免疫球蛋白及CD3+、CD4+、CD19+、CD4+/CD8+在難治性支原體肺炎患兒診治及預(yù)后的應(yīng)用意義

孔艷嬌

遼寧省鞍山市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧鞍山 114001

小兒支原體肺炎是兒科常見(jiàn)疾病，占小兒呼吸道感染疾病的5.0%～20.0%[1]。 本病常由支原體感染導(dǎo)致，嚴(yán)重者甚至?xí)鹕鐓^(qū)獲得性肺炎、頑固性咳嗽等表現(xiàn)，嚴(yán)重威脅到患兒身心健康。 抗生素是治療支原體肺炎的有效藥物，雖然有一定效果，但部分患兒治療效果欠佳，病情反復(fù)、遷延難愈，最終形成難治性支原體肺炎[2]。當(dāng)疾病轉(zhuǎn)為難治性病癥后，會(huì)遺留明顯的肺不張、支氣管擴(kuò)張、閉塞性細(xì)支氣管炎等嚴(yán)重病癥，影響患兒健康成長(zhǎng)發(fā)育。 目前小兒難治性支原體肺炎發(fā)病機(jī)制尚未明確，有研究認(rèn)為該病與機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)密切相關(guān)，抗原分子誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，影響呼吸系統(tǒng)感染的結(jié)局及并發(fā)癥[3]。因此免疫應(yīng)答反應(yīng)在難治性支原體肺炎中的作用需要深入探討。本研究探討細(xì)胞免疫學(xué)及體液免疫指標(biāo)在小兒難治性支原體肺炎病情診治中的應(yīng)用意義，旨為臨床診斷提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2020年1月至2021年5月鞍山市中心醫(yī)院收治的95 例支原體肺炎患兒作為支原體肺炎組，按不同病情程度分為難治組（35 例）與普通組（60 例），難治組患兒為難治性支原體肺炎，普通組患兒為普通性支原體肺炎；另選取同期50 例到院健康體檢兒童作為對(duì)照組。 難治組中，男20 例，女15 例；年齡1～12歲，平 均（6.98±1.05）歲；發(fā)病時(shí)間1～7 d，平均（3.05±0.41）d；入院前大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物應(yīng)用28 例（80.0%）。普通組中，男32 例，女28 例；年齡1～12 歲，平均（7.05±1.06）歲；發(fā)病時(shí)間1～7 d，平均（2.98±0.43）d；入院前大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物應(yīng)用46 例（76.67%）。 對(duì)照組中，男28 例，女22 例；年齡1～12 歲，平均（7.14±1.06）歲。 三組受試者的性別、年齡等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。 支原體肺炎組納入標(biāo)準(zhǔn)： ①入組患兒符合文獻(xiàn)指南對(duì)支原體肺炎的判定標(biāo)準(zhǔn)[4]；②難治性支原體肺炎患兒為應(yīng)用大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗菌藥物治療1 周左右病情未好轉(zhuǎn)，伴有發(fā)熱癥狀，X 線顯示雙側(cè)多肺葉受累，或有胸腔積液，影像學(xué)及臨床癥狀表現(xiàn)持續(xù)加重，患有嚴(yán)重的肺外并發(fā)癥或肺部損傷，病情較重者。 支原體肺炎組排除標(biāo)準(zhǔn)：①近4 周接受免疫調(diào)節(jié)劑治療者； ②伴免疫系統(tǒng)疾病、血液疾病及凝血機(jī)制障礙者； ③患有先天性器質(zhì)性疾病、多臟器功能衰竭者；④精神障礙分裂癥者；⑤近4 周伴有其他感染者。患兒家屬或法定監(jiān)護(hù)人對(duì)本研究知情，并簽署同意書(shū)，本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 方法

