水晶冰菜總黃酮提取工藝優(yōu)化、結構表征及組成成分分析

孫美玲，邱學志，周 婧，陳湘寧,

（1.北京農(nóng)學院食品科學與工程學院， 農(nóng)產(chǎn)品有害微生物及農(nóng)殘安全檢測與控制北京市重點實驗室, 北京 102206；2.北京裕農(nóng)優(yōu)質(zhì)農(nóng)產(chǎn)品有限公司，北京 101400）

水晶冰菜（Mesembryanthemum crystallinum）又名冰葉日中花、冰花、冰草等，是番杏科（Aizoaceae）日中花屬（Mesembryanthemum）中一種一年生或二年生草本植物[1]。水晶冰菜原產(chǎn)自南非納米比亞沙漠等干旱地區(qū)，近年來才逐漸引入中國，成為了一款倍受消費者青睞的新型綠色蔬菜[2]。其生食口感清脆，伴有淡淡的咸味兒，不僅含有蛋白質(zhì)、脂肪、膳食纖維、氨基酸等基本成分，而且還含有一些功能性的營養(yǎng)物質(zhì)，其中以黃酮類化合物含量最甚，占比約為2.45%[3-4]；黃酮類化合物具有抗腫瘤、抗氧化、提高人體免疫力等多重功效，如果通過現(xiàn)代技術手段提取水晶冰菜中的總黃酮并對其成分深入分析，可以針對性地應用于相關保健產(chǎn)品的開發(fā)，提高經(jīng)濟效益。

目前實驗室常見的葉菜黃酮類化合物的提取方法主要有熱水提取法、溶劑提取法、超聲輔助法、酶輔助法等，其中超聲輔助提取是一種相對現(xiàn)代的黃酮類化合物提取法，利用超聲波產(chǎn)生的空化、振動和粉碎等綜合效應，破壞植物細胞壁，增加通透性，不但加速黃酮類化合物的擴散速度，而且增加了提取溶劑的穿透能力，該方法因操作簡便、節(jié)約時間成本且提取效率高而成為實驗室常用的一種類黃酮提取方法[5-6]。由于植物次生代謝物的豐度較低且具有化學多樣性，因此需要靈敏度高且選擇性的分析方法進行結構表征和組分分析[7]，而黃酮類化合物獨有的的芳香環(huán)和酚羥基使它們易于用紫外可見光譜（ultraviolet-visible spectrum，UV-Vis） 、傅立葉紅外光譜（Fourier transform infrared spectroscopy，F(xiàn)T-IR） 表征結構，同時用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（Ultra performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS）對植物類黃酮的定性定量分析的應用在近年中越來越頻繁。但目前國內(nèi)外對于水晶冰菜的研究相對較少，且多集中在種植栽培[8]和景天酸代謝等方面[9]，對其總黃酮的提取純化工藝、結構表征和組成成分尚未報導。本文以水晶冰菜為原料，通過正交試驗優(yōu)化超聲提取條件，采用D101大孔樹脂純化水晶冰菜總黃酮，通過UV-Vis、FT-IR對純化前后總黃酮的結構表征，最后采用UPLC-MS/MS分析純化物組成成分，以期為水晶冰菜功能性的利用和相關保健食品的開發(fā)提供相應的理論支持。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

水晶冰菜 北京新發(fā)地農(nóng)產(chǎn)品市場；蘆丁標準品、大孔樹脂 均購自北京中科生邦有限公司；亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、乙醇（99.7%）、乙酸（≥99.5%）、乙酸乙酯（≥99.5%）、丙酮（≥99.5%）、石油醚（≥99.5%）、溴化鉀 均為分析純，購自北京暢華志誠科技有限公司。

