小花清風藤中2個新的化學成分

周 強，杜偉東，李志峰, 3*，王 琦，李 艷，馮育林，楊世林

小花清風藤中2個新的化學成分

周 強1，杜偉東1，李志峰1, 3*，王 琦2，李 艷1，馮育林2，楊世林2

1. 江西中醫藥大學，江西 南昌 330006 2. 創新藥物與高效節能降耗制藥設備國家重點實驗室，江西 南昌 330006 3. 南昌市中藥與天然藥物活性成分研究重點實驗室，江西 南昌 330006

研究小花清風藤的化學成分。利用硅膠柱色譜、中低壓液相色譜、凝膠色譜、HP20樹脂以及半制備型高效液相色譜等多種色譜技術進行分離，運用現代光譜技術鑒定化合物結構。從小花清風藤中分離得到2個化合物，分別為生物堿類化合物1-[1-羥基-2-(二甲基氨基)乙基]-3,4-菲二醇-4--β葡萄糖苷（1），酚酸苷類化合物3,5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸-4--α芹糖基-(1→2)--α--鼠李糖苷（2）?；衔?、2均為未見報道的新化合物，分別命名為清風藤堿苷和清風藤酸苷。

清風藤屬；小花清風藤；生物堿；酚酸類；清風藤堿苷；清風藤酸苷

小花清風藤為清風藤科（Sabiaceae）清風藤屬Colelbr.植物小花清風藤Wall. ex Roxb.的干燥莖和葉，主要分布于廣西、貴州、云南等地，是布依族、苗族藥物，俗稱“小黃藥、雅希強（布依族語）、黃腫藥、黃眼藥”等[1-3]。其味苦，性微寒，具有清熱利濕、止血之功效。用于濕熱黃疸、外傷出血[4-7]。本課題組前期對小花清風藤醇提取物經HP-20樹脂的70%乙醇洗脫部位進行化學成分研究，發現其主要含有酚酸類、木脂素類以及生物堿類化合物[8-11]。在此基礎上，為進一步研究其化學成分，本實驗繼續對小花清風藤醇提取物經HP-20樹脂的30%乙醇洗脫部位進行研究，采用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜、中低壓液相色譜以及高效液相色譜技術進行分離，采用波譜學方法與理化性質相結合分離鑒定出2個未見報道的新化合物，分別為生物堿類化合物1-[1-羥基-2-(二甲基氨基)乙基]-3,4-菲二醇-4--β葡萄糖苷（1-[1-hydroxy- 2-(dimethylamino)ethyl]-3,4-phenanthrenediol-4--βglucoside，1），酚酸苷類化合物3,5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸-4--α芹糖基-(1→2)--α--鼠李糖苷[3,5-dimethoxy-4-hydroxybenzoicacid-4--αapinosyl- (1→2)--α--rhamnoside，2]，分別命名為清風藤堿苷和清風藤酸苷。

1 儀器與材料

Bruker avance 600型核磁共振儀（德國布魯克公司）；Triple TOF 5600高分辨質譜儀（美國ABSciex公司）；EYALA旋轉蒸發器（日本Eyala公司）；DHG-9036A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）；EL204電子天平 [梅特勒托利多儀器（上海）有限公司]；LC-XR20UPLC/HPLC（日本島津公司）；Agilent 1100 Series制備液相色譜（美國Agilent公司）；Waters 2487制備液相色譜（美國Waters公司）；DAION HP20樹脂（日本三菱公司）；半制備液相和制備液相所用試劑為色譜純，其他均為分析純。

小花清風藤藥材于2014年6月采自貴州省安順市紫云縣貓營鎮，由江西中醫藥大學鐘國躍教授鑒定為清風藤屬植物小花清風藤Wall. ex Roxb.的干燥莖和葉，標本（WSZ201412）保存在江西中醫藥大學。

2 提取與分離

取17 kg小花清風藤藥材，10倍量70%乙醇回流提取3次，時間分別為3.0、1.5、1.5 h，合并提取液，濾過，減壓濃縮至無醇味。用95%乙醇將濃縮液中乙醇體積分數稀釋至約20%，之后經HP-20大孔樹脂分離，采用30%、50%、70%、95%乙醇洗脫得30%乙醇洗脫部位258 g、50%乙醇洗脫部位94 g、70%乙醇洗脫部位38 g和95%乙醇洗脫部位79 g。取小花清風藤30%乙醇洗脫部分（258 g），向其中分次少量加入60 mL甲醇充分溶解，濾過后，利用中壓反相ODS硅膠柱分離。甲醇-水（20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%）洗脫得到7個流分A～G。A經制備型高效液相分離純化，以甲醇-水（12∶88）等度洗脫，得到化合物1（10 mL/min，R＝36 min，2.0 mg）。F經中低壓ODS柱色譜，甲醇-水（20%、40%、60%、80%、100%）分別洗脫，40%甲醇洗脫液，以甲醇-水（36∶64）等度洗脫，得到化合物2（20 mL/min，R＝30 min，4.1 mg）。

