三棱含藥血清對脂多糖誘導人臍靜脈內皮細胞損傷的保護作用研究

時海燕，孫 蓉，徐 男

三棱含藥血清對脂多糖誘導人臍靜脈內皮細胞損傷的保護作用研究

時海燕1，孫 蓉2，徐 男3*

1. 山東第一醫科大學第一附屬醫院（山東省千佛山醫院）臨床藥學，山東省兒童藥物臨床評價與研發工程技術研究中心，山東省醫藥衛生臨床藥學重點實驗室，山東 濟南 250014 2. 山東大學 高等醫學研究院，山東 濟南 250014 3. 山東省中醫藥研究院 中藥制劑研究所，山東 濟南 250014

研究三棱含藥血清對脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）誘導人臍靜脈內皮細胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）損傷的影響。SPF級雄性SD大鼠隨機分為空白組和三棱組，制備空白血清及含藥血清。建立LPS誘導的HUVEC損傷模型，設置對照組、模型組、5%空白血清組和三棱含藥血清（1%、3%、5%）組，采用MTT法檢測三棱含藥血清對細胞活力的影響；采用熒光顯微鏡分析各組細胞線粒體膜電位（mitochondrial membrane potential，MMP）和活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平；采用ELISA法檢測各組細胞上清液乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（cystein-asparate protease-1，Caspase-1）活性和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6、IL-17、組織因子（tissue factor，TF）、血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）、凝血酶調節蛋白（thrombomodulin，TM）水平；采用Western blotting檢測各組細胞微管相關蛋白1輕鏈3 II（microtubule-associated protein l light chain 3 II），LC3 II）、Beclin-1、Parkin和PINK蛋白表達情況；采用qRT-PCR法測定各組細胞、和NOD樣受體熱蛋白結構域相關蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，）mRNA表達情況。與對照組比較，模型組細胞活力、MPP顯著降低（＜0.01），細胞內ROS水平顯著升高（＜0.01），上清液LDH、Caspase-1活性和TNF-α、IL-6、IL-17、TF、vWF、TM水平均顯著升高（＜0.01），LC3 II、Beclin-1、Parkin和PINK蛋白表達水平均顯著升高（＜0.01），、和mRNA表達水平顯著升高（＜0.01）。與模型組比較，三棱含藥血清組細胞活力、MPP顯著升高（＜0.01），細胞內ROS水平顯著降低（＜0.05、0.01），上清液LDH、Caspase-1活性和TNF-α、IL-6、IL-17、TF、vWF、TM水平均顯著降低（＜0.01），LC3 II、Beclin-1、Parkin和PINK蛋白表達水平均顯著降低（＜0.01），、和mRNA表達水平顯著降低（＜0.01）。三棱含藥血清具有內皮細胞保護作用，可以降低LPS誘導的細胞氧化損傷和炎癥，降低凝血級聯反應。

三棱；含藥血清；人臍靜脈內皮細胞；脂多糖；氧化損傷；炎癥

血栓性疾病已超過惡性腫瘤成為威脅人類健康和生命的重大疾病。現代抗血栓藥物具有起效迅速的優點，但作用機制單一，長期使用易產生藥物抵抗和增加出血風險等不良反應。三棱為黑三棱科植物黑三棱Buch.-Ham.的干燥塊莖，具有破血行氣、消積止痛等功效，主要含有苯丙素類、黃酮類、蒽醌類、有機酸類、生物堿類、甾體類、揮發油類、二肽類等成分[1-3]，被譽為“破血逐瘀之要藥”“破血之王”。現代藥理學研究發現，三棱水煎劑及其不同炮制品具有顯著的抗血小板聚集、抗凝及抗血栓活性[1]。本課題組前期亦發現三棱總提取物和醋酸乙酯部位能顯著增加斑馬魚血栓模型的心臟染色強度，確證了三棱的抗血栓療效[4]，但其抗血栓的作用機制尚未有研究。本研究從細胞活性、細胞自噬、炎癥損傷、氧化應激、凝血功能5個層面，研究三棱含藥血清對脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）誘導人臍靜脈內皮細胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）損傷的影響，為抗血栓藥物的開發提供依據。

