M1型巨噬細胞水平與冠心病疾病嚴重程度及預后的相關性分析

刁中極 雷銳 殷實 劉鴻玲 劉擎

【摘要】 目的：探討M1型巨噬細胞水平與冠心病疾病嚴重程度及預后的相關性。方法：選取佳木斯市中心醫院2018年12月-2019年12月收治的65例冠心病患者作為研究對象，依照患者的病情嚴重程度，將其分為不穩定型心絞痛組（n=21）、急性心肌梗死組（n=18）和穩定型心絞痛組（n=26），另取30例健康者作為對照組，對比四組M1型巨噬細胞比例、可溶性超敏C反應蛋白（hs-CRP）、轉化生長因子-β1（TGF-β1）以及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的表達水平，并分析各項指標與冠心病嚴重程度的相關性。對所有患者隨訪1年，將發生心血管不良事件的21例患者設為預后不良組，將無心血管不良事件的44例患者設為預后良好組，對比兩組患者臨床各指標，并分析M1型巨噬細胞水平對冠心病的預后預測價值。結果：四組M1型巨噬細胞比例、hs-CRP、TGF-β1以及TNF-α的表達水平對比，差異均有統計學意義（P<0.05）;Spearman相關性分析結果顯示，M1型巨噬細胞、hs-CRP、TNF-α與冠心病嚴重程度均呈正相關（P<0.05），TGF-β1與冠心病嚴重程度呈負相關（P<0.05）;預后良好組與預后不良組患者性別、體質量指數（BMI）、TGF-β1和TNF-α表達水平對比，差異均無統計學意義（P>0.05），預后良好組與預后不良組患者年齡、吸煙、合并2型糖尿病情況、M1型巨噬細胞比例以及hs-CRP水平對比，差異均有統計學意義（P<0.05）;M1型巨噬細胞比例≥63.04%為冠心病的預后不良獨立因素（P<0.05）。結論：M1型巨噬細胞與冠心病的嚴重程度具有相關性，且年齡、吸煙、合并2型糖尿病情況、M1型巨噬細胞比例以及hs-CRP水平均為冠心病預后不良的相關因素，M1型巨噬細胞比例≥63.04%對冠心病的預后具有獨立預測價值，為冠心病不良心血管事件發生的獨立預測因子。

【關鍵詞】 M1型巨噬細胞 冠心病 不穩定型心絞痛 心肌梗死 疾病嚴重程度

Correlation between M1 Macrophage Level and Severity and Prognosis of Coronary Heart Disease/DIAO Zhongji， LEI Rui， YIN Shi， LIU Hongling， LIU Qing. //Medical Innovation of China， 2022， 19（04）： -165

[Abstract] Objective： To investigate the correlation between M1 macrophage level and severity and prognosis of coronary heart disease. Method： A total of 65 patients with coronary heart disease in Jiamusi Central Hospital from December 2018 to December 2019 were selected as the research objects. According to the severity of the disease， they were divided into unstable angina pectoris group （n=21）， acute myocardial infarction group （n=18）and stable angina pectoris group （n=26）. Another 30 healthy people were selected as the control group. The proportion of M1 macrophages， hs-CRP， TGF-β1 and TNF-α in the four groups were compared. The correlation between each index and the severity of coronary heart disease was analyzed. All patients were followed up for 1 year， 21 patients with cardiovascular adverse events were selected as poor prognosis group， and 44 patients without cardiovascular adverse events were selected as good prognosis group. The clinical indexes of the two groups were compared， and the predictive value of M1 macrophage level for coronary heart disease was analyzed. Result： There were significant differences in the proportion of M1 macrophages， hs-CRP ， TGF-β1 and TNF-α in the four groups （P<0.05）. Spearman correlation analysis showed that M1 macrophages， hs-CRP， TNF-α were positively correlated with the severity of coronary heart disease （P<0.05）， TGF-β1 was negatively correlated with the severity of coronary heart disease （P<0.05）; there were no significant differences in gender， body mass index （BMI）， TGF-β1 and TNF-α in patients between the good prognosis group and the poor prognosis group （P>0.05）. There were significant differences in age， smoking， type 2 diabetes mellitus， the proportion of M1 macrophages and hs-CRP level between the good prognosis group and the poor prognosis group （P<0.05）. The proportion of M1 macrophages ≥63.04% was an independent factor for poor prognosis of coronary heart disease （P<0.05）. Conclusion： M1 macrophages are related to the severity of coronary heart disease. Age， smoking， type 2 diabetes， the proportion of M1 macrophages and the level of hs-CRP are all related factors for the poor prognosis of coronary heart disease. The proportion of M1 macrophages ≥63.04% has independent predictive value for the prognosis of coronary heart disease and is an independent predictor of adverse cardiovascular events of coronary heart disease.