細(xì)胞免疫學(xué)指標(biāo)：所有受試者在次日清晨采集空腹靜脈血3 ml，以3000 r/min 離心10 min，離心半徑為10 cm，留取血清后保存待檢。采用BD Biosciences FACS calibur 流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD 公司）檢測(cè)，利用分析軟件檢測(cè)CD3+、CD4+、CD8+、CD19+及CD4+/CD8+。

體液免疫學(xué)指標(biāo)：所有受試者在次日清晨采集空腹靜脈血3 ml，以3000 r/min 離心10 min，離心半徑為10 cm，留取上層血清，采用微量免疫比濁法檢測(cè)，儀器為貝克曼庫(kù)爾特AU480 型全自動(dòng)生化分析儀，檢測(cè)免疫球蛋白A（immunoglobulin A，IgA）、免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）、免疫球蛋白M（immunoglobulin M，IgM）。所有試劑盒均由上海酶聯(lián)免疫生物科技公司提供。

支原體肺炎組均給予抗生素對(duì)癥治療，連續(xù)1周。將難治組按照不同治療結(jié)局分為良好組（治療1 周臨床癥狀消失或顯著改善，體溫恢復(fù)正常，無(wú)病毒感染）及不良組（治療1 周癥狀改善不佳或不顯著），比較不同預(yù)后組患兒的細(xì)胞免疫學(xué)及體液免疫指標(biāo)表達(dá)。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

①比較支原體肺炎組、對(duì)照組患兒的細(xì)胞免疫學(xué)及體液免疫指標(biāo)表達(dá)，包括CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD4+/CD8+水平及IgG、IgM、IgA 含量； ②比較支原體肺炎中難治組、普通組患兒的細(xì)胞免疫學(xué)及體液免疫指標(biāo)表達(dá)， 包括CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD4+/CD8+水平及IgG、IgM、IgA 含量；③比較不同預(yù)后組患兒的細(xì)胞免疫學(xué)及體液免疫指標(biāo)表達(dá)，即預(yù)后良好組及不良組的CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD4+/CD8+水平 及IgG、IgM、IgA 含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析， 計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 支原體肺炎組與對(duì)照組細(xì)胞免疫學(xué)及體液免疫指標(biāo)表達(dá)的比較

支原體肺炎組患兒的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于對(duì)照組，CD8+、CD19+水平高于對(duì)照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；支原體肺炎組患兒的IgA、IgG、IgM 水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表1～2）。

表1 支原體肺炎組與對(duì)照組細(xì)胞免疫學(xué)及體液免疫指標(biāo)表達(dá)的比較（%，±s）

表1 支原體肺炎組與對(duì)照組細(xì)胞免疫學(xué)及體液免疫指標(biāo)表達(dá)的比較（%，±s）

組別 CD3+ CD4+ CD8+ CD19+ CD4+/CD8+支原體肺炎組（n=95）對(duì)照組（n=50）t 值P 值55.18±3.25 68.65±3.31 19.260＜0.001 28.45±2.35 40.15±3.35 18.197＜0.001 26.51±3.24 20.53±2.96 9.172＜0.001 18.74±2.84 11.20±2.28 14.184＜0.001 1.15±0.24 1.75±0.29 10.341＜0.001

表2 支原體肺炎組與對(duì)照組體液免疫學(xué)指標(biāo)表達(dá)的比較（g/L，±s）

表2 支原體肺炎組與對(duì)照組體液免疫學(xué)指標(biāo)表達(dá)的比較（g/L，±s）

組別 IgA IgG IgM支原體肺炎組（n=95）對(duì)照組（n=50）t 值P 值1.76±0.48 1.03±0.21 10.246＜0.001 8.65±0.75 5.01±0.61 25.750＜0.001 1.71±0.56 1.01±0.28 8.117＜0.001

2.2 支原體肺炎中難治組與普通組細(xì)胞免疫學(xué)及體液免疫指標(biāo)表達(dá)的比較

難治組患兒的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于普通組，CD8+、CD19+水平高于普通組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；難治組患兒的IgA、IgG、IgM 水平高于普通組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表3～4）。