1 材料

1.1 動物及細胞株

SPF級SD雄性大鼠20只，體質量（300±20）g，4周齡，購自濟南朋悅實驗動物繁育有限公司，許可證號SCXK（魯）20190003。動物實驗經山東第一醫科大學第一附屬醫院（山東省千佛山醫院）倫理委員會批準，批準號為［2021］動倫審字（S845）號。HUVEC細胞株購自無錫菩禾生物醫藥技術有限公司。

1.2 藥材

三棱購自山東百味堂中藥飲片有限公司，經山東省中醫藥研究院中藥資源研究室靳光乾研究員鑒定為黑三棱科植物黑三棱Buch.-Ham.削去外皮的干燥塊莖。取三棱藥材1 kg，粉碎至粗粉，用80%乙醇浸提2次，合并提取液，減壓濃縮，聚酰胺柱色譜純化，濃縮定容至100 mL得三棱提取物，主要成分為酚類物質，其中阿魏酸、對羥基苯甲酸、原兒茶酸質量濃度分別為0.91、0.80、1.22 mg/mL。

1.3 藥品與試劑

LPS（批號L8880）、線粒體膜電位檢測試劑盒（批號M8650）、活性氧（reactive oxygen species，ROS）檢測試劑盒（批號CA1410）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（cystein-asparate protease-1，Caspase-1）活性檢測試劑盒（批號BC3810）購自北京索萊寶科技有限公司；SYBR Green PCR試劑盒（批號F-415XL）、逆轉錄試劑盒（批號K1622）購自美國賽默飛公司；乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）測定試劑盒（批號A020-2）購自南京建成生物工程研究所；BCA蛋白定量試劑盒（批號BL521A）購自Biosharp公司；人組織因子（tissue factor，TF）ELISA試劑盒（批號YB-TF-Hu）、人血管性血友病因子（von Willebrand factor，vWF）ELISA試劑盒（批號YB-vWF-Hu）、人凝血酶調節蛋白（thrombomodulin，TM）ELISA試劑盒（批號YB-TM-Hu）購自上海鈺博生物科技有限公司；人腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）ELISA試劑盒（批號JYM0110Hu）、人白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）ELISA試劑盒（批號JYM0140Hu）、人IL-17 ELISA試劑盒（批號JYM0082Hu）購自武漢基因美科技有限公司；胎牛血清、青-鏈霉素購自上海雙洳生物科技有限公司；RPMI 1640培養基購自美國Hyclone公司；MTT購自美國Sigma公司；氯仿、異丙醇、無水乙醇購自上海國藥；微管相關蛋白1輕鏈3 II（microtubule-associated protein l light chain 3 II），LC3 II）兔抗（批號NB100-2220）購自美國Novus公司；Beclin 1兔抗（批號ab210498）、Parkin鼠抗（批號ab77924）、PINK1兔抗（批號ab23707）購自英國Abcam公司；GAPDH鼠抗（批號60004-1-Ig）購自美國Proteintech公司；HRP標記的山羊抗兔IgG抗體（批號ZB2301）、HRP標記的山羊抗小鼠IgG抗體（批號ZB2305）購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.4 儀器

MK3型酶標儀、8000型細胞培養箱、移液器（美國賽默飛公司）；7500型qRT-PCR儀（美國ABI公司）；Qilinbeier TS-1000型搖床（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）；IX71型倒置拍照顯微鏡（日本奧林巴斯公司）；TDZ4-WS型低速離心機（上海盧湘儀離心機儀器有限公司）；3K15型低溫冷凍離心機（美國Sigma公司）；電泳儀（美國Bio-Rad公司）；PS-9型電轉儀（大連競邁科技有限公司）；HI1210型水浴鍋（德國Leica公司）；ChemiScope 5300 Pro一體式化學發光成像儀（上海勤翔科學儀器有限公司）。

2 方法

2.1 動物分組、給藥及含藥血清的制備

20只SPF級SD雄性大鼠，隨機分為空白組（去離子水）和三棱組，每組10只。三棱組ig三棱提取物（5 mL/kg），2次/d，連續2 d。第4次給藥后2 h，麻醉大鼠，心尖取血，靜置1 h，3000×離心10 min，分離血清，?80 ℃冰箱中保存備用，用于細胞給藥前經0.22 μm微孔濾膜濾過除菌。

