或近成熟的干燥外層果皮，其味苦、辛、溫、歸肺脾經，具有散寒、燥濕、利氣、消痰的功效，用于風寒咳嗽、喉癢痰多、食積傷酒、嘔惡痞悶等[1-2]。《本經逢原》：“橘紅專主肺寒咳嗽多痰，虛損方多用之，然久嗽氣泄，又非所宜”[3]。李時珍的《本草綱目》中有記載：“橘紅佳品，其瓤內有紅白之分，利氣、化痰、止咳功倍于它藥。其功愈陳愈良”[4]。柚皮苷的提取工藝主要為有機溶劑提取法、熱水提取法、堿性稀醇或堿性水提取法、系統溶劑提取法、超聲波提取法和微波提取法、超濾法等[5]。因為超聲提取法提取柚皮苷更加方便、快捷，故本次實驗采用超聲波提取法對化橘紅中的柚皮苷進行提取。本實驗先將化橘紅果實按照設置的軟化條件進行操作，先進行不同的單因素實驗，再進行兩個因素的搭配，分別探究一下不同條件會對柚皮苷的含量造成什么影響。

1 實 驗

1.1 材料與儀器

化橘紅果實，購買于廣東省化州市。

柚皮苷標準品(含量95%)；甲醇(分析純)；水(超純水)；石油醚(60～90 ℃)。

紫外分光光度計；電子分析天平；超聲波細胞破碎儀；恒溫水浴鍋；電熱鼓風干燥箱。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品溶液的制備

稱取待測樣品0.2 g ，加50 mL 石油醚浸泡于錐形瓶中，超聲波提取30 min ，放涼過濾，棄去石油醚，揮發風干，接著加入50 mL 甲醇，繼續超聲波提取30 min ，放涼過濾，棄去濾渣，剩余濾液加甲醇定容至 50 mL 容量瓶。

1.2.2 標準品溶液的配制

用電子分析天平精密稱取標準品 10 mg ，加適量甲醇溶解，定容至100 mL的容量瓶內，配置成0.10 mg/mL 的標準品溶液。

1.2.3 標準曲線的繪制

采用移液槍分別吸取 0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL于 10 mL容量瓶內，再依次加入 1 mL的10%的硝酸鋁溶液，最后加適量甲醇定容至刻度，混勻后靜置15分鐘，然后用紫外分光光度計在384 nm下測其吸光度。

以所測得的標準柚皮苷濃度為橫坐標，所測得的吸光值為縱坐標，建立線性回歸方程，并繪制標準曲線。

1.2.4 蒸汽溫潤法

(1)單因素實驗

分別對蒸汽溫潤的溫度和蒸汽溫潤的時間兩個因素設置不同的梯度實驗，各因素設置的梯度實驗。溫潤的溫度分別設置為45、50、55、60、65 ℃；溫潤的時間分別設置為5、6、7、8、9 h。

分別進行單因素實驗，得到最佳軟化條件。以上兩個因素的影響實驗均進行3次平行實驗，最終數據取其平均值。

(2)兩因素優化實驗

在單因素優化實驗的基礎上，對蒸汽溫潤的溫度和蒸汽溫潤的時間兩個因素來進行三水平的實驗，設置的實驗因素水平表見表1。

表1 蒸汽溫潤法的實驗因素水平表

1.2.5 方法學考察

(1)精密度實驗

取一定量的0.01 mg/mL的標準溶液，分別連續在紫外分光光度計下測定6次，記錄結果，計算RSD值并記錄實驗結果。

(2)穩定性實驗

取同一份樣品溶液，在紫外分光光度計下于15、30、45、60、75、90 min分別進行測定，計算RSD值并記錄實驗結果。

(3)加樣回收率實驗

取6份已知含量樣品，分別加入一定量的標準品，記錄實驗結果，并計算回收率和RSD值。

2 結果與討論

2.1 標準曲線的繪制

以吸光度384 nm為縱坐標、柚皮苷濃度為橫坐標,繪制的標準曲線見圖1，得到的線性回歸方程為y = 7.8929x+0.0028，相關系數r為0.9997，線性關系良好。

