高危型HPV陽性患者血清中miR-130b-5p和miR-142-5p表達水平對宮頸癌發生的臨床意義

劉 銘 吳坤英 郭寶芝 宋芷霜

宮頸癌(cervical cancer)作為常見的婦科惡性腫瘤，發病率以及死亡率均占世界癌癥前五，多發生于發展中國家[1]。人乳頭瘤病毒(human papilloma virus，HPV) 持續感染是宮頸癌發生的主要危險因素，其中高危型HPV(HPV16和HPV18)與宮頸癌密切相關[2]。MicroRNA(miRNA)作為非編碼內源性小RNA，參與細胞的增殖、分化以及凋亡等生物過程，有研究報道miRNA在惡性腫瘤中起到關鍵性作用[3]，其中miR-130b-5p和miR-142-5p在宮頸癌中異常表達，并參與腫瘤的發生發展，有望成為宮頸癌的生物性指標[4]。但是目前關于miR-130b-5p和miR-142-5p表達水平與高危型HPV陽性患者以及對宮頸癌的預測的相關研究較少，具體機制尚不明確。本研究通過對高危型HPV陽性患者的表達水平的檢測以及對宮頸癌的臨床價值研究，旨在為尋找高危型HPV陽性患者發生宮頸癌的預測指標提供數據參考。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2017年6月至2019年6月我院收治的高危型HPV陽性宮頸癌患者76例，年齡22～81歲，平均(58.31±9.54)歲。納入標準：①患者符合《宮頸癌及癌前病變規范化診療指南(試行)》[5]，經病理確診為宮頸癌；②采用第2代雜交捕獲技術(HC 2)檢測患者高危型HPV，結果呈陽性；③患者的臨床資料完整；④患者及家屬已簽署知情同意書。排除標準：①合并患有婦科炎癥患者；②合并其他惡性腫瘤；③合并處于妊娠狀態患者。另選取同期因良性宮頸病變行手術切除的高危型HPV陽性患者80例作為對照組。

1.2 血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平檢測

采集患者外周靜脈血5 ml，分離血清，并于-20 ℃保存待檢。采用RNA提取試劑盒，嚴格按照產品說明書步驟提取樣本RNA，使用ABI 7500型熒光定量 PCR儀進行熒光定量PCR反應。以下為RT-PCR擴增條件：95 ℃預變性10 min，95 ℃ 變性15 s，60 ℃ 復性60 s，以上步驟共重復45個循環。采用2-ΔΔCt法計算miR-130b-5p和miR-142-5p的相對表達水平。引物送上海生工生物有限公司合成，引物如下：miR-130b-5p：F:5'-CGUGUUCACAGCGGACCUUGAU-3'，R:5'-AUCAAGGUCCGCUGUGAACACG-3'；miR-142-5p：F:5'-AACAAATCG GACTGC TTC TAC-3'，R:5'-AGC CACCATCATCCATAA A-3'。

1.3 高危型HPV檢測方法

通過使用一次性取樣毛刷插入患者宮頸管，并以順時針方向旋轉 5 圈后，取出沾有宮頸分泌物的一次性取樣毛刷，將其放置在特定的保存液中待檢。采用HC 2法檢測13種高危型HPV(包括HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-56、HPV-58、HPV-59、HPV-68)。最后檢測結果通過相對光單位/臨床閾值(Rlu/Co)表示，若化驗比值Rlu/Co≥1.0則為陽性，若Rlu/Co<1.0為陰性。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 高危型HPV陽性患者發生宮頸癌的單因素分析

高危型HPV陽性患者發生宮頸癌與年齡、是否絕經、有無分娩史、HPV分型無關(P均>0.05)，與血清miR-130b-5p和miR-142-5p表達水平有關(P均<0.05)，宮頸癌患者血清miR-130b-5p和miR-142-5p表達水平顯著高于對照組(P均<0.05)，見表 1。

表1 高危型HPV陽性患者發生宮頸癌的單因素分析(例

2.2 高危型HPV陽性患者發生宮頸癌的多因素分析

多因素分析結果發現血清miR-130b-5p和miR-142-5p表達水平是影響高危型HPV陽性患者發生宮頸癌的獨立危險因素(P<0.05)。見表2。

表2 高危型HPV陽性患者與宮頸癌發生的多因素分析

2.3 血清miR-130b-5p和miR-142-5p表達水平對宮頸癌的診斷價值

根據ROC曲線分析可知，血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平評估宮頸癌發生AUC分別為0.737，0.746，聯合檢測AUC為0.833，見表3及圖1。

