經顱磁刺激聯合骨髓間充質干細胞移植治療對脊髓損傷大鼠功能恢復的作用機制

脊髓損傷(spinal cord injury，SCI)是由脊柱外傷、脊髓腫瘤等原因造成的脊髓結構、功能的損害，主要表現為損傷平面以下的運動和感覺部分或完全消失，伴或者不伴二便功能障礙。其中外傷是最常見的發病原因。在國內經濟發達地區，例如北京、上海等地，SCI發病率約為百萬分之50～60，并且有逐年上升的趨勢

。脊髓損傷患者除了肢體功能障礙外還可能出現肺部感染、泌尿系感染和壓瘡等一系列并發癥

，影響患者生活質量的同時也給家庭和社會帶來了沉重的經濟負擔。如何改善患者的肢體功能，提高日常生活能力及生存質量，便成為醫學領域亟需解決的難題。

近年來,有研究者采用細胞移植的方法治療脊髓損傷動物,發現細胞移植法可能修復損傷脊髓結構的連續性及促進脊髓的神經功能恢復

。而骨髓間充質干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)因其來源豐富、易于提取及分離和純化、多向分化潛能

、低抗原性等特點

，使其成為研究熱點。利用BMSCs治療SCI已日漸成熟，國外已有多個研究團隊通過動物實驗證明，行BMSCs移植治療SCI后病灶囊腔縮小，感覺及運動功能均有較大的改善。但其移植后促進脊髓損傷功能恢復的機制尚無定論

。

磁刺激是使用隨時間變化的電流流入線圈，產生時變磁場，在組織內產生感應電流，從而達到興奮或抑制組織的效果。它作為一種無創的診斷及治療方法逐漸走進人們的視線。已發現磁刺激治療是促進脊髓損傷后功能恢復的有效方法

。先前有研究報道BMSCs和經顱磁刺激(Transcranial magnetic stimulation，TMS)對血管性癡呆模型大鼠有協同作用

。本文旨在觀察BMSCs移植聯合TMS治療對脊髓損傷大鼠功能恢復的影響，初步探討兩者聯合作用機制，為其臨床應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料 取8周齡的清潔級SD雌性大鼠60只，體質量180～250g，隨機分成5組，每組12只，即：假手術組，模型組， BMSCs組，TMS組，TMS+BMSCs組。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗分組 ①假手術組：SD大鼠按脊髓損傷制作模型方法咬除T10及部分T9、T11椎體椎板，暴露T10處脊髓背側硬脊膜，之后逐層縫合，不做打擊處理。術后7d再次暴露脊髓背側硬脊膜，注射DEME/F12培養基5μL。②模型組：大鼠SCI術后7d再次暴露T10處脊髓背側硬脊膜，于損傷處注射DEME/F12培養基5μL。③BMSCs組：大鼠SCI術后7d，用10μlHamilton微量注射器向損傷區的中心區注射5μL細胞懸液(細胞密度為1×10

/μL)，注射后留針2～3min。然后緩慢退出，術畢逐層縫合。④TMS組：大鼠SCI術后24h后給予磁刺激治療。磁刺激治療方案為：頻率10Hz，刺激強度70%靜息運動閾值，刺激5s，間歇10s，共計500脈沖，治療時間總長750s

。每天1次，每周5d，共4周。刺激部位：應用直徑6cm線圈，將線圈磁場中心貼近大鼠頭骨正中心。術后7d于脊髓損傷處注射DEME/F12培養基5μL，24 h后繼續磁刺激治療。⑤TMS+BMSCs組:大鼠術后24h后給予10Hz磁刺激治療，每天1次，每周5次，共4周，術后7d于損傷處注射5μL細胞懸液，24 h后繼續磁刺激治療。