XMTD-8222恒溫鼓風干燥箱 北京博宇寶威實驗設備公司；FT135中草藥粉碎機 天津市泰斯特儀器有限公司；AL204電子天平 梅特勒-托利多儀器有限公司；KQ-500DE超聲波清洗機 昆山市超聲儀器有限公司；L530臺式離心機 湖南赫西儀器裝備有限公司；RE-2000B旋轉蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；BK-FD10T臺式冷凍干燥機 濟南歐萊博科學儀器有限公司；UV795CRT紫外可見分光光度計 上海佑科儀器儀表有限公司；Nicolet iS5傅立葉變換紅外光譜儀 賽默飛世爾科技公司；XCIEX AD超高效液相、QTrap 6500高靈敏度質(zhì)譜AB Sciex。

1.2 實驗方法

1.2.1 水晶冰菜總黃酮的提取 參考劉亞倩等[10]的方法稍作修改，將新鮮水晶冰菜清洗干凈，在60 ℃下于真空干燥箱內(nèi)干燥48 h，用中草藥粉碎機碾碎，過40目篩得水晶冰菜干粉末；按一定的料液比和浸提液濃度，于一定的溫度下采用一定的功率超聲處理一定的時間，10000 r/min下離心10 min，殘渣重復提取2次，合并上清液至旋轉蒸發(fā)儀內(nèi)蒸至無醇味，低溫冷凍干燥24 h，得水晶冰菜總黃酮粗提物（以下簡稱粗提物）。

1.2.2 浸提液的篩選 固定料液比1:25 mg/mL，超聲溫度60 ℃，時間60 min，功率250 W，選取乙醇、乙酸、乙酸乙酯、丙酮和石油醚五種浸提液對冰菜總黃酮進行提取，測定含量并計算得率，篩選出最優(yōu)浸提液。

1.2.3 單因素實驗

1.2.3.1 不同濃度對冰菜總黃酮得率的影響 根據(jù)上述實驗結果，固定料液比1:25 mg/mL，超聲溫度60 ℃，時間60 min，功率250 W，選擇體積分數(shù)40%、50%、60%、70%、80%乙醇作為浸提液對冰菜總黃酮進行提取，測定含量并計算得率。

1.2.3.2 不同料液比對冰菜總黃酮得率的影響 固定乙醇體積分數(shù)60%，超聲溫度60 ℃，時間60 min，功率250 W，在料液比分別為1:10、1:15、1:20、1:25、1:30 mg/mL時對冰菜總黃酮進行提取，測定含量并計算得率。

1.2.3.3 不同超聲時間對冰菜總黃酮得率的影響固定料液比1:25 mg/mL，乙醇體積分數(shù)60%，超聲溫度60 ℃，功率250 W，在超聲時間分別為30、60、90、120、150 min時對冰菜總黃酮進行提取，測定含量并計算得率。

1.2.3.4 不同超聲溫度對冰菜總黃酮得率的影響固定料液比1:25 mg/mL，乙醇體積分數(shù)60%，超聲時間60 min，功率250 W，在超聲溫度分別為30、45、60、75、90 ℃時對冰菜總黃酮進行提取，測定含量并計算得率。

1.2.3.5 不同超聲功率對冰菜總黃酮得率的影響固定料液比1:25 mg/mL，乙醇體積分數(shù)60%，超聲溫度60 ℃，時間60 min，在超聲功率分別為150、200、250、300、350 W時對冰菜總黃酮進行提取，測定含量并計算得率。

1.2.4 正交試驗 根據(jù)單因素實驗結果，確定體積分數(shù)為60%的乙醇為浸提液，以料液比、超聲時間、溫度、功率為因素，以總黃酮得率為指標，設計四因素三水平的正交試驗，對提取工藝進行優(yōu)化，因素水平表如表1所示。

表1 正交試驗因素和水平設計Table 1 Factor and levels of orthogonal experiment

1.2.5 水晶冰菜總黃酮含量和得率的測定 參考荊常亮[11]的方法稍作修改，采用NaNO2-Al（NO3）3比色法，得到蘆丁標準曲線的線性回歸方程為：y=0.1021x+0.0002，R2=0.9998。參考荊常亮[11]的方法稍作修改，測定水晶冰菜總黃酮質(zhì)量濃度，計算水晶冰菜總黃酮的含量和得率：

