運(yùn)動(dòng)疲勞狀態(tài)下大鼠腦皮層單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)的變化及意義

高 晨,王 菀,李玉榮,裴文娟

(聯(lián)勤保障部隊(duì)第九四〇醫(yī)院全科醫(yī)學(xué)科,蘭州 730050)

疲勞發(fā)生在外周肌肉和中樞神經(jīng)兩個(gè)部位，決定后者的關(guān)鍵因素是腦能量代謝失衡，從而難以維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)持續(xù)向外周發(fā)放神經(jīng)沖動(dòng)［1］，其機(jī)制與運(yùn)動(dòng)缺氧導(dǎo)致靜息狀態(tài)下腦電活動(dòng)減弱并反饋性抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)和脊髓前角α運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元活動(dòng)有關(guān)［2-4］。研究表明，極量運(yùn)動(dòng)或缺氧狀態(tài)下，無(wú)氧代謝所產(chǎn)生的乳酸能夠被大腦攝取并作為能量底物為神經(jīng)元供能［5］，且乳酸優(yōu)先于葡萄糖被神經(jīng)元利用氧化供能［6］。這一機(jī)制在劇烈活動(dòng)時(shí)對(duì)于維持突觸傳遞具有重要作用。然而，另有研究表明，缺血缺氧或腦損傷后乳酸堆積卻通過(guò)降低pH值而引發(fā)一系列病理反應(yīng)，從而損傷神經(jīng)元［7-8］。機(jī)體乳酸代謝轉(zhuǎn)運(yùn)的載體是廣泛分布于組織細(xì)胞膜上的單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（monocarboxylate transporters，MCTs），其可分為14種亞型［9］。其中，MCT1主要在微血管內(nèi)皮細(xì)胞、室管膜細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，MCT2主要在神經(jīng)元中表達(dá)，而MCT4幾乎只在星形膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)［10］。研究證實(shí)，血乳酸難以通過(guò)血腦屏障，星形膠質(zhì)細(xì)胞是腦乳酸的主要來(lái)源［11］。廣泛表達(dá)于星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的MCT1、MCT2和MCT4在中樞乳酸的產(chǎn)生和利用中起到至關(guān)重要的作用［12-13］。據(jù)此推測(cè)，運(yùn)動(dòng)疲勞過(guò)程中，正是由于MCTs的存在，腦乳酸在氧化供能和腦損傷之間維系了一種平衡狀態(tài)。目前關(guān)于運(yùn)動(dòng)疲勞狀態(tài)下腦內(nèi)MCTs表達(dá)的變化尚無(wú)明確結(jié)論。本研究通過(guò)檢測(cè)運(yùn)動(dòng)疲勞模型動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)力竭時(shí)間變化以及大腦皮層運(yùn)動(dòng)區(qū)MCT1、MCT2和MCT4的表達(dá)，初步探討運(yùn)動(dòng)耐力變化與腦乳酸代謝轉(zhuǎn)運(yùn)之間的相關(guān)性，為運(yùn)動(dòng)疲勞的醫(yī)學(xué)干預(yù)奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

8周齡清潔級(jí)雄性SD大鼠42只，體質(zhì)量（280±10）g，由聯(lián)勤保障部隊(duì)第九四〇醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)科提供［SCXK（軍）2017-0023］。大鼠常規(guī)分籠飼養(yǎng)于屏障設(shè)施［SYXK（軍）2017-0047］，正常飲水、飲食。環(huán)境溫度維持在18～24℃，相對(duì)濕度40%～60%。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)聯(lián)勤保障部隊(duì)第九四〇醫(yī)院倫理委員會(huì)審核同意（編號(hào)2020KYLL032）。大鼠隨機(jī)分為7組，每組6只。對(duì)照組（Control）正常飼養(yǎng)，不運(yùn)動(dòng)；其余6組為疲勞1～6組（Fatigue 1-6）分別進(jìn)行力竭運(yùn)動(dòng)1、3、5、7、9、14 d，以達(dá)到運(yùn)動(dòng)疲勞狀態(tài)。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備及試劑

