接骨丹膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

耿燕楠，崔維剛，周利章 ,石俊英

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，山東 濟(jì)南 250011；2.臨沂市食品藥品檢驗檢測中心，山東 臨沂 276001;3.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355)

接骨丹膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

耿燕楠1，崔維剛2，周利章2,石俊英3

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，山東 濟(jì)南 250011；2.臨沂市食品藥品檢驗檢測中心，山東 臨沂 276001;3.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355)

目的: 完善接骨丹膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法: 增加薄層色譜法對接骨丹膠囊中延胡索和梔子進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法測定制劑中柚皮苷的含量。采用Agilent Cl8柱，流動相為以甲醇-冰醋酸-水(33∶2∶65)，檢測波長283nm。結(jié)果: 定性鑒別方法專屬性強(qiáng)；含量測定中柚皮苷范圍為 0.03146μg～0.2517μg( r =0.9999)，平均回收率為98.17%。結(jié)論: 建立的分析方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

接骨丹膠囊;薄層色譜法;柚皮苷;液相色譜法;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

接骨丹膠囊是臨沂市沂南攀峰骨科醫(yī)院自制的經(jīng)山東省食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)使用的醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑(魯藥制ZBZ1613)，該制劑由桃仁、紅花、當(dāng)歸、川芎、土鱉蟲、牛膝、血竭、自然銅等28種中藥組成，其功效為活血化瘀，補(bǔ)腎接骨，用于各種骨折，骨不連、股骨頭壞死等，具有較高的臨床療效。該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅包含顯微鑒別(5個特征)與薄層色譜鑒別(當(dāng)歸、川芎)以及常規(guī)的膠囊檢查項目。由于該制劑涉及藥味數(shù)量眾多，藥材原料質(zhì)量不一，很難保證臨床上中成藥療效的穩(wěn)定性與安全性，鑒于此類問題，對接骨丹膠囊進(jìn)行深入分析研究，遵循質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高優(yōu)先兼顧檢驗成本與效率的原則，增加了延胡索、梔子藥材的薄層色譜鑒別[1]，以保證該藥材的專屬性投料，同時，增加了柚皮苷含量測定項目，以保證接骨丹膠囊的質(zhì)量穩(wěn)定性，為臨床療效提供保障，最終在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，形成高效、優(yōu)化、可控的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，以解決中藥原材料投料質(zhì)量水平參差不齊導(dǎo)致成藥質(zhì)量不一的現(xiàn)實(shí)狀況。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

XS205DU電子分析天平(梅特勒-托利多生產(chǎn))；KQ3200型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；硅膠G薄層板(10×20cm，Merck KgaA,Germany)；Agilent 1260 高效液相色譜儀(美國 Agilent 公司)；Agilent -C18柱(4.6×250mm，5μm)色譜柱。

1.2 試藥

柚皮苷(批號：110722-201111)、延胡索乙素(批號：110726-200208)、梔子苷(批號：110749-200410)；對照品(中國食品藥品檢定研究院)；延胡索(批號：120928-201007)、梔子(批號：120986-200504)；對照藥材(中國藥品生物制品檢定所)；接骨丹膠囊(沂南攀峰骨科醫(yī)院制劑室，批號：20131111，20131114，20131118)；甲醇、乙腈為色譜純，水為純化水，其余試劑為分析純。

2 定性鑒別

2.1 延胡索的薄層鑒別

取本品內(nèi)容物1.5g，加甲醇50mL，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10mL使溶解，加濃氨試液調(diào)至堿性，用乙醚振搖提取3次，每次10mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。再取延胡索乙素對照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液[2]。再取缺延胡索的樣品制備陰性對照溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述四種溶液各3～5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮(9∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置碘缸中約3min后取出，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性對照在相應(yīng)的位置上無熒光斑點(diǎn)，展開系統(tǒng)的分離效果良好，結(jié)果見圖1。

1．延胡索乙素對照品；2.延胡索對照藥材；3～4.樣品20131111；5～6.樣品20131114；7～8.樣品20131118；9.陰性對照

圖1 延胡索的薄層鑒別

2.2 梔子的薄層鑒別

取本品內(nèi)容物1g，加50%甲醇10mL，超聲處理40min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取梔子對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。再取梔子苷對照品，加乙醇制成每1mL含3mg的溶液，作為對照品溶液[2]。再取缺梔子的樣品制備陰性對照溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述四種溶液各3μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶5∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對照在相應(yīng)的位置上無斑點(diǎn)，展開系統(tǒng)的分離效果良好，結(jié)果見圖2。

1．梔子苷對照品；2.梔子對照藥材；3～4.樣品20131111；5～6.樣品20131114；7～8.樣品20131118；9.陰性對照

圖2 梔子的薄層鑒別

2 柚皮苷含量測定

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Agilent SB-C18 柱 (5μm，4.6×250mm)；以甲醇-冰醋酸-水(33∶2∶65)為流動相；柱溫：35℃。理論板數(shù)按柚皮苷峰計算應(yīng)不低于3000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取柚皮苷對照品16.88mg，置200mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取20mL，置50mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品適量(批號：20131111)，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入25mL甲醇，稱定重量，加熱回流1h，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系的考察

分別精密吸取對照品溶液各1,2,4,6,8μL，注入液相色譜儀，測定峰面積。以柚皮苷對照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y =1720.540X +6.0612，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。結(jié)果表明，柚皮苷進(jìn)樣量在0.03146～0.2517μg之間進(jìn)樣量與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.5 儀器精密度試驗