2.2 細胞培養

HUVEC用含10%胎牛血清和1%青-鏈霉素的RPMI 1640完全培養基，于37 ℃、5% CO2、飽和濕度的培養箱中培養。

2.3 三棱含藥血清對細胞活力的影響

取處于對數生長期的HUVEC，以1×105/mL接種于96孔板，每孔100 μL，培養24 h。設置對照組、模型組、5%空白血清組、1%含藥血清組、3%含藥血清組和5%含藥血清組。用完全培養基稀釋LPS，使其終質量濃度為1 μg/mL，除對照組外，其余各組加入LPS；各給藥組加入以含10%胎牛血清的RPMI 1640完全培養基稀釋的血清，培養48 h。每孔加入10 μL MTT，避光孵育3～4 h，棄去上清液，加入150 μL二甲基亞砜，室溫振蕩孵育10 min；采用酶標儀測定492 nm處的吸光度（）值。

2.4 三棱含藥血清對細胞線粒體膜電位（mitochondrial membrane potential，MMP）的影響

按“2.3”項下方法進行分組和給藥，培養48 h。棄去培養液，PBS溶液沖洗1遍，分別加入2 μmol/L JC-10（線粒體膜電位熒光探針），37 ℃避光孵育30 min，PBS溶液洗滌細胞3次，DAPI染核，于熒光顯微鏡下觀察并拍照。

2.5 三棱含藥血清對細胞ROS的影響

按“2.3”項下方法進行分組和給藥，培養48 h。按1∶1000用無血清培養基稀釋DCFH-DA探針，使終濃度為10 μmol/L，去除細胞培養液，加入DCFH-DA，37 ℃孵育20 min，用10%胎牛血清洗滌細胞3次，以充分去除未進入細胞內的DCFH-DA，于熒光倒置顯微鏡下觀察并拍照。

2.6 三棱含藥血清對細胞上清液LDH、Caspase-1活性和TNF-α、IL-6、IL-17、TF、vWF、TM水平的影響

取處于對數生長期的HUVEC，以1×105/mL接種于96孔板，每孔100 μL，培養24 h。設置對照組、模型組、5%空白血清組和5%含藥血清組。用完全培養基稀釋LPS，使其終質量濃度為1 μg/mL，除對照組外，其余各組加入LPS；各給藥組加入以含10%胎牛血清的RPMI 1640完全培養基稀釋的血清，培養48 h。收集上清液，按照試劑盒說明書測定LDH、Caspase-1活性和TNF-α、IL-6、IL-17、TF、vWF、TM水平。

2.7 三棱含藥血清對細胞LC3II、Beclin-1、Parkin和PINK蛋白表達的影響

收集“2.6”項下各組細胞，提取蛋白，采用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白質量濃度，加入5×SDS上樣緩沖液，混合均勻后，沸水浴5 min使蛋白變性。蛋白樣品經十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉至PVDF膜，加入5%脫脂牛奶，37 ℃封閉2 h；分別加入LC3II、Beclin-1、Parkin、PINK和GAPDH抗體，4 ℃孵育過夜；TBST沖洗3次，1 min/次，加入相應二抗（1∶5000），37 ℃孵育l h；TBST沖洗3次，5 min/次，加入ECL發光液顯影，采用一體式化學發光儀拍攝。

2.8 三棱含藥血清對細胞IL-1β、IL-18和NOD樣受體熱蛋白結構域相關蛋白3（NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3，NLRP3）mRNA表達的影響

按“2.6”項下方法進行分組和給藥，收集細胞，按照試劑盒說明書提取細胞總RNA并合成cDNA，進行qRT-PCR分析。引物序列見表1。

表1 引物序列

Table 1 Primer sequences

引物序列(5’-3’) IL-1βF: GAATCTGTACCTGTCCTGCGTGTTG R: GTCAGTTATATCCTGGCCGCCTTTG NLRP3F: AGCACTAATCAGAATCTCACGCACC R: ACTTCACAGAACATCATGACCCCCA IL-18F: GTATAAAGATAGCCAGCCTAGAGGT R: TTTCAAAATGAGTTTAAAAAGGTCT GAPDHF: AGAAGGCTGGGGCTCATTTG R: AGGGGCCATCCACAGTCTTC