ZH-PT型動(dòng)物跑臺(tái)為安徽淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司產(chǎn)品。MCT1（貨號(hào)PAB16059）和MCT4（貨號(hào)PAB21410）多克隆抗體均購(gòu)自亞諾法（Abnova）生技股份有限公司，MCT2（貨號(hào)SC-50323）購(gòu)自美國(guó)Santa公司，膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）（貨號(hào)3670）單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology公司，神經(jīng)元核抗原（neuronal nuclei antigen，NeuN）（貨號(hào)MAB377）單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Millipore公司。熒光單克隆抗體購(gòu)自北京康為世紀(jì)生物科技有限公司。熒光顯微鏡（型號(hào)AX80）購(gòu)自日本Olympus株式會(huì)社。

1.3 運(yùn)動(dòng)疲勞模型建立

采用Bedford等［14］的遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)方案建立大鼠運(yùn)動(dòng)疲勞模型。疲勞組大鼠先行在動(dòng)物跑臺(tái)上進(jìn)行3 d適應(yīng)性訓(xùn)練（速度為15 m∕min，時(shí)間為5 min∕d，坡度0°），之后分別進(jìn)行為期1、3、5、7、9和14 d的遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)（速度為8.2 m∕min×15 min+15 m∕min×15 min+20 m∕min持續(xù)，直至力竭，1次∕日）。力竭標(biāo)準(zhǔn)：大鼠跑步姿態(tài)由蹬地式變?yōu)榉厥剑瑴襞艿篮?∕3處達(dá)3次以上，各種刺激驅(qū)趕無(wú)效，且停跑后表現(xiàn)為呼吸急促、神情倦怠、反應(yīng)遲鈍［15］。分別記錄各組大鼠負(fù)荷運(yùn)動(dòng)最后1 d達(dá)到力竭狀態(tài)的運(yùn)動(dòng)時(shí)間，取平均值。

1.4 蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)

不同時(shí)間疲勞模型建立后，各組分別取3只大鼠在異氟烷麻醉下斷頭處死。完整取出腦組織，嗅球至小腦蚓部前后冠狀均分為5等份，第2和3等份最表層主要為運(yùn)動(dòng)區(qū)皮層。取運(yùn)動(dòng)區(qū)皮層組織，勻漿后裂解，提取總蛋白，BCA法測(cè)定濃度。然后行聚丙烯酰胺凝膠電泳，每孔上樣蛋白總量為20μg，電泳時(shí)間約120 min。電泳結(jié)束后以350 mA恒流帶電轉(zhuǎn)膜（120 min），5%牛血清白蛋白室溫振蕩封閉1 h。5%脫脂奶粉稀釋后，分別加入一抗（包括MCT1、MCT2、MCT4和αtubulin抗體，體積稀釋比例分別為1∶500、1∶1 000、1∶500和1∶1 000），4℃孵育過(guò)夜；加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗（體積稀釋比例為1∶5 000），在室溫下振蕩孵育2 h［16］。滴加發(fā)光檢測(cè)液，在凝膠成像系統(tǒng)中拍照，并采用Image J軟件進(jìn)行灰度量化分析。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

1.5 大鼠腦切片制備及免疫熒光檢測(cè)

各組剩余3只大鼠在異氟烷麻醉下經(jīng)心臟灌流處死，斷頭完整取出腦組織。用質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%的多聚甲醛溶液固定24 h，蔗糖PB溶液階梯脫水48 h，包埋后自嗅球到小腦蚓部前后5等份連續(xù)冠狀位冰凍切片（厚度25μm）。取第2和3等份切片進(jìn)行免疫熒光雙標(biāo)法檢測(cè)。