2.4 BMSCs和TMS聯合治療SCI模型脊髓軸突再生微環境的影響

脊髓損傷的治療一直是一個世界性難題，局部神經組織破壞導致的神經再生受限和神經功能恢復障礙是治療脊髓損傷的主要障礙

。

1.3.2 免疫熒光NeuN分析 脊髓冰凍切片切成10μm厚的組織切片，用抗原復活劑處理，用PBS沖洗后用山羊血清(北京索拉寶科技有限公司)封閉15min。然后用神經元特異性核蛋白(neuron specific nuclear protein ，NeuN)多克隆抗體(1∶100；Proteintech)，在4℃過夜，然后用Cy3標記的山羊抗兔IgG抗體(1∶300，Beyotime)，室溫下保持60min。用DAPI染色后，組織切片用抗熒光猝滅劑封閉。每只大鼠隨機從縱切的脊髓組織的上、中、下端每個位置隨機抽取2張片子；染色后采用熒光顯微鏡在同一光強度(放大倍率x400；Olympus公司)下拍攝圖像(紅、綠激光強度100ms用于觀察靶蛋白；藍色激光10ms)，使用Image J進行光強度值的計算。以損傷區域為中心進行前、中、后取3張照片，平均每張片子上前、中、后數據后每只大鼠共有6個數據，每組共計收集36個數據。

1.2.4 脊髓組織灌流固定 取術后4周大鼠，2%戊巴比妥鈉腹腔麻醉(50 mg/Kg)行腹腔麻醉，將大鼠仰臥位剪開上腹部，并將膈肌沿兩側向上剪開，以“V”字形剪短肋骨，用止血鉗翻開，充分暴露心臟。4℃預冷PBS溶液用輸液袋裝滿，并連接20ml注射器針頭，剪開心外膜，將針頭經心尖刺入主動脈，剪開右心耳。每組中取6只應用4℃PBS 250ml進行心臟灌洗，觀察肝臟紅變白后，改用4%多聚甲醛，直到大鼠出現肢體震顫及僵硬，停止灌注。4℃冰箱固定5min后進行取材。剪取大鼠胸腰段脊髓，取以損傷處為中心長約2cm的脊髓，用PBS漂洗后，放入4%多聚甲醛中4℃固定24h。隨后采用15%、20%、30%蔗糖溶液4℃梯度沉糖脫水，OCT包埋后放置于冷凍冰箱用于后續免疫熒光染色。每組取另外6只大鼠直接用4℃PBS進行脊髓灌注，取胸腰段脊髓損傷處中心長約1cm的脊髓，-80℃超低溫冰箱中保存以進行免疫印跡分析。

畫有不落纖塵之明澈，是林容生藝術最大的特色。林容生的畫以“具體”為勝，山石坡峰，林木莊稼，房屋的窗欞階壁，溪流的委婉走向，在他的畫中都清晰如許。正是由于他的用筆用線十分豐富并有著極深的線造型功力，他才能如此悉心而從容地勾勒物象的形貌，使筆線在塑形的同時，盡情展現出變化的意趣， 透溢出使驅者的興味與情懷。另一方面，他長期研究墨與色的關系，將“隨類敷彩”上升為“以意敷彩”，控制墨與色的比度，把握色調的美感，讓人看到一種滲透了當代意識的“青綠山水”。面對他的山水，一股無有霧霾的清爽氣息拂面而來，總是讓人滿目明澈。

1.3 評定標準

2.3 BMSCs和TMS治療對SCI模型神經膠質纖維酸性蛋白的影響 Westernblot檢測 SCI 28d后各組大鼠脊髓損傷處GFAP蛋白表達：脊髓損傷后，GFAP表達明顯增高。與模型組比較，TMS、BMSCs組及TMS+BMSCs聯合治療組GFAP蛋白表達均明顯降低(

<0.01)，聯合組較BMSCs組及TMS組表達明顯降低(

<0.01)。見圖3。

1.2.3 BMSCs的分離提取

取4周齡體質量90～110g的GFP幼鼠，2%戊巴比妥鈉腹腔麻醉(50 mg/Kg)行腹腔麻醉，在無菌操作臺下分離取出幼鼠的股骨和脛骨，除去其上所附的軟組織及肌肉。無菌條件下剪斷股骨和脛骨骨干兩端，用5 ml注射器吸取DMEM/F12培養基，插入露出的骨髓腔反復沖洗、吹打，將沖洗出的細胞制成均勻的細胞懸液，取310g的細胞懸液離心后棄上清，加入3ml的紅細胞裂解液，吸管吹均靜置后再次離心，棄上清，用含10%胎牛血清的DMEM/F12培養基進行細胞培養。取形態較均一、生長速度較快的P3代骨髓間充質干細胞，流式細胞術檢測第3代細胞表面標記物CD11b、CD29、CD90和CD45，流式結果顯示，分離得到的BMSCs細胞表面標記物CD11b和CD45為陰性，CD29和CD90為陽性。提示BMSCs分離提取成功。