2.9 統計學處理

3 結果

3.1 三棱含藥血清對LPS誘導的細胞活力的影響

如表2所示，與對照組相比，模型組細胞活力顯著降低（＜0.01）；與模型組比較，含藥血清組細胞活力均顯著升高（＜0.01），且呈劑量相關性。

3.2 三棱含藥血清對LPS誘導的細胞MMP的影響

MMP較高時，JC-10聚集在線粒體的基質中，形成聚合物，可以產生紅色熒光；MMP較低時，JC-10不能聚集在線粒體的基質中，此時JC-10為單體，呈現綠色熒光。MMP下降是細胞凋亡早期的一個標志性事件。如圖1所示，與對照組比較，模型組細胞MMP顯著下降（＜0.01），主要呈現綠色熒光。與模型組比較，含藥血清組細胞MMP呈現不同程度地升高（＜0.01），紅色熒光逐漸增強，綠色熒光逐漸減弱，且呈劑量相關性。

表2 三棱含藥血清對LPS誘導的細胞活力的影響(, n = 3)

Table 2 Effect of Sparganii Rhizoma-containing serum on cell viability induced by LPS(, n = 3)

組別A值 對照0.849±0.015 模型0.493±0.010** 5%空白血清0.499±0.015 1%含藥血清0.535±0.014## 3%含藥血清0.641±0.013## 5%含藥血清0.740±0.012##

與對照組比較：**＜0.01；與模型組比較：##＜0.01，下表同

**< 0.01control group;##< 0.01model group, same as below tables

3.3 三棱含藥血清對LPS誘導的細胞ROS的影響

如圖2所示，與對照組比較，模型組細胞內ROS熒光強度顯著升高（＜0.01）；與模型組比較，含藥血清組細胞內ROS熒光強度呈現不同程度地降低（＜0.05、0.01），且呈劑量相關性。

3.4 三棱含藥血清對LPS誘導的細胞上清液LDH、Caspase-1活性和TNF-α、IL-6、IL-17、TF、vWF、TM水平的影響

如表3所示，與對照組比較，模型組細胞上清液LDH、Caspase-1活性和TNF-α、IL-6、IL-17、TF、vWF、TM水平均顯著升高（＜0.01）；與模型組比較，含藥血清組細胞上清液中LDH、Caspase-1活性和TNF-α、IL-6、IL-17、TF、vWF、TM水平均顯著降低（＜0.01）。

3.5 三棱含藥血清對LPS誘導的細胞LC3 II、Beclin-1、Parkin和PINK蛋白表達的影響

如圖3和表4所示，與對照組比較，模型組細胞LC3 II、Beclin-1、Parkin和PINK蛋白表達水平均顯著升高（＜0.01）；與模型組比較，含藥血清組細胞LC3 II、Beclin-1、Parkin和PINK蛋白表達水平均顯著降低（＜0.01）。

3.6 三棱含藥血清對LPS誘導的細胞IL-1β、IL-18和NLRP3 mRNA表達的影響

如表5所示，與對照組比較，模型組細胞、和mRNA表達水平顯著升高（＜0.01）；與模型組比較，含藥血清組細胞、和mRNA表達水平均顯著降低（＜0.01）。

與對照組比較：**P＜0.01；與模型組比較：##P＜0.01

與對照組比較：**P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.05 ##P＜0.01

表3 三棱含藥血清對LPS誘導的細胞上清液LDH、Caspase-1活性和TNF-α、IL-6、IL-17、TF、vWF、TM水平的影響(, n = 3)

Table 3 Effect of Sparganii Rhizoma-containing serum on LDH, Caspase-1 activities and TNF-α, IL-6, IL-17, TF, vWF, TM levels in supernatant of cells induced by LPS(, n = 3)

組別LDH/(U·L?1)Caspase-1/%TNF-α/(pg·mL?1)IL-6/(ng·L?1) 對照217.95±11.13100.00174.24±5.2481.09±3.13 模型376.41±12.44**176.12±11.53**286.04±9.55**150.46±2.38** 5%空白血清380.51±7.59173.59±7.05288.13±7.51153.54±3.73 5%含藥血清257.95±7.27##119.55±4.01##229.10±9.39##117.66±2.84## 組別IL-17/(pg·mL?1)TF/(ng·L?1)vWF/(U·L?1)TM/(μg·L?1) 對照187.08±10.3682.46±3.00254.61±4.1923.57±1.91 模型409.06±11.97**124.52±3.72**332.39±10.05**32.90±0.75** 5%空白血清405.19±13.15125.71±3.15335.17±7.2633.11±0.56 5%含藥血清282.49±8.74##108.45±3.90##289.06±3.47##28.84±0.71##

