T淋巴細胞聯合血漿細胞因子診斷兒童ITP的研究*

江南靜，雷勛明，龐 英，朱書瑤，皮光環，陳 艾

(四川省婦幼保健院/四川省婦女兒童醫院/成都醫學院附屬婦女兒童醫院兒科，成都 600031)

特發性血小板減少性紫癜(ITP)為一種以血小板減少為表現的自身免疫性疾病，該病可導致患兒出現內臟、皮下、顱內等多部位急性出血，嚴重者可危及患兒生命[1-2]。據統計兒童出血性疾病中約有70%是因ITP引起，目前對于該病的發病機制尚未完全明確，近年來隨著免疫學、分子生物學等學科的發展，發現ITP存在自身免疫功能異常導致患兒體內產生血小板抗體，使血小板被大量破壞而致血小板水平下降可能是該病的發生原因之一[3-4]。目前國內對于ITP的診斷雖有標準，但需要進行骨髓穿刺檢查，可對患兒機體造成較大的創傷，因此有必要尋找創傷性更小的檢測指標[5-6]。本研究旨在通過分析T淋巴細胞亞群及血漿細胞因子檢測指標聯合檢測對兒童ITP診斷價值，以期為該病的臨床診斷提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年2月至2020年9月本院接診的血小板減少的住院患兒92例，其中男55例，女37例。納入標準：(1)連續2次以上檢測顯示血小板計數(PLT)<100×109/L；(2)初次患病；(3)采血前未接受免疫抑制治療；(4)患兒家屬已獲知情同意。排除標準：(1)人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體檢查陽性者；(2)采血前4周內有輸血、疫苗接種者。本研究經醫院論理委員會審核并通過。

1.2 方法

1.2.1檢測T淋巴細胞亞群及血漿細胞因子水平

患兒在入院24 h內抽取空腹外周靜脈血5 mL，其中2 mL全血采用美國BD公司的FACS Calibur型流式細胞儀檢測CD3+、CD4+及CD8+水平。另外3 mL采用日立公司生產的7600型全自動血液生化分析儀檢測白細胞介素(IL)-2、IL-4及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平。

1.2.2ITP診斷標準

參照《諸福棠實用兒科學(第8版)》[7]的規定：經2次以上檢測血常規顯示PLT 100×109/L，脾臟無增大或僅有輕度增大，骨髓檢查顯示巨核細胞增多或正常，有成熟障礙，具有以下5項中的任一點：(1)潑尼松治療有效；(2)切脾治療有效；(3)人體產生血小板相關免疫球蛋白G(PAIgG)增多；(4)人血小板相關補體3(PAC3)增多；(5)血小板壽命測定縮短；除外繼發性血小板減少癥。根據ITP診斷結果將患兒分為兩組，符合ITP診斷者為ITP組，不符合ITP診斷者為非ITP組，比較兩組患兒T淋巴細胞亞群及血漿細胞因子水平，并以受試者工作特征(ROC)曲線評估各指標單獨檢測與聯合檢測對ITP的診斷價值。

1.3 統計學處理

2 結 果

2.1 兩組患者基線資料比較

92例患兒中共62例(67.39%)被診斷為ITP，兩組患兒性別、年齡、病程、PLT水平比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組患兒基線資料比較

2.2 兩組患兒T淋巴細胞亞群比較

ITP組患兒CD3+及CD4+水平均低于非ITP組，CD8+水平高于非ITP組，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組患兒T淋巴細胞亞群比較

2.3 兩組患兒血漿細胞因子檢測指標比較

ITP組患兒血漿IL-4水平低于非ITP組，ITP組患兒IL-2、TNF-α水平高于非ITP組，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組患兒血漿細胞因子檢測指標比較

2.4 ROC曲線分析

ROC曲線分析結果顯示，CD3+、CD4+、CD8+、IL-2、IL-4、TNF-α對兒童ITP的截斷值分別為59.13%、26.04%、24.08%、4.05 pg/mL、3.74 pg/mL、4.19 pg/mL；曲線下面積(AUC)分別為0.883、0.528、0.806、0.875、0.759、0.506。六者聯合診斷(指聯合檢測時CD3+、CD4+、IL-4其中1個指標低于截斷值或CD8+、IL-2、TNF-α其中1個指標低于截斷值即判斷為ITP)的AUC為0.932，其診斷效能高于各指標單獨檢測(Z=5.142、4.338、4.882、3.957、4.226、3.921，P=0.001、0.009、0.003、0.017、0.011、0.019)，見表4。