2.2 BMSCs與TMS治療對SCI模型損傷處神經元的影響 免疫熒光檢測SCI 28d后各組脊髓NeuN的表達，脊髓損傷組較假手術組NeuN表達明顯減少；同SCI組比較，BMSCs移植后，NeuN表達較模型組增加，但差異無統計學意義；TMS治療后，NeuN表達較模型組增加(

<0.05)；TMS和BMSCs聯合組與模型組及BMSCs組和TMS組比較，NeuN陽性表達明顯增加(

<0.01)。見圖1。 Westernblot檢測SCI 28d后各組大鼠脊髓損傷處NeuN的蛋白表達,與模型組比較，BMSCs、TMS、TMS+BMSCs聯合組較模型組NeuN表達顯著增加(

<0.01)；TMS+BMSCs聯合組較BMSCs組及TMS組NeuN的蛋白表達增加(

<0.01)。見圖2。

現代多自由度并聯式力控末端執行器屬于多輸入多輸出系統。它由多個支鏈組成，支鏈間存在耦合，且每個支鏈至少有1個恒力補償作動部件，工具頭的最終輸出力和姿態由各支鏈及其恒力補償作動部件決定。因此，應對它進行解耦控制技術研究，減小或消除各支鏈間的相互干擾，提高力控末端執行器的動靜態性能及其可靠性。

2 結果

2.1 BMSCs移植、TMS及TMS聯合BMSCs治療促進大鼠SCI后運動功能的恢復 所有大鼠術后即出現雙后肢癱瘓，24h后BBB評分為0分，提示SCI模型建立成功。術后14d，進行各治療組間BBB評分比較，BMSCs及TMS治療組較模型組評分有所提高，但差異無統計學意義，TMS聯合BMSCs組評分較模型組及BMSCs組和TMS組提高(

<0.01)，BMSCs組和TMS組組間評分比較差異無統計學意義。術后28d，BMSCs組、TMS組及TMS聯合BMSCs組評分均較模型組提高(

<0.01)，且TMS聯合BMSCs組較BMSCs組和TMS組評分提高(

<0.01)，BMSCs組和TMS組組間評分比較差異無統計學意義。見表1。

1.3.3 蛋白免疫印跡 GFAP、GAP-43、Nogo-A分析用全細胞裂解試劑盒(沈陽萬類生物有限公司)從大鼠脊髓組織中提取總蛋白，然后用BCA蛋白分析試劑盒(沈陽萬類生物有限公司)定量。用40%的聚丙烯酰胺凝膠(PVDF)將蛋白質轉移到微孔膜上(每孔用PVDF分離12%)。在室溫下用5%脫脂牛奶封閉1h后，將細胞膜與以下主要抗體在4℃下培養過夜：抗膠質纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein ，GFAP)兔多克隆抗體(1∶500；沈陽萬類生物有限公司)；抗生長相關蛋白43(Growth associated protein 43，GAP-43)兔單克隆抗體(1∶10000；Abcam)；抗神經生長抑制因子A(Neurite outgrowth inhibitor -A ，Nogo-A)兔多克隆抗體(1∶1500；novusbio)與β-肌動蛋白兔多克隆抗體(1∶1000；沈陽萬類生物有限公司)。然后用TBS-T緩沖液沖洗膜，并與HRP結合的羊抗兔IgG(1∶5000)或山羊抗兔IgG(1∶5000)抗體(沈陽萬類生物有限公司)在37℃下孵育45min。使用ECL發光試劑(沈陽萬類生物有限公司)觀察蛋白質，并使用Gel Pro分析儀4.0版(媒體控制論公司)對條帶的光密度值進行量化。

1.3.1 大鼠雙后肢的運動功能觀察 按運動功能評分(Basso Beattie Bresnahan，BBB)評定細則，評價所有實驗大鼠的后肢關節運動、步行能力、四肢的協調性及穩定性。分別在術前、術后1d、14d、28d進行評價。評定時，將大鼠置于直徑100cm、高30cm的透明空心圓柱體內，雙人盲法觀察并進行大鼠后肢的行走和肢體活動評定。BBB評分完全癱瘓的大鼠為0分，正常大鼠21分，SCI大鼠的功能情況介于兩者之間，每只動物觀察4min。