表3 支原體肺炎中難治組與普通組細(xì)胞免疫學(xué)指標(biāo)表達(dá)的比較（%，±s）

表3 支原體肺炎中難治組與普通組細(xì)胞免疫學(xué)指標(biāo)表達(dá)的比較（%，±s）

組別 CD3+ CD4+ CD8+ CD19+ CD4+/CD8+難治組（n=35）普通組（n=60）t 值P 值50.15±3.51 61.24±3.63 14.538＜0.001 23.68±2.41 30.72±3.18 11.327＜0.001 31.52±2.85 24.35±2.96 11.544＜0.001 21.15±2.08 16.35±2.20 10.463＜0.001 0.98±0.21 1.32±0.35 5.218＜0.001

表4 支原體肺炎中難治組、普通組體液免疫指標(biāo)表達(dá)的比較（g/L，±s）

表4 支原體肺炎中難治組、普通組體液免疫指標(biāo)表達(dá)的比較（g/L，±s）

注 IgA：免疫球蛋白A；IgG：免疫球蛋白G；IgM：免疫球蛋白M

組別 IgA IgG IgM難治組（n=35）普通組（n=60）t 值P 值2.05±0.35 1.58±0.51 4.824＜0.001 10.41±1.18 6.96±1.08 14.514＜0.001 2.10±0.36 1.54±0.34 7.578＜0.001

2.3 良好組與不良組細(xì)胞免疫學(xué)及體液免疫指標(biāo)表達(dá)的比較

難治組中，預(yù)后良好23 例，預(yù)后不良12 例。良好組患 兒 的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平高于不良組，CD8+、CD19+水平低于不良組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；良好組患兒的IgA、IgG、IgM 表達(dá)低于不良組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表5～6）。

表5 良好組與不良組細(xì)胞免疫學(xué)表達(dá)的比較（%，±s）

表5 良好組與不良組細(xì)胞免疫學(xué)表達(dá)的比較（%，±s）

3+ CD4+ CD8+ CD19+ CD4+/CD8+t 值P 值3.24 2.71 7.209＜0.001 29.41±2.68 23.18±2.25 6.875＜0.001 25.53±2.89 30.12±2.41 4.996＜0.001 16.24±2.15 22.65±2.24 8.255＜0.001 1.28±0.21 0.86±0.16 6.056＜0.001

表6 良好組與不良組體液免疫指標(biāo)表達(dá)的比較（g/L，±s）

表6 良好組與不良組體液免疫指標(biāo)表達(dá)的比較（g/L，±s）

注 IgA：免疫球蛋白A；IgG：免疫球蛋白G；IgM：免疫球蛋白M

組別 IgA IgG IgM良好組（n=23）不良組（n=12）t 值P 值1.61±0.29 2.10±0.35 4.420＜0.001 7.62±1.05 11.35±1.17 9.597＜0.001 1.65±0.41 2.21±0.56 3.379 0.002

3 討論

宿主免疫反應(yīng)特點(diǎn)、 程度及免疫能力與呼吸道疾病的臨床結(jié)局、肺外并發(fā)癥等有較大關(guān)系。 肺炎支原體在侵入呼吸道后， 對(duì)細(xì)胞膜上神經(jīng)氨酸受體位點(diǎn)對(duì)的作用會(huì)破壞呼吸道上皮細(xì)胞， 提高呼吸道上皮通透性以及機(jī)體對(duì)變應(yīng)原的敏感性，甚至?xí)p傷神經(jīng)、心血管等系統(tǒng)，導(dǎo)致免疫紊亂[5-6]。 本研究結(jié)果顯示，支原體肺炎組患兒的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于對(duì)照組，CD8+、CD19+、IgA、IgG、IgM 水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示肺炎支原體患兒普遍存在免疫紊亂狀態(tài)。 因肺炎支原體進(jìn)入宿主并與體液免疫因子相結(jié)合， 不斷沉積在血管基底膜及肺組織，以此誘發(fā)細(xì)胞因子，導(dǎo)致細(xì)胞、體液免疫功能紊亂，誘發(fā)免疫損傷，并加重肺損傷[7-8]。 因此，在臨床診斷支原體肺炎時(shí)，可將免疫功能變化納入輔助指標(biāo)，對(duì)支原體肺炎進(jìn)行治療時(shí)，也可將免疫治療方法納入臨床治療方案中， 以此提高患兒治療效果，改善其預(yù)后。