式中：C為冰菜總黃酮質(zhì)量濃度，mg/mL；V為待測樣液體積，mL；N為原樣液稀釋倍數(shù)；M冰菜粉質(zhì)量，g；Y為總黃酮含量，mg/g；Q為總黃酮得率，%。

1.2.6 水晶冰菜總黃酮的純化 本課題組前期[12]采用D101大孔樹脂純化粗提物，通過靜態(tài)、動態(tài)吸附和解吸試驗得到最佳純化條件為：粗提物質(zhì)量濃度0.30 g/L，pH4，上樣流速60 mL/h，上樣體積56 mL，洗脫液為體積分數(shù)80%乙醇溶液，pH6，洗脫流速60 mL/h，體積128 mL，在該條件處理下收集全部洗脫液轉至旋轉蒸發(fā)儀內(nèi)蒸至無醇味，低溫冷凍干燥24 h，得水晶冰菜總黃酮純化物（以下簡稱純化物）。

1.2.7 水晶冰菜總黃酮的結構表征

1.2.7.1 紫外可見光譜掃描 參考李俠等[13]的方法稍作修改，將2 mg的蘆丁標準品、粗提物、純化物分別溶于體積分數(shù)80%乙醇中，并定容至10 mL，稀釋5倍后，在200～800 nm的波長下，用紫外分光光度計進行紫外可見光譜掃描。

1.2.7.2 傅立葉紅外光譜掃描 將蘆丁標準品、粗提物、純化物分別與干燥的KBr粉末以1:100的質(zhì)量比混合并研細均勻，置于磨具內(nèi)，在壓片機上制成透明薄片。以空白KBr片作背景，利用傅立葉變換紅外光譜儀掃描，波數(shù)范圍4000～400 cm-1，掃描次數(shù)32，分辨率4 cm-1。

1.2.8 水晶冰菜總黃酮純化物的組成成分測定 采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）檢測純化物中黃酮類化合物組成成分和相對含量。

樣品溶液制備：取純化物粉末100 mg溶于50 mL體積分數(shù)80%的乙醇中，超聲處理 30 min，放至室溫。搖勻后取適量在4 ℃，12000 r/min條件下離心20 min，上清液上機檢測。

色譜條件：色譜柱為UPLC BEH C18色譜柱（1.7 μm，2.1×150 mm）；流動相：A相0.1%甲酸水溶液+B相乙腈；柱溫箱溫度設為40 ℃，自動進樣器溫度設為8 ℃，進樣體積為2 μL。色譜梯度如表2所示。

表2 液相色譜流動相條件Table 2 Mobile phase conditions of liquid chromatography

質(zhì)譜條件：AB Sciex QTrap 6500+質(zhì)譜儀器參數(shù)設置：數(shù)據(jù)采集時，以多反應監(jiān)測（MRM）模式進行質(zhì)譜分析。離子源參數(shù)如下：IonSpray Voltage：+5000/-4500 V，Curtain Gas：35 psi，Temperature: 500 ℃，Ion Source Gas 1:55 psi，Ion Source Gas 2:60 psi。

1.3 數(shù)據(jù)處理

每組試驗重復3次，試驗結果以均值±標準差表示，用SPSS Statistics 21和Origin8.5軟件進行試驗數(shù)據(jù)分析和繪圖；對質(zhì)譜數(shù)據(jù)，使用Skyline軟件對MRM數(shù)據(jù)進行處理。

2 結果與分析

2.1 不同浸提液對水晶冰菜總黃酮得率的對比分析

由圖1可以看出，無水乙醇對水晶冰菜總黃酮的得率最高，為1.86%，丙酮、乙酸、乙酸乙酯次之，石油醚的提取效果最差，所以在后續(xù)單因素試驗中選擇無水乙醇作為浸提液。陳代秀等[14]也曾做出了類似的報道，認為無水乙醇對刺梨中黃酮類活性物質(zhì)的浸提效果最好，約為次級浸提液乙酸的3.33倍。