學前教育專業學生今后的教學對象主要是學齡前的兒童，在學前鋼琴基礎、幼兒歌曲彈唱與律動、兒歌即興伴奏等課程中加入一定比例的畬族童謠的歌曲，不僅繼承了傳統畬族音樂，同時隨著畢業生的就業，還可無形中在學齡前的孩子們心中埋下傳播寧德特有的畬族傳統民歌的種子。

按照黨中央、國務院決策部署，我國自2019年1月1日起，調整跨境電商零售進口稅收政策，提高享受稅收優惠政策的交易限制，并且擴大商品清單范圍。稅收政策調整包括：將年度交易限值由每人每年20000元調整至26000元，今后隨著居民收入的提高，相機調增；將單次交易限值由每人每次2000元調整至5000元，并明確已經購買的跨境電商零售進口商品不得進入國內市場再次銷售。

因人員流動較慢，上升渠道狹窄等原因，鄉鎮財政人員存在整體水平普遍不高、年齡偏大、學歷偏低、素質較弱的問題。許多新參加工作的大學生更傾向于在鄉鎮組織辦等工作出彩多的部門工作，致使專業人才難以補充到鄉鎮財所隊伍，出現人才斷檔。

在購買者表現出自我感知時，購買者會轉變為自我感知的心理近距離中。在對商品進行促銷時，價格促銷給予購買者感知性利潤，能夠立即出現自我感知。而贈送式促銷，通過贈品的方式使得消費者獲得實際可感的實惠，在心理近距離背景下，其購買力也能產生良好的作用。

2.4.1 Westernblot檢測SCI 28d后各組大鼠脊髓損傷處GAP-43蛋白表達 與模型組比較，BMSCs、TMS組及TMS+BMSCs組GAP-43蛋白表達增加(

<0.01)，其中TMS+BMSCs組較BMSCs組GAP-43蛋白表達增加(

<0.01)，TMS+BMSCs組較TMS組比較有所增加，差異無統計學意義。見圖4。

2.4.2 Westernblot檢測SCI 4周后各組大鼠脊髓損傷處Nogo-A蛋白表達 脊髓損傷后Nogo-A表達明顯增高。與模型組比較，BMSCs組、TMS組及TMS+BMSCs組Nogo-A蛋白表達明顯降低(

<0.01)，聯合組較單一治療組Nogo-A蛋白表達降低(

<0.01)。見圖5。

本文提出了一種基于改進的OCS調制方式，利用UFBG-AOTF光學生成多倍頻可調諧毫米波的方法.在調制指數m=2.5π的條件下，最高倍頻因子可達22.該方案通過控制UFBG-AOTF的聲波頻率實現FMF的線性調諧，僅使用一個DD-MZM，靈活、簡單且成本較低，同時也降低了對振蕩器及調制器的頻率要求.此外，提高DD-MZM的調制系數能夠實現更高倍頻因子毫米波信號的產生.同時，對倍頻因子為22時系統下行鏈路傳輸性能的分析表明，在只將基帶數據信號調制到其中一個邊帶上的OCS改進方案中，信號可以進行長距離且性能更穩定的傳輸，有效避免了色散所導致的碼元時移效應.

3 討論

1.2.2 SCI模型制作 實驗大鼠用2%戊巴比妥鈉腹腔麻醉(50mg/Kg)進行腹腔麻醉，大鼠俯臥于操作臺，背部剃毛備皮，常規皮膚消毒，以T10棘突為中心作長約3cm的切口，剝離周圍軟組織及椎旁肌肉，顯露并用血管鉗咬除T10及部分上、下椎體的棘突和兩側椎板，暴露脊髓背側硬脊膜。采用Allen’s法

，制備大鼠T10脊髓打擊傷模型。將大鼠固定在致傷裝置底座上，調整沖擊棒套管下端使其弧面緊貼脊髓背側硬脊膜，之后用10g沖擊棒自10 cm高處自由下落擊打脊髓，造成急性脊髓損傷模型，沖擊棒直徑2mm，致傷能量為100 gcf。打擊后大鼠暴露硬脊膜處可見血腫，硬脊膜完整呈紫紅色，膨隆，大鼠若出現短暫的雙后肢痙攣及擺尾動作，則標志造模成功。在脊髓損傷正上方留置硅膠薄膜，方便二次注射時找出損傷部位。切口處用生理鹽水沖洗，并滴加小劑量青霉素，逐層縫合肌肉、軟組織。術后直至大鼠麻醉蘇醒時注意保溫，術后每日行青霉素腹腔注射，連續3日。每日輔助排尿2次，直至排尿反射建立。