[Key words] M1 macrophage Coronary heart disease Unstable angina pectoris Miocardial infarction Disease severity

First-author’s address： Jiamusi Central Hospital， Heilongjiang Province， Jiamusi 154002， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2022.04.038

冠狀動脈粥樣硬化心臟病，簡稱冠心病，是一種常見的缺血性心臟病，主要由于供血不足或冠狀動脈狹窄所導致的器質性病變或心肌功能障礙。患者臨床上多表現為胸痛、胸悶等，嚴重者會出現心肌梗死。隨著社會老齡化進程加深，每年冠心病死亡人數高達100萬左右[1-2]。當前擇期經皮冠狀動脈介入治療（PCI）是治療冠心病的主要手段，但術后患者可能會出現惡性心律失常、血栓形成等不良事件，導致患者再次入院。據報道顯示，盡管冠心病治療和防治手段不斷改進，但是冠心病等心血管疾病依然是造成死亡的主要原因[3-4]。巨噬細胞分為M1型巨噬細胞和M2型巨噬細胞，研究發現M2型巨噬細胞在心肌梗死恢復期具有重要的作用，而且與患者的疾病嚴重程度具有明顯關系[5]。但是當前針對M1型巨噬細胞與冠心病嚴重程度及預后相關性的研究尚無明確定論。有研究發現，巨噬細胞M1與多種疾病，如病毒、腫瘤導致的腎病、肥胖和腦損傷具有一定關系[6-7]。因此，為了提升冠心病的治療效果，降低不良心血管事件發生率與死亡率，本研究選取佳木斯市中心醫院2018年12月-2019年12月共收治的65例冠心病患者作為研究對象，探討M1型巨噬細胞水平與冠心病疾病嚴重程度及預后的相關性，具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取佳木斯市中心醫院2018年

12月-2019年12月收治的65例冠心病患者作為研究對象。納入標準：所有患者通過冠狀動脈造影、心電圖等檢查符合不穩定型心絞痛、急性心肌梗死或者穩定型心絞痛的診斷標準;符合經皮冠狀動脈介入術治療指征。排除標準：合并有心血管、肝、腎和造血系統等嚴重原發性疾病，精神病患者;意識模糊、語言表達不清者;無法進行交流者。依照患者的病情嚴重程度，將其分為不穩定型心絞痛組（n=21）、急性心肌梗死組（n=18）和穩定型心絞痛組（n=26）。另取佳木斯市中心醫院2018年12月-2019年12月30例健康者作為對照組。納入標準：與冠心病患者在性別、年齡、民族、生活地域等基本匹配的健康者。排除標準：合并精神病者;心理障礙、情緒障礙者;不配合、依從性差者。所有患者對本研究知情并簽署同意書;本研究經本院倫理學委員會批準。