鼠腦切片用1%牛血清蛋白＋0.3%Triton X-100在室溫下封阻非特異性結(jié)合，并破膜1 h。PBS清洗后，加入一抗MCT1（1∶200）＋GFAP（1∶500）、MCT2（1∶500）＋NeuN（1∶500），或MCT4（1∶200）＋GFAP（1∶500）稀釋液，4℃緩慢振蕩孵育過(guò)夜。PBS清洗后，加入1∶100稀釋的熒光二抗異硫氰酸熒光素和異硫氰酸羅丹明，室溫下緩慢振蕩孵育2 h。PBS清洗后，加入1∶2 000稀釋的DAPI，室溫下避光孵育10 min。PBS清洗后，鼠腦切片轉(zhuǎn)移至載玻片上，60%甘油PBS封固，熒光顯微鏡下觀察并進(jìn)行皮層定位圖像采集。FITC激發(fā)∕發(fā)射波長(zhǎng)為480 nm∕535 nm，TRITC激發(fā)∕發(fā)射波長(zhǎng)為535 nm∕610 nm。用Images J軟件進(jìn)行圖像分析。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)本研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料采用±s表示。不同組樣本均數(shù)間比較采用單因素方差分析，并根據(jù)各組總體方差齊同與否，選擇Bonferroni法或Tamhane's T2法修正結(jié)果，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間變化情況

如表1所示，疲勞1組大鼠平均運(yùn)動(dòng)力竭時(shí)間為（120.17±11.18）min。運(yùn)動(dòng)5 d后疲勞3組的平均運(yùn)動(dòng)力竭時(shí)間達(dá)到最短，為（67.00±7.07）min。此后，大鼠運(yùn)動(dòng)能力逐漸恢復(fù)，運(yùn)動(dòng)14 d后疲勞6組力竭時(shí)間恢復(fù)至（91.17±11.43）min。與疲勞1組相比，各組大鼠的平均運(yùn)動(dòng)力竭時(shí)間均明顯縮短，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與力竭時(shí)間最短的疲勞3組相比，疲勞5組和疲勞6組的大鼠力竭時(shí)間明顯延長(zhǎng)，表明其運(yùn)動(dòng)能力的恢復(fù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 各疲勞組大鼠平均力竭時(shí)間對(duì)比Table 1 The exhaustive time of rats in fatigue groups（±s,n=6）

表1 各疲勞組大鼠平均力竭時(shí)間對(duì)比Table 1 The exhaustive time of rats in fatigue groups（±s,n=6）

注：Fatigue 1-6分別為疲勞1～6組。與Fatigue 1組比較，＊P＜0.05；與Fatigue 3組比較，#P＜0.05；與Fatigue 5組比較，△P＜0.05。單因素方差分析采信Tamhane’s T2修正值。

組別Fatigue 1 Fatigue 2 Fatigue 3 Fatigue 4 Fatigue 5 Fatigue 6遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)天數(shù)/d 135791 4平均運(yùn)動(dòng)力竭時(shí)間/min 120.17±11.18#△81.17±10.57＊67.00±7.07＊△75.67±4.97＊89.17±9.45＊#91.17±11.43＊#

2 .2大鼠腦運(yùn)動(dòng)區(qū)皮層MCT1、MCT2及MCT4表達(dá)變化情況

用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)各組大鼠運(yùn)動(dòng)區(qū)皮層MCT1、MCT2及MCT4表達(dá)的變化情況。如圖1所示，Control組大鼠運(yùn)動(dòng)區(qū)皮層MCT1、MCT2及MCT4均少量正常表達(dá)。疲勞負(fù)荷運(yùn)動(dòng)5 d后，F(xiàn)atigue 3組鼠腦運(yùn)動(dòng)區(qū)皮層中MCT2表達(dá)較Control組明顯升高74.2%。疲勞負(fù)荷運(yùn)動(dòng)7 d后，F(xiàn)atigue 4組鼠腦運(yùn)動(dòng)區(qū)皮層中MCT1和MCT4表達(dá)較Control組分別明顯升高約89.5%和92.0%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。此后，F(xiàn)atigue 5組和6組鼠腦運(yùn)動(dòng)區(qū)皮層中MCT1、MCT2和MCT4均維持高表達(dá)，與Control組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖1 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)各組大鼠腦運(yùn)動(dòng)區(qū)皮層中MCT1、MCT2和MCT4表達(dá)比較Figure1ExpressionofMCT1，MCT2andMCT4incerebralmotorcortexofratsindifferentgroupsdetectedby Westernblotting