早在20世紀初，即有動物實驗研究證實，BMSCs具有促進神經功能再生的潛能，與BMSCs共培養，促進了神經元細胞的分化，顯著提高了脊髓損傷大鼠的功能恢復

。趙文濤等人對國內外領域相關發表文章進行了一項系統評價及Meta分析，其中共納入6個隨機對照試驗，252名患者

，通過分析指出：間充質干細胞能提高脊髓損傷患者的ASIA觸覺及日常生活能力評分及Frankel損傷分級；但在ASIA運動評分和膀胱殘余尿量方面效果不顯著。說明間充質干細胞移植治療脊髓損傷有一定療效。

雖然BMSCs對脊髓損傷治療有著一定的效果，但其治療機制至今仍然沒有定論。目前認為BMSCs治療脊髓損傷的機制主要有：①有研究認為，在一定條件下，BMSCs可以被誘導分化為神經元樣細胞和神經膠質細胞

，遷移至損傷部位，填充脊髓損傷后形成的囊腔，縮小囊腔范圍。②BMSCs通過分泌神經生長相關因子，如：神經生長因子、腦源性神經營養因子等，促進神經功能的恢復

，對突觸的傳遞及可塑性亦發揮重要的作用

。③BMSCs可以通過抑制不利于再生的膠質瘢痕形成，促進軸突再生。在亞急性期和慢性期和下調瘢痕組織區域軸突生長抑制因子Nogo-A的釋放。同時，以旁分泌形式釋放的神經營養因子亦為軸突再生創造了良好的微環境。

經顱磁刺激自1985年發現以來，已被廣泛應用于治療多種神經退行性疾病。例如，重復性經顱磁刺激通過激活β-catenin促進Alzheimer病大鼠的認知功能和神經元存活

。由經顱磁刺激產生的磁場，通過延長神經元的壽命、增加神經元的數量改善了帕金森病大鼠的認知功能

。磁刺激已被發現可作為促進脊髓損傷后功能恢復的有效方法，對脊髓損傷后的運動、疼痛、痙攣、二便功能障礙等均有不同的治療作用。磁刺激的治療機制與其抑制神經元的過度興奮、降低神經炎性反應、改變血腦屏障通透性、促進神經元存活有關。有研究顯示，皮層抑制功能降低與脊髓損傷后自然恢復相關，磁刺激能夠通過調節皮質束的功能促進脊髓損傷后的功能恢復。

由于TMS和BMSCs都有改善脊髓損傷后功能障礙的作用，BMSCs與TMS聯合治療對脊髓損傷大鼠的神經損傷是否有更好的修復作用值得探討。以往的研究表明BMSCs與TMS聯合治療對血管性癡呆大鼠有協同作用，BMSCs+TMS聯合治療后VD大鼠學習記憶能力的恢復較單純TMS治療更為顯著，提示BMSCs+TMS聯合應用治療神經系統疾病更為有效

。本實驗結果顯示，BMSCs+TMS聯合治療較單一治療組顯著提高了SCI大鼠BBB評分，同時脊髓損傷處NeuN陽性細胞數增加，聯合治療效果更為顯著，提示TMS可能通過促進BMSCs分泌神經生長因子及改善局部微環境促進脊髓損傷后大鼠運動功能恢復，與以前的研究結果一致。

SCI損傷后影響功能恢復的因素主要包括繼發性損傷；炎性因子的分泌；微環境的變化；膠質瘢痕的形成等。中樞神經系統可塑性理論不同于傳統的中樞神經損傷不可逆的觀點，認為脊髓損傷后軸突的生長對神經再生及功能恢復至關重要。損傷處的軸突可通過殘端出芽的形式再生，或通過殘留軸突側支出芽的形式再生，并延伸至到相應的靶細胞以形成新的突觸聯系，并在一定程度上恢復對靶細胞的神經支配。同時，也可以在重塑代償機制發揮作用，例如上調神經遞質分泌，改善軸突周圍的生長環境等

。但是成年哺乳動物中樞神經系統(central nervous system，CNS)再生能力極其微弱，這除了因為CNS神經元自身的再生能力下降以外，更重要的是CNS神經元內外環境受各種外源性抑制性因子的影響，其中髓鞘碎片分泌的髓鞘相關抑制因子Nogo-A具有限制軸突的延伸及中樞系統損傷后軸突再生的能力