通常宿主細(xì)胞對(duì)免疫反應(yīng)的差異與疾病程度的差異存在聯(lián)系。血清免疫球蛋白是反映機(jī)體體液免疫功能的指標(biāo)，根據(jù)IgA、IgG、IgM 表達(dá)，準(zhǔn)確判斷血清Ig 水平，若Ig 水平降低，則存在體液免疫缺陷[9]。 T 淋巴細(xì)胞是一種多功能的細(xì)胞群體，與細(xì)胞免疫功能密切相關(guān)。 本研究結(jié)果顯示，難治組患兒的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平低于普通組，CD8+、CD19+、IgA、IgG、IgM 水平高于普通組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。預(yù)后良好組患兒的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平高于不良組，CD8+、CD19+、IgA、IgG、IgM 水平低于不良組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與吳佳南等[10]的研究結(jié)論一致，證實(shí)細(xì)胞免疫、體液免疫指標(biāo)與難治性支原體肺炎患兒病情的關(guān)系密切。難治性支原體肺炎患兒的免疫損傷嚴(yán)重，且與預(yù)后關(guān)系密切。 可能是肺炎支原體侵入呼吸道后，機(jī)體會(huì)相應(yīng)形成對(duì)抗支原體的特異性抗體，兩者相互結(jié)合形成免疫復(fù)合物，故會(huì)激活體內(nèi)免疫細(xì)胞及補(bǔ)體細(xì)胞的活性，導(dǎo)致體液免疫指標(biāo)升高[11-12]。 同時(shí)健康兒童體內(nèi)的T 細(xì)胞亞群數(shù)目相對(duì)穩(wěn)定，是經(jīng)過(guò)Th1、Th2 亞群細(xì)胞分泌細(xì)胞因子，兩者相互制約，維持穩(wěn)定、平衡的免疫功能[13]。 當(dāng)支原體侵入人體時(shí)會(huì)激活免疫細(xì)胞，此時(shí)為了對(duì)抗支原體，大量免疫細(xì)胞因子釋放抗體， 造成T 細(xì)胞亞群紊亂，使CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平降低，CD8+、CD19+水平升高，揭示細(xì)胞免疫指標(biāo)能有效預(yù)測(cè)的患兒預(yù)后[14-17]。通過(guò)細(xì)胞、體液免疫指標(biāo)可能對(duì)早期篩查難治性支原體肺炎有一定幫助，并為難治性支原體肺炎的治療途徑提供新的思路。雖然關(guān)于免疫指標(biāo)與支原體肺炎的研究有很多，但對(duì)不同類(lèi)型免疫細(xì)胞間的作用研究仍有一定難度；同時(shí)未對(duì)細(xì)胞免疫學(xué)指標(biāo)及體液免疫指標(biāo)在小兒難治性支原體肺炎中的應(yīng)用敏感性及特異性缺乏報(bào)道，仍需臨床進(jìn)一步討論。

綜上所述，細(xì)胞免疫學(xué)指標(biāo)及體液免疫指標(biāo)與小兒難治性支原體肺炎關(guān)系密切，能有效預(yù)測(cè)病情嚴(yán)重程度，為患兒預(yù)后評(píng)估提供指導(dǎo)意義，應(yīng)用意義高。