3 結構鑒定

化合物1：白色粉末，易溶于水不易溶于甲醇，通過Q-TOF-MS得到分子離子峰為/459.189 3（[M－H]?，計算值458.184 9），推斷分子式為C24H29NO8。從氫譜中（表1）可以觀察到7個芳香環上的質子信號，其中1個五取代的芳香質子信號H7.47 (1H, s, H-2)，4個鄰二取代芳香質子信號H9.85 (1H, d,= 8.6 Hz, H-5), 7.52 (1H, dt,= 8.4, 1.8 Hz, H-6), 7.56 (1H, dt,= 7.8, 1.2 Hz, H-7), 7.86 (1H, dd,= 7.8, 1.2 Hz, H-8)，四取代的2個鄰位芳香質子信號H7.65 (1H, d,= 9.3 Hz, H-9), 7.88 (1H, d,= 9.2 Hz, H-10)，其中質子信號(H9.85) 是菲環上5位碳上的質子移向低場區的特征峰。再結合碳譜中14個芳香環上的碳原子，推測結構中含有菲環且3, 4位具有鄰二氧取代。H4.92 (1H, d,= 7.9 Hz)為葡萄糖端基上質子信號，再由偶合常數7.9 Hz推斷葡萄糖為β構型，同樣碳譜中亦可見葡萄糖上的6個碳信號C105.9, 74.8, 76.6, 70.1, 77.7, 61.3，其中C105.9為端基碳信號。H2.31 (6H, s) 為氮上取代的2個甲基質子信號，相對應的碳信號C46.1，結合分子式，通過HSQC譜發現剩余1個次甲基信號C67.6,H5.45 (1H, m, H-11)，1個亞甲基碳信號C67.5,H2.39 (2H, m, H-12)，HMBC譜中H2.31 (6H, s) 與C-12 (C67.5)，H7.47 (1H, s) 與C-11 (C67.6) 存在遠程相關，再結合化學位移數據67.5可能為連氧碳信號，以及質譜推測可能含有氮元素，參考文獻中Fenfangjine F[12]數據推測可能含有結構片段-CH(OH)-CH2-N-(CH3)2。另外，HMBC譜（圖1）中觀察到H4.92 (1H, d,= 7.9 Hz, H-1′) 與C-4 (C140.7) 的相關峰，確定了糖苷鍵的連接位點在C-4位。以上數據再通過與文獻中Fenfangjine F數據對比，發現連糖的α位以及鄰位碳信號有所差異，進一步驗證上述鑒定結果。最終將化合物1鑒定為1-[1-羥基-2-(二甲基氨基)乙基]-3,4-菲二醇-4-- β葡萄糖苷。

表1 化合物1的核磁共振波譜數據 (600/150 MHz, DMSO-d6)

Table 1 NMR data of compound 1 (600/150 MHz, DMSO-d6)

碳位δHδC 1 138.6 27.47 (s)116.4 3 148.5 4 140.7 4a 125.4 59.85 (d, J = 8.6 Hz)130.0 5a 129.5 67.52 (dt, J = 8.4, 1.8 Hz)127.9 77.56 (dt, J = 7.8, 1.2 Hz)126.8 87.86 (dd, J = 7.8, 1.2 Hz)125.6 8a 132.6 97.65 (d, J = 9.3 Hz)123.5 107.88 (d, J = 9.2 Hz) 122.0 10a 124.9 115.45 (m)67.6 122.39 (m)67.5 1′4.92 (d, J = 7.9 Hz) 105.9 2′3.61 (m)74.8 3′3.26 (m)76.6 4′3.19 (m)70.1 5′3.04 (m)77.7 6￠3.27 (m), 3.37 (m)61.3 N-CH32.31 (s)46.1