。研究發現，SCI后Nogo-A的表達逐漸升高，導致神經再生困難

。與Nogo-A作用相反的是，生長相關蛋白43(GAP-43)在SCI后可以通過加速生長錐基底部細胞膜的擴張而促進軸突再生。GAP-43是一種神經組織特異性磷酸蛋白，廣泛存在于神經組織中,尤其是在生長、分化和再生的軸突末端以及突觸前膜。因為GAP-43在神經元生長錐中特異表達，在突起生長和突觸形成過程中表達上調，使其成為神經再生的理想標志物

。而膠質瘢痕的主要成分GFAP則通過抑制軸突再生來阻止神經元再生，脊髓損傷的嚙齒動物中GFAP表達升高

。

本實驗結果顯示：①脊髓損傷后GFAP表達顯著上調，BMSCs及TMS治療后GFAP陽性細胞數有所減少，但聯合治療組陽性細胞數減少最為顯著，且較單一治療組陽性細胞數亦有減少。②脊髓損傷后GAP-43的表達顯著降低，BMSCs及TMS治療組可見GAP-43上調，而TMS聯合BMSCs組GAP-43上調最為顯著，且上調效果優于BMSCs組。③脊髓損傷后Nogo-A的表達顯著增加，BMSCs及TMS治療組可見Nogo-A下調，但對比模型組差異無統計學意義，而TMS聯合BMSCs組Nogo-A下調最為顯著，差異有統計學意義。

1.3.1 小鼠LLC細胞培養及肺癌移植瘤模型建立 收集對數生長期LLC細胞，制成1×106個/mL的單細胞懸液；0.2 mL/只，皮下注射入30只C57/BL6小鼠左側腋下，觀察、記錄LLC小鼠生長及成瘤情況。

本研究通過應用BMSCs、TMS及TMS+BMSCs聯合治療SCI大鼠，觀察發現聯合治療組SCI大鼠BBB評分顯著高于單一治療組，即聯合治療組大鼠運動功能恢復優于單一治療組，可能與TMS促進BMSCs分泌GAP-43，抑制GFAP及Nogo-A的分泌，從而改善了脊髓損傷后局部的微環境，促進了軸突的再生相關。聯合治療組神經元較單純治療組增多，是否因TMS促進了BMSCs向神經元的分化，或因局部微環境改善促進了神經元的存活，仍需進一步實驗以證實。

[1] National Spinal Cord Injury Statistical Center．Spinal cord injury(SCI)：facts and figures at a glance[R/OL]．2017,1-2．https://www.nscisc.uab.edu/reports.aspx.

[2] Eckert MJ, Martin MJ. Trauma: spinal cord injury[J]. Surg Clin North Am, 2017, 97(5): 1031-1045.

[3] Lee BB, Cripps RA, Fitzharris M, et al. The global map for traumatic spinal cord injury epidemiology: update 2011, global incidence rate[J]. Spinal Cord, 2014, 52(2): 110-116.

[4] Garbossa D, Fontanella M, Fronda C, et al. New strategies for repairing the injured spinal cord: the role of stem cells[J]. Neurol Res, 2006, 28(5):500-504.

[5] Okano H, Okada S, Nakamura M, et al. Neural stem cells and regeneration of injure sPinal cord[J]. Kidney Int, 2005, 68(5):1927-1931.

[6] Xiang SY, Dusaban SS, Brown JH. Lysophospholipid receptor activation of RhoA and lipid signaling pathways[J]. Biochim Biophys Acta, 2013, 1831(1):213-222.

[7] Carrade DD, Affolter VK, Outerbridge CA, et al. Intradermal injections of equine allogeneic umbilical cord-derived mesenchymal stem cells are well tolerated and do not elicit immediate or delayed hypersensitivity reactions[J]. Cytotherapy, 2011, 13(10):1180-1192.

[8] Courtney p, Samdani AF, Betz RR, et al. Grafting of human bone marrow stromal cells into spinal cord injury: a comparison of delivery methods[J]. Spine, 2009, 34(4):328-334.

[9] Boido M, Garbossa D, Fontanella M, et al. Mesenchymal stem cell transplantation reduces glial cyst and improves functional outcome after spinal cord compression[J]. World Neurosurg, 2014, 81(1):183-190.

