上皮性卵巢癌組織中EGFR、EGFR mRNA、LRP和LRP mRNA表達水平及其臨床意義

劉勻慧 李代紅 程光卉

卵巢癌晚期患者的5年生存率約為30%，患者的晚期生存率與化療耐藥情況以及腫瘤的血管生成情況有著較為密切的聯系[1]。EGFR屬于一種在膜表面的傳感器，具有一定的酪氨酸激酶活性，在多種人體惡性腫瘤中有表達情況較高，與腫瘤的發生與發展有著一定的聯系[2-3]。 LRP是近年來臨床發現的能導致鉑類等化療藥物出現耐藥情況的一種多重耐藥(multidrugresistance,MDR)蛋白，能夠有效對卵巢癌患者身體的化療敏感行進行預測，屬于一種獨立預后的相關因素[4-5]。本次我院就上皮性卵巢癌EGFR、EGFR mRNA、LRP和LRP mRNA表達水平及臨床意義進行研究。具體報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年8月至2020年8月在我院婦科經過手術治療且確證為上皮性卵巢癌的98例患者進行研究。納入標準：①原發性上皮性卵巢癌者；②自愿簽署研究知情同意書者。排除標準：①不能有效配合研究的患者；②手術禁忌癥者；③認知功能或精神異常者；④合并有心肝肺等重要臟器疾病者；⑤對麻醉藥物過敏或手術不耐受者。患者年齡23～75歲，平均年齡(50.53±16.87)歲。其中75例為漿液性腺癌，12例為粘液性腺癌，7例為子宮內膜樣腺癌，2例為透明細胞癌，2例為惡性Brenner瘤。FIGO手術病理分期：35例為Ⅰ～Ⅱ期，63例為Ⅲ～Ⅳ期。根據WHO分級：6例為高分化，12例為中分化，80例為低分化。術前所有患者均未進行過放化療。另選擇取同期在我院接受體檢為健康人群的30為女性作為對照組；年齡21～74歲，平均年齡(49.65±14.87)歲。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑 總RNA提取液、RT-PCR試劑盒均由大連寶生物工程公司。通過Genbank對EGFR、LRP的基因序列進行檢測。通過PCGENE軟件對引物進行設計。EGFRmRNA上游引物：5'-AACACAGTGGAGCGAATTCCTTT-3'，下游引物：5'-GGAAGTCCATCGACATGTTGCT-3'，擴增片斷：262 bp。LRPmRNA上游引物：5'-CACAACTACT-GCGTGATTCTCGAC-3'，下游引物：5'-TGCTCCGACAGCACAT-ACACA-3'，擴增片斷152 bp。引物通過上海生工生物工程公司合成。

1.2.2 總RNA提取 按大連寶生物工程公司的RNA抽提方法對組織總RNA進行提取。通過經瓊脂糖凝膠電泳法對提取的RNA完整性進行鑒定，通過紫外分光光度計對260 nm與280 nm吸光度值進行檢測，并對RNA的濃度與純度進行計算。

1.2.3 逆轉錄的反應 嚴格按試劑說明操作術進行操作。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 兩組EGFR、LRP的表達情況比較

研究組EGFR、LRP陽性表達率明顯高于對照組，差異無統計學意義(P<0.05)，見表 1。

表1 兩組EGFR、LRP表達情況比較(例，%)

2.2 研究組EGFR、LRP表達情況與其臨床病理特征的關系

研究組不同年齡、不同組織學分型、不同細胞學分級、是否有淋巴結轉移的患者EGFR mRNA表達情況比較，差異無統計學意義(P>0.05)；Ⅲ～Ⅳ期患者EGFR陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差異有統計學意義(P<0.05)。研究組不同年齡、不同組織學分型、不同細胞學分級、不同病理分期、是否有淋巴結轉移的患者LRP mRNA表達情況比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 研究組EGFR、LRP表達水平與其臨床病理特征的關系

2.3 EGFR mRNA、LRP mRNA表達與卵巢癌患者化療療效的關系

在完成3個療程后評定所有患者的化療療效，其中70例患者化療有效，28例患者化療無效。分析結果指出，化療有效組EGFR、LRP mRNA表達水平為(0.80±0.27,0.83±0.29)，明顯低于化療無效組(1.10±0.21,1.04±0.20),差異有統計學意義(P<0.05)。