1.2 方法 所有試驗對象在入院之后分別記錄性別、年齡、體重、身高、血壓、疾病史、吸煙史等。患者入院后第2天清晨空腹采取靜脈血，對照組患者在門診采取空腹靜脈血，均采3管肘靜脈血液標本，其中2管分離血清處理，1管EDTA抗凝，用于流式細胞分析。應用流式細胞檢測法檢測M1型巨噬細胞比例，在FC500流式細胞儀內加入50 μL全血，隨后加入抗人CD68-FITC、抗人CD86-APC和抗人CD163-PE各5 μL，充分混合后，在暗處放置20 min，加入1 mL溶血劑，搖勻后在暗處放置10 min，經過離心處理后洗滌3次，加入2% 400 μL多聚甲醛，采用CD68/SSC設門的方法，確定巨噬細胞群體，進一步進行巨噬細胞亞群分析[8]。血清TGF-β1和TNF-α應用酶聯免疫吸附法，具體步驟按照TGF-β1和TNF-α試劑盒說明進行。分離另一管血清，立即使用貝克曼庫爾特IMMAGE800特定蛋白分析儀分析患者血清hs-CRP表達水平。

1.3 統計學處理 本研究數據采取統計學軟件SPSS 23.0進行數據分析，計數資料以[例（%）]表示，進行字2檢驗;計量資料符合正態分布則用（x±s）表示，多組間比較采用F檢驗;采用Spearman相關性分析方法分析M1型巨噬細胞與冠心病嚴重程度的相關性;患者預后的影響因素采用logistic回歸分析;以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 四組一般資料比較 四組一般資料對比，差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性。見表1。

2.2 四組M1型巨噬細胞比例、hs-CRP、TGF-β1及TNF-α表達水平對比 四組患者M1型巨噬細胞比例、hs-CRP、TGF-β1以及TNF-α的表達水平對比，差異均有統計學意義（P<0.05），見表2。

2.3 M1型巨噬細胞、hs-CRP、TGF-β1及TNF-α表達與冠心病嚴重程度的相關性 Spearman相關分析結果顯示：M1型巨噬細胞、hs-CRP、TNF-α與冠心病嚴重程度均呈正相關（P<0.05），TGF-β1與冠心病嚴重程度呈負相關（P<0.05），見表3。

2.4 預后良好組與預后不良組各指標水平對比 對所有患者隨訪1年，將發生心血管不良事件的21例患者設為預后不良組，將無心血管不良事件的44例患者設為預后良好組。預后良好組與預后不良組患者性別、體重指數（BMI）、TGF-β1和TNF-α表達水平對比，差異均無統計學意義（P>0.05），預后良好組與預后不良組患者年齡、吸煙、合并2型糖尿病情況、M1型巨噬細胞比例以及hs-CRP水平對比，差異均有統計學意義（P<0.05），見表4。

2.5 不同因素對冠心病的預后預測價值 對單因素分析具有統計學差異指標進行賦值：年齡≥62歲=1，<62歲=0;吸煙=1，不吸煙=0;合并2型糖尿病=1，無2型糖尿病=0;M1型巨噬細胞比例≥63.04%=1，<63.04%=0;hs-CRP≥5.23 mg/dL=1，<5.23 mg/dL=0。M1型巨噬細胞比例≥63.04%為冠心病的預后不良獨立因素（P<0.05），見表5。

3 討論

冠心病是以冠狀動脈管腔狹窄和冠狀動脈粥樣硬化為基本特征的嚴重心臟病類型，而準確評估病情與預后情況，對指導冠狀動脈粥樣硬化性心臟病臨床治療具有重要價值[9]。研究發現，冠心病患者出現血栓形成、斑塊破裂或侵蝕以及急性閉塞或狹窄是冠心病致殘致死的主要原因。而免疫和炎癥影響冠脈斑塊的形成成為當前廣泛接受的理論[10-11]。積累的證據強調不同炎癥和免疫細胞如單核細胞和T淋巴細胞在動脈粥樣硬化病變的病理生理學中的關鍵作用。巨噬細胞是機體所有組織中第一道防線的重要組成部分[12]。除了免疫學作用，巨噬細胞在維持組織內穩態方面也有著重要的意義。隨著臨床醫學的發展，在心臟中發現了兩種類型的巨噬細胞，其中一種是入心臟后由循環單核細胞分化來的巨噬細胞，另外一種是來自胎兒肝臟中卵黃囊駐留的巨噬細胞，依照基因表達譜和表面標志，通常將巨噬細胞分為替代活化的M2型和經典活化的M1型[13-15]。因此，本研究主要針對M1型巨噬細胞水平與冠心病疾病嚴重程度及預后相關性展開分析，希望能夠為冠心病病情與預后的評估提供參考價值。