[10]孫劍淵,顧琦,吳勤峰,等.重復經顱磁刺激對不完全性脊髓損傷患者的臨床療效觀察[J].中國康復,2019,34(6):303-306.

[11]Wang F,Zhang C, Hou S,et al. Synergistic effects of mesenchymal stem cell transplantation and repetitive transcranial magnetic stimulation on promoting autophagy and synaptic plasticity in vascular dementia[J]. Gerontol A Biol Sci Med Sci,2019,8(16): 1341-1350.

[12]向艷平,唐峰，黃曉琳等.不同頻率重復經顱磁刺激對脊髓損傷大鼠運動功能的影響[J].中國康復醫學雜志,2013,28(1):3-13.

[13]Allen AR.Srugery of experimental lesion of spinal cord equivalentto crush injury of fracture dislocation of spinal column[J].Apreliminary report,1911,57(1):878-880.

[14]Yin YM,Lu Y,Zhang LX,et al.Bone marrow stromal cells transplantation combined with Ultrashortwave therapy promotes functional recovery on spinal cord injury in rats[J].Synapse,2015 Mar;69(3):139-47.

[15]Chow DS, Teng Y, Toups EG, et al. pharmacology of riluzole in acute spinal cord injury[J]. J Neurosurg Spine, 2012, 17(1): 129-140.

[16]Wu S, Suzuki Y, Ejiri Y, et al. Bone marrow stromal cells enhance differentiation of coculturedneurosphere cells and promote regeneration of injured spinal cord[J]. J Neurosci Res, 2003, 72(3): 343-351.

[17]趙文濤,李盼盼,張海峰,等.間充質干細胞移植治療脊髓損傷：系統評價及Meta分析[J].中國組織工程研究,2015, 19,(36):5865-5871.

[18]Zeng X, Qiu XC, Ma YH, et a1．Integration of donor mesenchymal stem cell derived neuron like cells into host neural network after rat spinal cord transection[J]. Biomaterials, 2015, 53(2)：184-201．

[19]Zeng R, Wang LW, Hu ZB, et a1. Differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells into neuron-like cells in vitro[J]. Spine, 2011, 36(13):997-1005．

[20]Hawryluk GW, Mothe A, Wang J, et a1．An in vivo characterization of trophic factor production following neural precursor cell or bone marrow stromal cell transplantation for spinal cord injury[J]. Stem Cells Dev, 2012, 21(12):2222-2238．

[21]Waterhouse EG, Xu B. New insights into the role of brain-derived neurotrophic factor in synaptic plasticity[J]. Mol. Cell. Neurosci, 2009, 42(2): 81-89.

[22]Chen X, Chen S, Liang W, et al. Administration of repetitive transcranial magnetic stimulation attenuates A(1-42)-induced Alzheimer's disease in mice by activating beta-catenin signaling[J]. Biomed Res Int, 2019, 20(9): 1431760.

[23]Ba F, Zhou Y, Zhou J, et al. Repetitive transcranial magnetic stimulation protects mice against 6-OHDA-induced parkinson's disease symptoms by regulating brain amyloid beta1-42 level[J]. Mol Cell Biochem, 2019, 458(1):71-78.

[24]Filli L, Schwab ME. Structural and functional reorganization of propriospinal connections promotes functional recovery after spinal cord injury[J]. Neural Regen Res, 2015, 10(4): 509-513.

[25]葉超群,孫天勝,劉智.脊髓損傷后軸突再生的研究進展[J].中國脊柱脊髓雜志,2007,17(9): 715-718.

[26]黃海珍,桑鋒,王玉霞,等.Nogo在中樞神經損傷再生中的作用機制[J].生物學雜志,2009,26(4):61-64.

[27]岳巖.小鼠脊髓損傷后Nogo-A的免疫組織化學研究[J].局解手術學雜志,2011,20(3):237-241.

[28]Wang F, Zhang C, Hou S, et al. Synergistic effects of mesenchymal stem cell transplantation and repetitive transcranial magnetic stimulation on promoting autophagy and synaptic plasticity in vascular dementia[J]. J Gerontol A Biol Sci Med Sci, 2018,74(9):1341-1350.

[29]Liu F, Liao F, Li W, et al. progesterone alters Nogo-A, GFAP and GAP-43 expression in a rat model of traumatic brain injury[J]. Mol Med Rep, 2014, 9(4): 1225-1231.