圖3 三棱含藥血清對LPS誘導的細胞LC3II、Beclin-1、Parkin和PINK蛋白表達的影響

表4 三棱含藥血清對LPS誘導的細胞LC3 II、Beclin-1、Parkin和PINK蛋白表達的影響(, n = 6)

Table 4 Effect of Sparganii Rhizoma-containing serum on LC3 II, Beclin-1, Parkin and PINK protein expressions of cells induced by LPS(, n = 6)

組別蛋白相對表達量LC3 IIBeclin-1ParkinPINK 對照1.00±0.081.00±0.061.00±0.061.00±0.05 模型3.08±0.08**2.03±0.06**2.78±0.06**1.95±0.06** 5%空白血清3.11±0.081.98±0.062.82±0.061.85±0.05 5%含藥血清1.73±0.09##1.54±0.07##1.74±0.07##1.54±0.06##

表5 三棱含藥血清對LPS誘導的細胞IL-1β、IL-18和NLRP3 mRNA表達的影響(, n = 6)

Table 5 Effect of Sparganii Rhizoma-containing serum on IL-1β, IL-18 and NLRP3 mRNA expressions of cells induced by LPS(, n = 6)

組別mRNA相對表達量 IL-1βNLRP3IL-18 對照1.00±0.071.01±0.121.00±0.03 模型3.75±0.19**4.94±0.16**3.67±0.12** 5%空白血清3.87±0.224.92±0.363.78±0.09 5%含藥血清1.70±0.18##2.28±0.17##1.97±0.22##

4 討論

血管內皮細胞結構或功能異常，均可使凝血和抗凝血平衡發生紊亂，啟動血栓形成，血小板繼而在損傷的血管內膜外黏附、聚集，導致血小板活化及釋放反應。血栓形成和炎癥傳統上被視為是不同的互補過程，認為血栓是過度的止血反應導致形成閉塞的血凝塊，炎癥是對有害刺激的復雜保護性免疫反應，然而，隨著炎癥刺激血栓形成，進而血栓形成促進炎癥形成的不斷認識，血栓與炎癥的功能依賴已經變得逐漸明確[5]。

本課題組前期采用網絡藥理學分析了三棱抗血栓形成的分子靶標，主要包括蛋白激酶Cδ（protein kinase Cδ，PRKCD）、磷酸腺苷激活的蛋白激酶α2催化亞基（adenosine monophosphate-activated protein kinase catalytic aubunit α2，PRKAA2）、Na+,K+三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）酶1α1亞基（Na+,K+ATPase α1，ATP1A1）、細胞色素C氧化酶亞基7C（cytochrome C oxidase subunit 7C，COX7C）等[6]。PRKAA2與PRKCD可激活腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）信號通路，AMPK進一步負性調控哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）[7]，UNC-51樣激酶1（uncoordinated 51 like kinase 1，ULK1）被激活，磷酸化Beclin-1的Ser14位點，由此提高空泡分選蛋白34（vacuolar protein-sorting 34，VPS34）復合體活性，誘導細胞自噬。ATP1A1可以激活磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）-蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）通路，同時Akt又是FOXO3a的上游調控關鍵因子，激活FOXO3a可負性調控mTOR，進一步誘導自噬[8]。適度的自噬有利于維持機體細胞內環境的穩態，以適應外環境的變化，而超負荷的刺激將誘發機體過度自噬，導致細胞功能紊亂，嚴重者甚至引發炎癥的瀑布性放大作用[9-11]。COX是參與機體氧化應激的重要蛋白。本研究結果顯示，三棱含藥血清可以顯著降低LPS誘導的細胞內ROS熒光強度，并呈劑量相關性，5%含藥血清抑制作用最為明顯；三棱含藥血清可以顯著下調線粒體自噬相關蛋白LC3 Ⅱ、Beclin-1、Parkin和PINK的表達，表明三棱含藥血清可以調控氧化應激及線粒體自噬。