進(jìn) 一 步 分 別 利 用MCT1∕GFAP、MCT2∕NeuN或MCT4∕GFAP免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)對(duì)比檢測(cè)鼠腦運(yùn)動(dòng)區(qū)皮層膠質(zhì)細(xì)胞中MCT1、MCT2和MCT4的表達(dá)變化情況。如圖2所示，與Control組相比，疲勞負(fù)荷運(yùn)動(dòng)7 d后鼠腦運(yùn)動(dòng)區(qū)皮層膠質(zhì)細(xì)胞中MCT1與MCT4表達(dá)均明顯升高并維持穩(wěn)定；MCT2的表達(dá)也呈現(xiàn)出逐漸增高的趨勢(shì)，疲勞負(fù)荷運(yùn)動(dòng)5 d即維持于高表達(dá)狀態(tài)。熒光檢測(cè)結(jié)果與蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)結(jié)果相一致。

圖2 免疫熒光法檢測(cè)各組大鼠腦運(yùn)動(dòng)區(qū)皮層MCT1、MCT2和MCT4表達(dá)（×400）Figure2ExpressionofMCT1，MCT2andMCT4incerebralmotorcortexofratsindifferentgroupsdetectedby imunofluorescence（×400）

結(jié)果提示每日疲勞負(fù)荷運(yùn)動(dòng)后，大鼠運(yùn)動(dòng)能力迅速下降，在運(yùn)動(dòng)5 d后達(dá)到最低點(diǎn)。此后繼續(xù)運(yùn)動(dòng)，大鼠腦內(nèi)MCTs表達(dá)水平逐漸升高，腦乳酸轉(zhuǎn)運(yùn)及代謝被激活，大鼠運(yùn)動(dòng)能力在一定程度上恢復(fù)。這種由重復(fù)運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)的對(duì)運(yùn)動(dòng)疲勞的適應(yīng)性，在運(yùn)動(dòng)1周后維持于相對(duì)平穩(wěn)的狀態(tài)。