圖1 紫外分光光度384 nm下得到的柚皮苷標準曲線

2.2 蒸汽溫潤法

2.2.1 蒸汽溫潤法的溫潤溫度與柚皮苷含量的關系

如圖2所示，在相同的提取條件下，柚皮苷的含量隨著蒸汽溫潤的溫度的變化而變化。在45～60 ℃時，柚皮苷的含量隨著溫潤溫度的增加而增加，在60 ℃時達到最高；在60～65 ℃時，柚皮苷的含量隨著溫潤溫度的增加而開始下降。

圖2 蒸汽溫潤法的溫潤溫度對柚皮苷含量的影響

2.2.2 蒸汽溫潤法的溫潤溫度與柚皮苷含量的關系

如圖3所示，在相同的提取條件下，柚皮苷的含量隨著蒸汽溫潤的時間的變化而變化。在實驗設定時間5～9 h內，柚皮苷的含量一直隨著溫潤時間的增加而增加。

圖3 蒸汽溫潤法的溫潤時間對柚皮苷含量的影響

2.2.3 兩因素優化實驗

表2 蒸汽溫潤法的柚皮苷優化提取的兩因素優化實驗

表3 蒸汽溫潤法的兩因素方差分析結果表

F檢驗結果表明，溫度之間的F值大于F0.01，說明溫潤的溫度之間達到極顯著水平，說明不同的溫度處理之間對柚皮苷含量有極顯著的影響；而時間之間的F值小于F0.05，說明溫潤的時間之間對柚皮苷含量的影響未達到顯著水平。

2.3 方法學考察

2.3.1 精密度實驗結果

連續測定6次所得的OD值見表4，從實驗結果中，可以計算得到實驗中所測定的溶液的柚皮苷的吸光度(OD384)的RSD為0.192%；本次實驗結果表明，該實驗的精密度良好(n=6)。

表4 紫外分光光度計精密度實驗(n=6)

2.3.2 穩定性實驗結果

穩定性的實驗結果見表5，從實驗所得的OD值，我們通過計算該實驗的待測樣品溶液中柚皮苷的吸光度(384 nm)，得到其RSD為0.567%；實驗結果表明本次實驗的待測樣品溶液的穩定性良好(n=6)，樣品中的柚皮苷在90 min內是穩定的。

表5 穩定性實驗結果(n=6)

2.3.3 加樣回收率實驗結果

加樣回收重復測定6次，所得實驗結果見表6，所得的平均回收率為97.90%，RSD為1.02%(n=6)，故加樣回收效果良好。

表6 加樣回收率實驗結果(n=6)

3 結 論

本次實驗采用超聲波提取法對化橘紅中的柚皮苷進行提取，蒸汽溫潤法設置了不同的溫潤時間和溫潤溫度，結果顯示在相同的提取條件下，柚皮苷的含量隨著蒸汽溫潤時間的變化而變化；在實驗設定時間5～9 h內，柚皮苷的含量一直隨著溫潤時間的增加而增加的。而在相同的提取條件下，柚皮苷的含量隨著蒸汽溫潤的溫度的變化而變化的，在45～60 ℃時，柚皮苷的含量隨著溫潤溫度的增加而增加，在60 ℃時達到最高；在60～65 ℃時，柚皮苷的含量隨著溫潤溫度的增加而開始下降。各取兩個因素最好的三個水平進行搭配，發現不同的溫度之間對柚皮苷的含量是有顯著影響的，但溫潤時間的對化橘紅中柚皮苷含量的影響并不顯著。根據所得的結果，筆者認為蒸汽溫潤法的優化可以主要選擇在溫度上，本實驗所得到的最佳工藝是溫潤溫度60 ℃，蒸汽溫潤的時間9 h。