圖1 化合物1結構及主要的HMBC (H→C)相關

化合物2：黃色結晶（甲醇），易溶于甲醇，通過Q-TOF-MS得到分子離子峰為/476.153 0（[M-H]?，計算值475.035 1），推斷分子式為C20H28O13。1H-NMR中H7.26 (2H, s) 提示結構中可能含有1,3,4,5-對稱四取代的芳環，H3.74 (6H, s) 為苯環上的2個甲氧基信號，H5.19 (1H, d,= 1.6 Hz) 為鼠李糖端基氫質子信號，H5.09 (1H, d,= 2.4 Hz) 為芹糖端基氫質子信號，H1.09 (3H, s) 為鼠李糖上甲基質子信號。其13C-NMR（表2）顯示結構包含20個碳信號，其中有11個糖上的碳原子信號C101.6, 70.2, 18.2, 72.4, 70.7, 77.2, 110.8, 74.0, 79.5, 64.1, 76.3，2個甲氧基C56.3，1個羰基C174.7，其余為苯環上碳信號C130.1, 106.8, 152.5, 136.6，其中C106.8, 152.5分別為2個碳重疊，亦進一步證實具有1,3,4,5-對稱四取代的芳環，再經與文獻數據[13-14]對照可鑒定苷元部分為3,5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸。剩余11個糖碳信號依據化學位移以及苷化位移的影響，推測可能為鼠李糖與芹糖，連接方式為鼠李糖端基與苷元部分4-羥基成苷，而芹糖通過端基與鼠李糖2位相連接，再依據文獻報道[13-14]中鼠李糖和芹糖數據，結合HMBC譜（圖2）中相關峰(H5.19/C136.6) 得知鼠李糖連于苷元的C-4位，根據相關峰(H5.09/C77.2) 確定芹糖連于鼠李糖的C-2′位，進一步驗證推測。由H5.09 (1H, d,= 2.4 Hz) 和C110.8, 76.3, 79.5, 74.0, 64.1依據文獻中芹糖[15]數據，得知芹糖為α芹糖。再由H5.19 (1H, d,= 1.6 Hz)，依據文獻中鼠李糖[16]數據，得知鼠李糖為α--鼠李糖。最終將化合物2鑒定為3,5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸-4--α芹糖基-(1→2)--α--鼠李糖苷。

表2 化合物2的核磁波譜數據 (600/150 MHz, DMSO-d6)

Table 2 NMR data of compound 2 (600/150 MHz, DMSO-d6)

碳位δH δC 1 130.1 2, 67.26 (s)106.8 3, 5 152.5 4 136.6 -COOH 174.7 1′5.19 (d, J = 1.6 Hz)101.6 2′3.96 (q, J = 1.7 Hz)77.2 3′3.71 (dd, J = 3.3, 9.5 Hz)70.7 4′3.21 (t, J = 9.5 Hz)72.4 5′4.03 (dd, J = 6.2, 9.5 Hz)70.2 6′1.09 (d, J = 6.2 Hz)18.2 1′′5.09 (d, J = 2.4 Hz)110.8 2′′3.73 (m)76.3 3′′ 79.5 4′′3.62 (d, J = 9.2 Hz), 3.82 (d, J = 9.3 Hz)74.0 5′′3.31 (d, J = 11.2 Hz), 3.38 (d, J = 11.2 Hz)64.1 -OCH33.74 (s)56.3

4 討論

本實驗利用各種色譜分離技術，從小花清風藤中分離得到2個新化合物，并結合質譜、核磁共振波譜等分析手段對其化學結構進行闡明。該實驗進一步豐富了小花清風藤的化學成分，對該植物化學成分的深入挖掘及其專屬性成分的發現具有重要指導意義。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Two new compounds from

ZHOU Qiang1, DU Wei-dong1, LI Zhi-feng1, 3, WANG Qi2, LI Yan1, FENG Yu-lin2, YANG Shi-lin2

1. Jiangxi University of Chinese Medicine, Nanchang 330006, China 2. State Key Laboratory of Innovative Drug and Efficient Energy-Saving Pharmaceutical Equipment, Nanchang 330006, China 3. Nanchang Key Laboratory of Active Ingredients of Traditional Chinese Medicine and Natural Medicine, Nanchang 330006, China

To study the chemical constituents from.Various column chromatographic techniques were used to separate and purify the chemical constituents which structures were elucidated by spectral analysis.Two compounds were isolated from, compound 1 is an alkaloid and compound 2 was a phenolic acid. And they were identified as 1-[1-hydroxy-2-(dimethylamino)ethyl]-3,4-phenanthrenediol-4--βglucoside (1), 3,5-dimethoxy-4-hydroxy- benzoicacid-4--αapinosyl-(1→2)--α--rhamnoside (2).Compounds 1 and 2 are new compounds, named as sabia alkali glycoside and sabia acid glycoside.

Colelbr.;Wall. ex Roxb.; alkaloid; phenolic acids; sabia alkali glycoside; sabia acid glycoside

R284.1

A

0253 - 2670(2022)07 - 1939 - 04

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.07.002

2021-12-17

國家重點研發計劃資助項目（2019YFC1712302）；國家重點研發計劃資助項目（2019YFC1712304）；國家自然科學基金資助項目（81960701）；江西省主要學科學術與技術帶頭人培養計劃（20194BCJ22020）；南昌市優勢科技創新團隊（洪科字〔2018〕274號）；南昌市“雙百計劃”創新人才-培養類（洪科字﹝2020﹞137號）；江西中醫藥大學校級創新創業訓練計劃項目（202110412151）

周 強（1996—），男，碩士研究生，從事中藥活性成分研究。Tel: 14796858706 E-mail: 14796858706@163.com

李志峰，教授，博士生導師，從事中藥活性物質基礎及新藥研究。E-mail: wangqilizhifeng@126.com

[責任編輯 王文倩]