線粒體自噬主要由線粒體氧化應激產生的ROS激活，同時，ROS亦是調控NLRP3炎癥小體活化的關鍵信號[12]，線粒體自噬調控線粒體質量，減少受損線粒體數目，從而防止ROS誘導的NLRP3炎癥小體活化[13-14]。NLRP3炎癥小體亦可調控細胞自噬，Caspase-1可通過切割自噬底物來負調控自噬水平[15]。同時，炎癥小體激活是導致血液凝結的觸發器，并誘導炎性細胞因子產生，上調凝血相關蛋白酶表達，產生凝血和炎癥反應。本研究結果表明，三棱含藥血清可顯著抑制細胞上清液中Caspase-1活性，下調、mRNA表達水平，顯著降低炎性因子TNF-α、IL-6、IL-17、IL-18和促栓因子TF、vWF、TM水平，提示三棱含藥血清經胃腸道吸收進入體內后的代謝產物可能通過調控細胞線粒體自噬-炎癥小體NLRP3通路，修復血管內皮細胞損傷，降低促栓因子表達，從而逆轉LPS誘導的血管內皮細胞損傷。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Protective effect of-containing serum on lipopolysaccharide-induced human umbilical vein endothelial cells injury

SHI Hai-yan1, SUN Rong2, XU Nan3

1. Shandong Medicine and Health Key Laboratory of Clinical Pharmacy, Shandong Engineering and Technology Research Center for Pediatric Drug Development, Department of Clinical Pharmacy, The First Affiliated Hospital of Shandong First Medical University & Shandong Provincial Qianfoshan Hospital, Jinan 250014, China 2. Institute of Advanced Medical Sciences, Shandong University, Jinan 250014, China 3. Institute of Traditional Chinese Medicine Preparation, Shandong Research Academy of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250014, China

To study the effect of Sanleng (, SR) medicated serum on lipopolysaccharides (LPS)-induced injury of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC).SPF male SD rats were randomly divided into blank group and SR group, blank serum and drug-containing serum were prepared. LPS-induced HUVEC injury model was established, and were divided into control group, model group, 5% blank serum group and SR medicated serum (1%, 3%, 5%) group, MTT method was used to detect the effect of SR medicated serum on cell viability. Fluorescence microscopy was used to analyze the mitochondrial membrane potential (MMP) and reactive oxygen species (ROS) levels of cells in each group; ELISA was used to detect lactate dehydrogenase (LDH), cystein-asparate protease-1 (Caspase-1) activities and tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-1β (IL-1β), IL-6, IL-17, tissue factor (TF), von Willebrand factor (vWF), thrombomodulin (TM) in supernatant of cells in each group. Western blotting was used to detect the protein expressions of microtubule-associated protein l light chain 3 II (LC3 II), Beclin-1, Parkin and PINK of cells in each group; qRT-PCR was used to detect the mRNA expressions of,and NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3 () of cells in each group.Compared with control group, cell viability and MPP in model group were significantly decreased (< 0.01), level of intracellular ROS was significantly increased (< 0.01), activities of LDH and Caspase-1 in the supernatant and TNF-α, IL-6, IL-17, TF, vWF, TM levels were significantly increased (< 0.01), LC3 II, Beclin-1, Parkin and PINK protein expression levels were significantly increased (< 0.01),,andmRNA expression levels were significantly increased (< 0.01). Compared with model group, cell viability and MPP in SR drug-containing serum group were significantly increased (< 0.01), level of intracellular ROS was significantly decreased (< 0.05, 0.01), activities of LDH and Caspase-1 in the supernatant and TNF-α, IL-6, IL-17, TF, vWF, TM levels were significantly decreased (< 0.01), protein expressions of LC3 II, Beclin-1, Parkin and PINK were significantly decreased (< 0.01),,andmRNA expression levels were significantly decreased (< 0.01).SR medicated serum has the protective effect of endothelial cells, which can reduce LPS-induced oxidative damage and inflammation, and reduce the coagulation cascade.

; medicated serum; human umbilical vein endothelial cells; lipopolysaccharide; oxidative damage; inflammation

R285.5

A

0253 - 2670(2022)07 - 2064 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.07.015

2021-11-22

山東省自然科學基金資助項目（ZR2015HL117）；山東省中醫藥科技發展計劃項目（2017-165）；山東省重點研發計劃項目（2017CXGC1308）；山東省自然科學基金重點項目（ZR2020KH017）；山東省高校中藥質量控制與全產業鏈建設協同創新中心項目（CYLXTCX2020-03，CYLXTCX2021-02）

時海燕，博士，主任藥師，從事中藥藥效物質與藥動學研究。E-mail: shihaiyan123@163.com

徐 男，博士，副研究員，從事中藥新藥開發與藥效物質研究。E-mail: 93679706@qq.com

[責任編輯 李亞楠]