3 討論

乳酸（C3H6O3）是糖代謝過(guò)程的中間產(chǎn)物。與通常情況下機(jī)體對(duì)葡萄糖的有氧氧化過(guò)程不同，乳酸的產(chǎn)生來(lái)源于無(wú)氧狀態(tài)下的糖酵解過(guò)程。雖然無(wú)氧糖酵解過(guò)程的能量供應(yīng)效率低于糖的有氧氧化，但對(duì)于劇烈運(yùn)動(dòng)狀態(tài)下的能量代謝維持至關(guān)重要。通常，運(yùn)動(dòng)過(guò)程中，肌肉是產(chǎn)生乳酸最多的部位［17］。大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)時(shí)，糖酵解生成的乳酸使細(xì)胞內(nèi)H+濃度上升，pH值降低。機(jī)體對(duì)乳酸的代謝起始于細(xì)胞間乳酸的穿梭，而后進(jìn)一步通過(guò)糖異生等途徑供應(yīng)能量。乳酸的穿梭過(guò)程依賴于MCTs。研究表明，運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度的變化是MCTs含量改變的重要因素。擁有14種亞型的MCTs分布于不同的組織細(xì)胞膜表面，其中MCT1、MCT2和MCT4對(duì)運(yùn)動(dòng)狀態(tài)下的乳酸轉(zhuǎn)運(yùn)至關(guān)重要［13］。由于乳酸穿過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)是一個(gè)主動(dòng)耗能的過(guò)程，因此較大強(qiáng)度的耐力運(yùn)動(dòng)后細(xì)胞膜上與MCTs共同起到協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)作用的鈉氫交換蛋白（sodium hydrogen exchanger 1，NHE1）的表達(dá)亦相應(yīng)升高，從而利用Na+∕H+ATP酶產(chǎn)生的化學(xué)梯度能量完成整個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程，同時(shí)維持細(xì)胞內(nèi)外pH值的相對(duì)穩(wěn)定。研究表明，這種協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)是乳酸與H+以1∶1的等摩爾方式相偶聯(lián)的同向轉(zhuǎn)運(yùn)，其中NHE1和MCTs對(duì)細(xì)胞內(nèi)外pH調(diào)節(jié)至關(guān)重要，特別是在代謝活躍的狀態(tài)下。從這一意義上來(lái)講，MCTs在機(jī)體乳酸循環(huán)、能量代謝以及內(nèi)環(huán)境pH值的調(diào)節(jié)方面發(fā)揮著重要作用［18-19］。外周肌肉組織中，MCT1主要存在于氧化型慢肌細(xì)胞膜和細(xì)胞內(nèi)部，調(diào)控乳酸的攝取與內(nèi)流。MCT4主要在酵解型快肌中高表達(dá)，調(diào)控乳酸的排出與外流［20］。而攜帶MCT2的細(xì)胞表現(xiàn)出強(qiáng)烈的乳酸消耗傾向，這與該亞型在諸如神經(jīng)元這類氧化高度活躍的細(xì)胞中高表達(dá)相一致［21］。因此，MCT1、MCT2和MCT4在不同細(xì)胞間對(duì)乳酸轉(zhuǎn)運(yùn)作用各有側(cè)重，才得以協(xié)同完成乳酸穿梭的整個(gè)過(guò)程。Eydoux等［22］研究顯示，短時(shí)間低強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)對(duì)外周橫紋肌中MCT1、MCT2和MCT4表達(dá)的影響不甚明顯，而大強(qiáng)度力竭運(yùn)動(dòng)后三者的表達(dá)水平均明顯升高。本研究則針對(duì)運(yùn)動(dòng)后中樞神經(jīng)系統(tǒng)中MCTs表達(dá)的變化趨勢(shì)進(jìn)行了針對(duì)性探究。