2.4 EGFR、LRP表達間的相互關系

Pearson相關分析結果顯示，EGFR與LRPmRNA表達呈正相關(γ=0.751,P<0.01)。

3 討論

EGFR屬于Ⅰ型受體酪氨酸蛋白激酶(RTK)，是C-erbB-1原癌基因的最終表達產物，在表皮細胞的遷移、增殖、生存、侵襲中均有較為重要的作用[6]。過度的EGFR表達，會導致分裂增殖信號持續傳遞到細胞內，對細胞分化的正常狀態產生干擾，導致細胞出現異常增殖的情況，出現惡性病變。相關研究結果顯示，肝癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、結腸癌、膀胱癌、腦膠質瘤等惡性腫瘤患者疾病的發生與發展均會在一定程度出現EGFR高表達的情況，EGFR的表達情況與并病情進展、身體對放化的療敏感性以及患者的預后情況均有著較為密切的聯系[7-10]。有學者的研究指出，卵巢癌患者的EGFR處于一個高表達狀態，惡性卵巢腫瘤患者的EGFR表達情況也明顯高于良性腫瘤患者[11]。

本次研究結果指出，EGFR在惡性卵巢腫瘤患者的組中的陽性表達率與健康人群相比明顯升高，由此可知EGFR的表達在卵巢腫瘤的發生與發展中可能有一定的作用；而且隨著臨床期別的提高，EGFR的表達情況出現逐漸增強，在Ⅲ～Ⅳ期的卵巢癌患者組織中的表達強度與陽性表達率與Ⅰ～Ⅱ期患者相比明顯升高，由此可知EGFR與卵巢腫瘤的發展有密切關系，能夠作為臨床對惡性卵巢腫瘤病變情況進行判斷的有效指標，出現EGFR表達陽性的患者體內腫瘤細胞可能具有較強的侵襲性與轉移力。EGFR能夠有效對體內因子的水平進行調節，還會對腫瘤血管的生成產生影響。在細胞存活、增殖、轉移、黏附有較為重要的作用。

LRP是一種新發現的能夠引起腫瘤產生多藥耐藥(MDR)現象的蛋白質，對腫瘤細胞與烷化劑、鉑類等化療藥物的耐藥情況有介導作用[12-13]。有研究指出，LRP對卵巢癌化療療效有一定的預測作用，且屬于有效研究患者預后情況的獨立標記指標[14-15]。本次研究結果指出， LRP在卵巢上皮性癌患者中的表達情況較為恒定，且與正常對照組相比明顯，由此可知LRP的表達可能與卵巢細胞的惡性癌變以及轉化有密切的關系。EGFR的表達情況與化療藥物的耐藥關系的研究指出，順鉑、阿霉素、VP-16等作為DNA化療的常用藥物在對癌細胞生長抑制的同時，能夠有效提高細胞的EGFR蛋白表達情況，在化療后效果不佳或出現復發的患者EGFR水平與化療效果較好的患者相比明顯升高。EGFR陽性表達的腫瘤細胞的侵襲性與轉移力均較強，且對放化療不敏感。卵巢腫瘤細胞中EGFR的過表達也能夠提示腫瘤細胞具有一定程度的耐藥性，但是選擇RTK抑制劑的使用能有效提高EGFR高表達的卵巢癌細胞對化療的敏感性。本次研究結果指出，EGFR mRNA與 LRPmRNA之間有著高度的相關性(γ=0.751,P<0.01)，由此可知提示EGFR基因的表達情況與腫瘤細胞對化療的耐藥性之間有著某種內在聯系，這可能是由于EGFR基因會參與到LRP基因的翻譯與轉錄中，能夠有效提高LRP的表達情況。

綜上所述，對卵巢上皮性癌中中EGFR、EGFR mRNA、LRP和LRP mRNA表達情況進行檢測對于化療反應的預測有著較為重要的意義，通過早期對耐藥的患者進行識別，可以有效幫助醫生對臨床個體化的治療方案進行選擇。