圖1 不同浸提液種類對水晶冰菜總黃酮得率的影響Fig.1 Different extracting solution on extraction rate of total flavonoids

2.2 單因素對水晶冰菜總黃酮得率的影響

2.2.1 不同乙醇體積分數(shù)對水晶冰菜總黃酮得率的影響 從圖2A可以看出，當乙醇體積分數(shù)在40～70%范圍內(nèi)，水晶冰菜總黃酮得率隨體積分數(shù)的增加而提高，且在70%時達到峰值2.441%，此后隨乙醇體積分數(shù)的增加，得率反而呈下降趨勢。可以利用相似相溶原理進行解釋，黃酮作為一種極性化合物，可以在一定的體積分數(shù)范圍內(nèi)和乙醇有效結合，但是當體積分數(shù)過高時，結合能力下降[15]。因此，乙醇體積分數(shù)確定為70%。

2.2.2 不同料液比對水晶冰菜總黃酮得率的影響由圖2B可知，水晶冰菜總黃酮得率隨料液比增加而提高，在1:25時得率最高，為2.589%，此后料液比繼續(xù)增大，得率緩慢下降。該結果與千春錄等[16]對水芹黃酮提取的結果一致，原因可能是當料液比小時，溶劑與物料接觸面積小，造成提取不完全；而當物料比增大時，乙醇和冰菜粉的接觸面積、物料內(nèi)外濃度差增大，從而得率提高；但當物料比超過一定的限度時，會導致物料中其他醇溶性物質(zhì)溶出，降低得率。因此，液料比選擇為1:25 mg/mL。

2.2.3 不同超聲時間對水晶冰菜總黃酮得率的影響由圖2C可知，水晶冰菜總黃酮得率隨著超聲時間的增大而提高，且在30～60 min內(nèi)急劇增長，60～120 min內(nèi)緩慢增長，120 min時達到峰值2.170%，此后隨著超聲時間的延長，得率無明顯變化，說明在120 min時黃酮已經(jīng)基本溶出。因此，超聲時間選擇為120 min。

2.2.4 不同超聲溫度對水晶冰菜總黃酮得率的影響由圖2D可知，隨著超聲溫度的上升，水晶冰菜總黃酮得率先上升后下降，在60℃時的得率最高為2.296%，這與秦晶晶等[17]報道的不同提取溫度對柿葉黃酮提取工藝的影響結果一致，原因可能是在一定的溫度范圍內(nèi)，升溫會加快分子運動，有利于水晶冰菜黃酮在無水乙醇中溶解，但是當溫度過高時，會對黃酮結構造成破壞，降低得率。因此，超聲溫度選擇為60 ℃。

圖2 不同提取因素對水晶冰菜總黃酮得率的影響Fig.2 Different factors on extraction rate of total flavonoids

2.2.5 不同超聲功率對水晶冰菜總黃酮得率的影響由圖2E可知，水晶冰菜總黃酮的得率隨著超聲功率的增強先上升后下降，在250 W處的得率最高為2.032%。可能是由于超聲波的機械剪切力破壞了細胞結構，有利于黃酮類物質(zhì)的溶出，但超聲功率達到一定限值時，會破壞部分黃酮類物質(zhì)的結構，致使總黃酮得率緩慢下降[18]。由于200 W時總黃酮得率較低，因此選擇250～350 W進行后續(xù)試驗。

2.3 正交試驗結果

表3顯示正交試驗的極差R1＞R3＞R4＞R2，所以對水晶冰菜總黃酮得率影響最大的因素為料液比，其次是超聲溫度、功率和時間，該結果與吳迪等[19]對辣木葉總黃酮提取的研究結果一致。表4的方差分析結果表明料液比對得率的影響達到顯著水平（P＜0.05），與極差分析結果一致。由正交試驗得出水晶冰菜總黃酮的最佳提取組合為A2B2C1D1，即乙醇濃度為70%、料液比1:25 mg/mL、溫度45℃、功率250 W的條件下超聲120 min，對上述提取工藝進行驗證，獲得最大得率2.776%，說明由正交試驗得到的最佳工藝條件可利用性高。