表3 血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平以及聯合檢測對宮頸癌的診斷價值ROC分析結果

圖1 血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平以及聯合檢測對宮頸癌的診斷價值ROC曲線

2.4 血清miR-130b-5p和miR-142-5p表達水平與宮頸癌患者臨床特征的關系比較

高危型HPV陽性宮頸癌患者血清miR-130b-5p和miR-142-5p表達水平與年齡、是否絕經、有無分娩史、HPV分型無關(P均>0.05)，見表4。

表4 血清miR-130b-5p和miR-142-5p表達水平與患者臨床特征的關系

3 討論

宮頸癌作為婦科惡性腫瘤，發病率和死亡率均高，雖然目前臨床的診斷技術如宮腔鏡、超聲等在不斷進步，但是依然針對的是中晚期的宮頸癌患者，而中晚期患者治療效果往往不佳[6]。HPV是雙鏈DNA病毒，是以含遺傳物質的閉環雙鏈DNA組成核心，72個殼粒組成外圍，形成20面體[7]。根據生物特性以及致癌性，分為高危型和低危型HPV[8]。高危型HPV以HPV 16、18、31、33等亞型為主，可引起宮頸上皮內瘤以及宮頸癌的發生，低危型HPV是以HPV6、11、44等亞型為主，可引起尖銳濕疣的發生[9]。高危型HPV持續感染是導致宮頸癌變的重要原因之一[10]，對高危型HPV患者盡早篩查、治療，可有效減少宮頸癌患者的死亡率，而關于預測高危型HPV患者是否發生宮頸癌的有效生物指標，是目前的臨床研究所關注的熱點。

MiRNA是一類小分子RNA，通過參與調控靶基因來影響細胞的增殖、分化以及凋亡等過程[11]，近年來已有研究報道指出miRNA參與腫瘤的發生發展以及癌變等進程[12]，其中也參與了婦科腫瘤的發生發展過程[13]，主要是通過靶向mRNA 3'UTR 區域來對基因表達量進行調控[14]。目前，關于miRNA水平的研究已成為腫瘤方向的研究熱點。在宮頸癌的研究中也有miRNA的相關報道[15]。其中有研究表明miR-130b-5p和miR-142-5p表達水平與宮頸癌均存在相關性[16]。有研究稱miR-130b-5p參與了宮頸癌干細胞的增殖、分化以及凋亡的過程，促進了宮頸癌的發生發展[17]。還有miR-142-5p在宮頸癌中的過度表達增加了宮頸癌細胞增殖、遷移以及侵襲能力[18]。結合本研究發現高危型HPV陽性患者發生宮頸癌與年齡、是否絕經、有無分娩史、HPV分型無關，這說明年齡、絕經、分娩史以及HPV分型對宮頸癌發生的影響不顯著，這與目前已有關于宮頸癌發生的危險因素的研究一致[17]。本研究還發現宮頸癌患者血清miR-130b-5p和miR-142-5p表達水平顯著高于對照組。多因素結果分析顯示血清miR-130b-5p和miR-142-5p表達水平是影響高危型HPV陽性患者發生宮頸癌的獨立危險因素，進一步驗證了血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平在宮頸癌患者中出現表達失調，也為未來選擇合適的宮頸癌預測指標提供了思路。

本研究還發現血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平診斷宮頸癌的AUC分別為0.737，0.746，聯合檢測AUC為0.833，聯合檢測的線下面積均高于單獨選擇miR-130b-5p或miR-142-5p水平進行評估的預測價值，這說明了在選擇合適的生物標志物進行宮頸癌預測時可以考慮聯合檢測的方式，其預測效果可能比單獨預測具有一定的優勢。

綜上，本研究證實了血清miR-130b-5p和miR-142-5p水平對宮頸癌的臨床價值，可作為一種有效預測宮頸癌的生物標志物。然而本研究依然有一定的不足，需要更具前瞻性以及大規模的研究來進一步驗證。