精密吸取柚皮苷對照品溶液(0.03146mg/mL)5μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，測其峰面積。結(jié)果柚皮苷峰面積均值為278.5，RSD值為1.25%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.6 樣品穩(wěn)定性試驗

取本品適量(批號：20131111)，制成供試品溶液。每隔4小時進(jìn)樣一次，每次5μL，測定柚皮苷的峰面積，共考察24h，以觀察供試品溶液在檢測過程中待測成分的穩(wěn)定性。結(jié)果峰面積均值為221.351，RSD值為0.59%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好，能夠滿足測定需要。

2.7 方法重復(fù)性考察

平行制備6份供試品溶液,分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5μL，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)法計算。結(jié)果樣品中柚皮苷的平均含量為0.378mg/粒，RSD值為0.6%，表明含量測定方法的重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗

取6份已知含量的樣品(批號：20131111)，柚皮苷的含量為0.38mg/粒，精密稱定，每份中精密加入稀釋前柚皮苷對照品溶液5mL，按2項下的色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果見表1。

表1 柚皮苷加樣回收率考察結(jié)果

試驗結(jié)果表明，測定方法的回收率良好。

2.9 專屬性試驗

陰性對照溶液的制備：取處方中除去骨碎補(bǔ)、枳殼的其他藥味，按處方比例制成缺骨碎補(bǔ)、枳殼陰性對照樣品，照供試品溶液的制備方法制得陰性對照溶液，即得。

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各5μL，注入液相色譜儀進(jìn)行測定。結(jié)果供試品色譜中，在與對照品色譜保留時間相同的位置上，有相應(yīng)色譜峰，而陰性對照色譜中無相應(yīng)色譜峰。說明處方中其他藥味對測定結(jié)果無干擾。見圖3。

A.柚皮苷對照品；B.接骨丹膠囊樣品；E.陰性樣品

圖3 RP-HPLC色譜圖2.10 樣品測定

按本方法的測定條件，對所收集到的3批樣品進(jìn)行測定，結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果

3 討論

接骨丹膠囊原標(biāo)準(zhǔn)中，采用當(dāng)歸、川芎的薄層色譜鑒別，而從接骨丹膠囊的處方組成來看，共有28味中藥材，僅1個薄層色譜鑒別項目，無法從鑒別上覆蓋該制劑的專屬性鑒別。因此，在考慮處方組成以及鑒別可操作性的基礎(chǔ)上，共增加梔子、延胡索2個薄層色譜鑒別項目，并以接骨丹膠囊中對接骨具有較大功能貢獻(xiàn)的骨碎補(bǔ)為定位目標(biāo)，增加了柚皮苷的含量測定[3]，增強(qiáng)了該制劑的專屬性鑒別。

實(shí)驗中發(fā)現(xiàn)在梔子的薄層色譜鑒別中，梔子樣品溶液過濾與取上清液時，過濾溶液點(diǎn)樣效果較上清液好，提示點(diǎn)樣時采用過濾溶液。實(shí)驗中考察了采用超聲30,45,60min，加熱回流60,120,180min分別處理樣品，結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲結(jié)果與回流結(jié)果有比較明顯的差異，而回流60min與120min和180min無明顯差異，綜合考慮選擇回流60min提取樣品。本課題試驗了乙腈與磷酸水溶液、甲醇與冰醋酸水溶液，結(jié)果表明乙腈-磷酸水溶液流動相的峰型在平均柱效的前提下容易出現(xiàn)拖尾，而甲醇流動相系統(tǒng)則表現(xiàn)出峰型對稱，分離效果好，柱效高，故最終采用甲醇-冰醋酸水溶液流動相。

[1] 魏 海,付艷敏,李伯軍.麝香接骨丹質(zhì)量研究標(biāo)準(zhǔn)[J].長春中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2002,18(3):55-56.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:130，231-239.

[3] 林 葳,胡健敏,陳恩瑜.HPLC測定接骨丹片中柚皮苷的含量[J].海峽藥學(xué),2009,21(12):96-97.

(本文文獻(xiàn)格式：耿燕楠，崔維剛，周利章，等.接骨丹膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].山東化工，2017，46(08)：90-92，97.)

Quality Control of Jiegudan Capsules

GengYannan1,CuiWeigang2,ZhouLizhang2，ShiJunying3

(1. Affiliated Hospital of ShanDong university of traditional chinese medicine, Jinan 250011,China;,2. Linyi Food and Drug Inspecting and Testing CenterLinyi 276001, China;,3.Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355,China)

Objective： To establish a method for the quality control of Jiegudan Capsules.Method： Radix Corydalis Rhizoma and Fructus Gardeniae in Jiegudan Capsules were identified by TLC. The content of naringin was determined by HPLC. The chromatographic conditions were: Agilent Cl8 column, mobile phase being methanol-glacial acetic acid-water (33:2:65), and the detection wavelength at 283 nm. Results： The qualitative identification with TLC was specific. The linear ranges of naringin were 0.03146μg～0.2517μg( r =0.9999)，the average recovery was 98.17%.Conclusion： This method is sensitive, stable and accurate. It can be used for the quality control of Jiegudan Capsules.

Jiegudan capsules; TLC; naringin HPLC

2017-03-03

耿燕楠(1985—)，女，山東青島人，主管藥師，碩士研究生學(xué)位，主要從事中藥質(zhì)量控制和藥理學(xué)研究。

R283.6；R927.2

A

1008-021X(2017)08-0090-03