表3 正交試驗結果Table 3 Results of orthogonal experiment

表4 正交試驗方差分析Table 4 Orthogonal test variance analysis

2.4 水晶冰菜總黃酮的結構表征結果

2.4.1 紫外可見光譜結果分析 黃酮類化合物（flavonoids）泛指兩個苯環(huán)通過三個碳原子通過相互連接形成的一系列化合物的統(tǒng)稱，即具有C6-C3-C6基本結構的一類化合物的統(tǒng)稱[20]。這種特殊的結構特點使大部分黃酮類化合物的紫外光譜在200～400 nm波長范圍內(nèi)由兩個主要的吸收峰組成，一個在220～280 nm范圍內(nèi)，稱為帶Ⅱ，可以認為是由A環(huán)的苯甲酰基體系的電子躍遷產(chǎn)生的吸收帶，而另一個在300～400 nm范圍內(nèi)，稱為帶Ⅰ，一般認為是由B環(huán)肉桂酰基體系的電子躍遷產(chǎn)生的吸收帶[21-22]。不同類型的黃酮類化合物，其帶Ⅰ和帶Ⅱ的峰形、峰位和吸收強度存在差異，因此可以通過紫外吸收光譜來判斷黃酮類化合物的類型[23]。由圖3可知，粗提物的吸收峰帶Ⅱ為267 nm，吸收峰帶Ⅰ為324 nm；純化物的吸收峰帶Ⅱ為278 nm，吸收峰帶Ⅰ為320 nm。其中267與278 nm處的吸收峰說明水晶冰菜總黃酮提取物中可能含有A環(huán)苯甲酰基體系，324與320 nm處的吸收峰說明其可能含有B環(huán)肉桂酰基體系。水晶冰菜總黃酮粗提物和純化物的吸收峰帶II的強度稍強于峰帶I，且峰帶I的峰型較平緩，可能的原因是A環(huán)的苯甲酰基體系上取代基的種類和位置較復雜，符合異黃酮的紫外吸收光譜特征[24]，而且通過對比發(fā)現(xiàn)純化物中黃酮含量明顯高于粗提物。兩種物質(zhì)在200～230 nm范圍內(nèi)吸收峰顯著說明其中可能含有糖類化合物[25]。以上分析只是對水晶冰菜總黃酮結構的初步表征，具體結論還需后續(xù)試驗進一步探究。

圖3 蘆丁標準品、水晶冰菜總黃酮粗提物和純化物的紫外可見光譜圖Fig.3 UV-Vis spectrogram of rutin, crude and purified flavonoids from Mesembryanthemum crystallinum

2.4.2 傅立葉紅外光譜結果分析 當測試樣品受到頻率連續(xù)變化的紅外線輻照時，其分子吸收了某些頻率的光波而獲得能量，隨后分子產(chǎn)生振動或進行由基態(tài)向激發(fā)態(tài)的能級躍遷，使被吸收波段的透射光強度減弱，該特點與分子中存在的官能團或分子骨架有關[26]。蘆丁標準品、水晶冰菜總黃酮粗提物和純化物的傅立葉紅外光譜圖如圖4所示，可以看出粗提物和純化物在4000～400 cm-1范圍內(nèi)存在多處峰值，說明其具備黃酮類化合物的特征官能團。

圖4 蘆丁標準品、水晶冰菜總黃酮粗提物和純化物的傅立葉紅外光譜圖Fig.4 FTIR spectrogram of rutin, crude and purified flavonoids from Mesembryanthemum crystallinum