表4 ROC曲線分析結果

3 討 論

兒童為ITP的高發人群，該病起病較為隱匿，在疾病早期主要以散在皮膚出血點及鼻衄、牙齦出血等較輕的出血癥狀為表現，在急性期可出現發熱、惡寒并有突然發起廣泛而嚴重的皮膚黏膜紫癜等癥狀，此類紫癜可出現于任何部位的皮膚或黏膜，嚴重者可對患兒的生命造成威脅[8-9]。過去較長時間被認為ITP是一種不明原因的血小板減少而引起的出血性疾病，近年來隨著對該病的研究，發現此類患兒多有體液免疫異常的表現，同時研究發現細胞因子網絡失調也可能是ITP發生的分子生物學基礎之一[10]。ITP患兒因自身抗原異常表達而激活自身反應性T淋巴細胞亞群，使體內血小板抗體產生增加而致血小板被大量破壞使血小板水平下降；加上巨核細胞的增殖分化及其成熟后生成血小板均受細胞因子的調控，因此，可選擇T淋巴細胞亞群及血漿細胞因子作為兒童ITP的診斷指標[11-12]。

CD3+T細胞主要包括CD4+、CD8+T細胞2個亞群，CD4+T細胞為T輔助/誘導細胞表面標志，可輔助T細胞的分化并有協助B細胞產生抗體的作用，同時CD4+T細胞為機體免疫反應中的主要反應細胞，可增強及擴大其他免疫細胞的功能，因而CD4+T細胞水平升高提示患兒免疫功能較強[13]。CD8+T細胞則為T抑制/細胞毒性細胞的表面標志，其具有抑制T細胞的活化及抑制B細胞產生抗體的作用[14]。本研究結果顯示，ITP組患兒CD3+、CD4+水平均低于非ITP組，CD8+水平高于非ITP組，差異均有統計學意義(P<0.05)，與相關研究結果相一致[15]。CD4+T細胞根據產生細胞因子的不同可為Th0、Th1、Th2等細胞，對于ITP患者Th1及Th2的研究較多，研究證實ITP患兒體內Th1/Th2比例水平升高，Th1細胞主要介導細胞免疫，可刺激CD8+T細胞反應而產生TNF-α、IL-2等細胞因子而激活巨噬細胞對血小板的吞噬作用，加速血小板破壞。Th2細胞則主要產生IL-4等細胞因子，可介導體液免疫，限制抗原遞呈細胞活性而起到增強體液免疫的作用[16]。

IL-2可參與免疫應答，同時可促進Th1及Th2細胞的增生并可促進自然殺傷(NK)細胞的細胞毒性及其他細胞因子的分泌；白細胞介素-4則主要由單核巨噬細胞及Th2所分泌，可起到促進B細胞增生分化及促進抗體分泌的作用，并可提高機體免疫力；TNF-α主要由單核巨噬細胞及經活化的T細胞產生，適當的TNF-α水平可對機體起保護作用，但過量的TNF-α反而可對機體造成損傷[17]。本研究對兩組患兒細胞因子水平比較，結果顯示ITP組患兒血漿IL-4水平低于非ITP組，IL-2、TNF-α水平高于非ITP組，差異均有統計學意義(P<0.05)。正常情況下IL-2、TNF-α水平均較低，當出現外源性感染時可使機體因感染而在免疫應答過程中產生復合物而刺激單核-巨噬細胞合成并釋放出大量的IL、TNF-α等促炎因子，上述炎癥因子可參與ITP的發病過程[18-19]。本研究ROC曲線分析結果顯示，CD3+、CD4+、CD8+、IL-2、IL-4、TNF-α對兒童ITP的截斷值分別為59.13%、26.04%、24.08%、4.05 pg/mL、3.74 pg/mL、4.19 pg/mL；AUC分別為0.883、0.528、0.806、0.875、0.759、0.506。六者聯合診斷的AUC為0.932，其診斷效能高于各指標單獨檢測(P<0.05)，提示T淋巴細胞亞群及血漿細胞因子聯合檢測可從患兒的免疫功能及炎性反應的角度反映患兒的病情，可為ITP的診斷提供更多的參考依據，本研究所采取的診斷方法與當前ITP診斷的金標準相比，不進行骨髓穿刺檢查，對患兒創傷較小，T淋巴細胞亞群及血漿細胞因子聯合檢測可作為ITP早期篩查手段而提高兒童ITP的早期診斷率[20]。

綜上所述，CD3+、CD4+、CD8+、IL-2、IL-4、TNF-α均可作為兒童ITP的診斷指標，聯合檢測可提高ITP診斷效能。上述指標在使用時注意需與血常規指標、臨床診斷相結合，發揮其輔助診斷作用才能有效提高兒童ITP的早期診斷效率。