本研究結果表明，四組M1型巨噬細胞比例、hs-CRP、TGF-β1以及TNF-α的表達水平對比差異顯著（P<0.05），這是因為，促炎M1型巨噬細胞主要分泌機制金屬蛋白酶、生長因子、趨化因子和細胞因子，而且M1型巨噬細胞的長期存在會導致腦梗死面積擴大，阻礙瘢痕形成與炎癥消退。有研究發現，M1型巨噬細胞水平與TNF-α呈明顯正相關[16]。而M1巨噬細胞表面有CD86、CD11c、膠原樣結構巨噬細胞受體等特異性受體，有著低表達IL-10，高表達IL-23和IL-12的表型特征，能夠產生活性氧，并誘導一氧化氮合酶和炎癥因子，如腫瘤壞死因子和IL-6等，與本研究結果相符;本研究Spearman相關性分析結果顯示：M1型巨噬細胞、hs-CRP、TNF-α與冠心病嚴重程度呈正相關（P<0.05），TGF-β1與冠心病嚴重程度呈負相關（P<0.05），有研究發現，TNF-α、hs-CRP等炎癥因子與冠心病的發展具有明顯相關性，而且表達水平高于健康者[17]。這是因為炎癥因子誘導心肌細胞損傷，導致局部心肌氧化和心肌結構出現病理改變，誘導心律失常。有研究發現，2型巨噬細胞的經典蛋白各自發揮作用，并從不同的途徑參與炎癥消退和心肌損傷的修復，對心肌梗死后心臟功能的恢復有重要作用[18-19]。本研究發現M1型巨噬細胞和M2型正相反，比例升高會導致患者體內炎癥水平升高，與以往研究具有一定差異;預后良好組與預后不良組患者性別、BMI、TGF-β1和TNF-α表達水平對比無明顯差異（P>0.05），預后良好組與預后不良組患者年齡、吸煙、合并2型糖尿病情況、M1型巨噬細胞比例以及hs-CRP水平對比差異顯著（P<0.05），提示，冠心病患者心血管事件的發生可能與患者的年齡、吸煙史、合并2型糖尿病以及M1型巨噬細胞和hs-CRP水平升高具有一定關系。研究發現，C反應蛋白等炎癥因子參與動脈粥樣硬化炎癥反應過程，而hs-CRP對冠心病的預測價值高于CRP[20]。還有研究發現，吸煙和2型糖尿病均是冠心病預后不良的相關因素[21]，與本研究結果相似;本研究結果顯示，M1型巨噬細胞比例≥63.04%為冠心病的預后不良獨立因素（P<0.05），提示，M1型巨噬細胞可以作為冠心病預后的獨立預測指標。有研究發現，M1型細胞及其分泌的細胞因子TNF-α具有促炎作用[22]。因此，M1型細胞比例越高可能表示冠心病患者不良心血管事件發生率越高。

綜上所述，M1型巨噬細胞與冠心病的嚴重程度具有相關性，且年齡、吸煙、合并2型糖尿病情況、M1型巨噬細胞比例以及hs-CRP水平均為冠心病預后不良的相關因素，M1型巨噬細胞比例≥63.04%對冠心病的預后具有獨立預測價值，為冠心病不良心血管事件發生的獨立預測因子。

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（收稿日期：2021-06-18） （本文編輯：占匯娟）