在官能團區(qū)，蘆丁標準品在3380.80 cm-1處，粗提物在3380.53 cm-1處，純化物在3404.75 cm-1處都存有寬大的吸收峰，屬于羥基的特征吸收峰（3000～3750 cm-1），推測此處為分子間氫鍵O-H伸縮振動，說明了酚羥基或糖環(huán)上羥基的存在[27]；蘆丁標準品在2930.21 cm-1處，粗提物在2928.77 cm-1處，純化物在2929.34、2961.16 cm-1處存有吸收峰，這和C-H鍵吸收峰（2950～2850 cm-1）一致，故推測此處為亞甲基的C-H伸縮振動，與蘆丁標準品和粗提物相比，純化物峰強度明顯弱，可能是其飽和碳上的氫較少；蘆丁標準品在1655.73 cm-1處，粗提物在1653.86 cm-1處存在芳酮C=O伸縮振動峰，兩者位置、峰型接近[28]，但純化物在該位置沒有明顯的吸收峰，可能是含有該結構的物質(zhì)較少，經(jīng)過純化處理后損失嚴重；蘆丁標準品在1605.02、1498.96 cm-1處，粗提物在1518.01、1462.41 cm-1處存有苯環(huán)骨架振動吸收特征峰，而純化物僅在1596.99 cm-1處有一個吸收峰，但是峰寬；蘆丁標準品在1447.72、1360.07 cm-1處，粗提物在1385.34 cm-1處，純化物在1388.47 cm-1處有吸收峰，這符合O-H面內(nèi)彎曲振動吸收峰（1450～1300 cm-1）的波數(shù)范圍[29]。在指紋區(qū)，C-O的伸縮振動在1300～1060 cm-1波數(shù)范圍內(nèi)易識別，蘆丁標準品有4個吸收峰，粗提物有3個吸收峰，純化物僅在1078.14 cm-1處有一個強度較弱的吸收峰；蘆丁標準品在810.21 cm-1處，粗提物在817.86 cm-1處，純化物在825.80 cm-1處的吸收峰是O-H面外彎曲振動的結果[30]。蘆丁標準品、粗提物和純化物在800～532 cm-1波數(shù)范圍內(nèi)存在的不同程度的吸收峰是由于苯環(huán)上存在不同類型的取代基和取代位點[31]。

結合對官能團區(qū)和指紋區(qū)吸收峰的分析，可以看出純化物比粗提物的紅外光譜分辨率高，出峰位置和峰型更加明確，特征官能團更為突出，可以進一步說明純化物的黃酮含量與品質(zhì)較粗提物有了極大的提高。同時水晶冰菜總黃酮粗提物、純化物與蘆丁標準品的紅外光譜圖存在多處相似，可以推測其中一定含有黃酮醇，可能含有蘆丁單體，但具體的成分還需要進一步的研究。

2.4.3 水晶冰菜總黃酮純化物的組成成分分析 按照1.2.8的色譜和質(zhì)譜條件對水晶冰菜總黃酮純化物進行分析，UPLC在20 min內(nèi)的分離效果較好，并得到圖5B所示的總離子流圖，對比圖5A的混合標準品總離子流圖，可看出純化物在3.090、3.603、3.810、4.312、4.492、4.645、4.745、7.369、7.650、8.024、8.336、8.467、8.673、10.489和14.340 min時存在明顯的質(zhì)譜峰，通過MRM模式進行質(zhì)譜分析，基于鑒定母離子和子離子對，檢測特異性母離子，并選定相應的特異性子離子，去除其他子離子干擾，結合文獻[32-34]報道的黃酮類化合物信息和實驗室自建的黃酮標準品數(shù)據(jù)庫比對，確定了純化物中所含部分黃酮的具體信息，其組成成分和相對含量表如表5所示，從水晶冰菜總黃酮純化物中鑒定出30多種黃酮類化合物，其中以桔皮素的相對百分含量最多，為50.854%±0.089%，其次為川橙皮素、杜鵑素、原兒茶醛、地奧司明、柚皮苷查爾酮、甜橙黃酮、柚皮素、蘆丁，8種物質(zhì)占比分別為20.949%±0.115%、8.781%±0.072%、3.962%±0.107%、2.875%±0.079%、2.523%±0.054%、2.241%±0.056%、2.151%±0.066%、1.723%±0.052%。根據(jù)三碳鍵（C3）結構的氧化程度和B環(huán)的連接位置等特點，可以將鑒定出的物質(zhì)分為黃酮醇類、二氫黃酮類、黃酮類、黃烷醇、異黃酮和二氫查爾酮這6類，其中以黃酮類占比最大，為74.307%。該結果與紫外可見光譜和傅立葉紅外光譜掃描的結果基本一致，目前未見其他關于水晶冰菜總黃酮組成成分和相對含量的報道。