乳酸在腦內(nèi)的代謝與外周有所不同。實(shí)驗(yàn)表明，體外灌流乳酸鈉使血液中乳酸濃度顯著升高，但頸內(nèi)靜脈中乳酸濃度變化不大，表明血乳酸變化對(duì)腦乳酸變化影響較小，提示血腦屏障的存在使得外周乳酸很難進(jìn)入腦中。腦內(nèi)胞外乳酸是獨(dú)立于血乳酸而存在的［8，11］。1998年，Pellerin等［11］研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞間的乳酸存在一種特殊的分配狀態(tài)，即腦內(nèi)乳酸來(lái)源于星形膠質(zhì)細(xì)胞，而神經(jīng)元?jiǎng)t成為吸收和利用乳酸的部位。其后，有關(guān)腦內(nèi)乳酸作用的研究結(jié)果不盡相同。Chih等［23］綜合了Pellerin等［24］、Wada等［25］和Takata等［26］的研究結(jié)果，提出葡萄糖仍然是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的主要能量底物，但在低血糖等特殊情況下，或由于腦神經(jīng)的多樣性，機(jī)體中某些神經(jīng)細(xì)胞也可能利用乳酸暫時(shí)供能。運(yùn)動(dòng)狀態(tài)下，腦能量供應(yīng)的特殊情況正符合上述研究結(jié)論。目前學(xué)術(shù)界公認(rèn)的是，乳酸由神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞無(wú)氧糖酵解葡萄糖產(chǎn)生，作為能量底物為神經(jīng)元供能，尤其在劇烈活動(dòng)時(shí)對(duì)維持突觸傳遞具有重要作用。特別是在無(wú)氧或有氧條件下，哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中興奮性神經(jīng)元優(yōu)先利用胞外的乳酸，而不是葡萄糖，作為主要的能量底物［8，27］。以上研究多基于代謝水平的生物化學(xué)檢測(cè)得出結(jié)論，而對(duì)于乳酸代謝轉(zhuǎn)運(yùn)主要媒介MCTs在分子水平的變化情況，尚缺乏系統(tǒng)的研究。因此，本研究重點(diǎn)關(guān)注了MCTs在劇烈運(yùn)動(dòng)的特殊條件下腦內(nèi)表達(dá)的變化情況。研究結(jié)果表明，大鼠運(yùn)動(dòng)能力在疲勞負(fù)荷初期下降較為明顯，此時(shí)MCTs表達(dá)變化不明顯；隨著運(yùn)動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)，1周左右后大鼠運(yùn)動(dòng)能力逐漸恢復(fù)，相應(yīng)地，鼠腦內(nèi)運(yùn)動(dòng)區(qū)皮層MCT1、MCT2和MCT4的表達(dá)也在相應(yīng)時(shí)間段內(nèi)呈現(xiàn)出逐漸升高的趨勢(shì)。相對(duì)于MCT1和MCT4，皮層運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元表達(dá)的MCT2在負(fù)荷運(yùn)動(dòng)后升高較早且趨勢(shì)平緩；這就表明疲勞負(fù)荷運(yùn)動(dòng)后，鼠腦內(nèi)乳酸排出與攝取利用的整個(gè)鏈路均表現(xiàn)出適應(yīng)運(yùn)動(dòng)疲勞的積極變化。上述變化趨勢(shì)正是對(duì)代謝水平乳酸生化檢測(cè)結(jié)論的有力印證。同時(shí)，本研究結(jié)果也提示腦內(nèi)MCTs的表達(dá)變化與大鼠對(duì)運(yùn)動(dòng)疲勞的適應(yīng)性存在某種關(guān)聯(lián)性，這種適應(yīng)性在疲勞負(fù)荷運(yùn)動(dòng)1周后維持于相對(duì)平穩(wěn)的狀態(tài)。綜合前述的相關(guān)研究，筆者認(rèn)為腦內(nèi)MCTs表達(dá)變化所代表的腦乳酸代謝調(diào)控可能是機(jī)體對(duì)運(yùn)動(dòng)疲勞（尤其是中樞性運(yùn)動(dòng)疲勞）產(chǎn)生適應(yīng)性的機(jī)制之一。

當(dāng)然，疲勞產(chǎn)生的原因是多方面的，外周肌肉及中樞神經(jīng)系統(tǒng)都參與其中。僅就中樞疲勞而言，興奮性與抑制性氨基酸平衡狀態(tài)，腦內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元、5-羥色胺等抑制性神經(jīng)遞質(zhì)以及支鏈氨基酸等因素近年來(lái)均有相關(guān)研究［28］。本研究?jī)H對(duì)運(yùn)動(dòng)疲勞狀態(tài)下腦內(nèi)MCTs變化進(jìn)行了初步探索，進(jìn)一步的研究將著重于MCTs分子表達(dá)水平干預(yù)后，運(yùn)動(dòng)疲勞電生理及動(dòng)物行為學(xué)的變化，以期為相關(guān)研究結(jié)果提供進(jìn)一步佐證。

[作者貢獻(xiàn)]

高晨：負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)總體設(shè)計(jì)，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及課題論文撰寫(xiě)；

王菀：負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)化大鼠運(yùn)動(dòng)疲勞模型構(gòu)建及運(yùn)動(dòng)能力檢測(cè)；

李玉榮：負(fù)責(zé)標(biāo)鼠腦皮層蛋白提取及蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)；

裴文娟：負(fù)責(zé)鼠腦切片制備及免疫熒光檢測(cè)。

[利益聲明]所有作者均聲明本文不存在利益沖突。