表5 水晶冰菜總黃酮純化物組成成分及相對百分含量Table 5 Components and relative contents of total flavonoids purified from Mesembryanthemum crystallinum

圖5 混合標準品、水晶冰菜總黃酮純化物的總離子流圖Fig.5 TIC chromatogram of mixed standard purified flavonoids from Mesembryanthemum crystallinum

3 討論與結論

本文通過超聲輔助法提取水晶冰菜總黃酮，最優(yōu)條件為：乙醇體積分數(shù)60%，料液比1:25 mg/mL，超聲溫度45 ℃，時間120 min，功率250 W，此條件下的實際得率可達2.776%，該結果優(yōu)于練冬梅等[4]的得率，可能是因為傳統(tǒng)提取方法耗時長，導致水晶冰菜中黃酮類化合物大量損失，同時雜質(zhì)含量高也會導致整體的得率降低。目前尚未發(fā)現(xiàn)對水晶冰菜其他提取方法和得率的報道，但是符群等[35]采用減壓-超聲輔助醇法提取薇菜黃酮，得率為1.189%，陳建福等[36]采用優(yōu)化超聲輔助提取芥菜總黃酮的條件，得到的得率為2.682%，兩者均低于本結果，可能是水晶冰菜作為一種新型綠色蔬菜，與常見的葉菜相比，水分更充足，活性成分更豐富且組織脆嫩，更有利于超聲波對組織細胞的破壞，加速黃酮成分的擴散。

采用D101大孔樹脂純化水晶冰菜總黃酮得到純化物，通過UV-Vis掃描發(fā)現(xiàn)水晶冰菜總黃酮純化物在278 nm和320 nm處有兩個明顯的吸收峰，通過與蘆丁標準品圖譜的接近程度和峰帶I、II的峰寬特征，可以初步推測其中可能含有黃酮、黃酮醇、異黃酮類化合物；通過FT-IR掃描也發(fā)現(xiàn)其含有O-H、C-H、C=O、C=C、酚羥基等多種特征官能團的振動吸收峰，符合黃酮類化合物的典型結構，從與蘆丁標準品吸收峰的接近程度推測其含有黃酮醇類化合物，可能含有蘆丁單體；UPLC-MS/MS的檢測表明，純化物中含有桔皮素、川橙皮素、杜鵑素、原兒茶醛、地奧司明、柚皮苷查爾酮、甜橙黃酮、柚皮素、蘆丁等30多種黃酮類化合物，其中桔皮素的相對百分含量最高，為50.854%±0.089%。從黃酮種類上看，純化物中共含有6種黃酮類化合物，其中以黃酮類占比最大，為74.307%，其次是黃酮醇、二氫黃酮、二氫查爾酮、異黃酮和黃烷醇類。本研究充分說明了水晶冰菜中黃酮種類和含量豐富，可以作為一種極具潛力的提取黃酮類化合物的純天然植物資源，后續(xù)研究重點可以放在其生物活性的研究上，有利于其在功能性保健食品領域的開發(fā)研究，對提高水晶冰菜的綜合經(jīng)濟效益具有深遠意義。