EB病毒致IM患兒EBV-DNA拷貝數與淋巴細胞變化的相關關系

張雪梅，丁超，董莎

濟寧市第三人民醫院檢驗科，山東濟寧 272000

EB 病毒（epstein-barr virus, EBV）為雙鏈DNA病毒，屬于皰疹病毒科γ 皰疹病毒，流行病學研究提示全球約90%以上人群曾感染過EB 病毒[1]。EB病毒感染多見于兒童，主要表現為傳染性單核細胞增多癥（infectious mononucleosis, IM），大量的單個核細胞增生是傳染性單核細胞增多癥的主要特征[2-3]。傳染性單核細胞增多癥多易反復，嚴重患兒還可出現器官衰竭甚至死亡，因此早期準確的診斷和有效干預較為重要。

既往文獻提示T 細胞在EB 病毒感染患兒機體中具有異常變化并提示EBV DNA 載量可能與疾病的嚴重程度存在相關性[4-5]。已有研究發現EB 病毒感染與機體的細胞免疫和體液免疫均存在相關性，EB 感染患兒的病情進展與免疫功能低下有關[6]。故而，本研究選取2019 年1 月—2021 年4 月濟寧市第三人民醫院收治的60 例EBV-IM 患兒為研究對象，探討EB 病毒感染所致傳染性單核細胞增多癥（EBV-IM）患兒EBV-DNA 拷貝數與淋巴細胞的相關性?，F報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院收治的60 例EBV-IM 患兒納入觀察組，同時選取健康兒童50 名作為對照組，兩組一般資料的資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經患兒監護人知情同意及院內醫學倫理委員會批準。見表1。

表1 兩組一般資料對比

1.2 納入與排除標準

納入標準：①實時定量聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction, PCR）檢測EBV-DNA 陽性；②IM 診斷符合《諸福棠實用兒科學》中的標準；③初次治療患兒。排除標準：①近1 個月有糖皮質激素、免疫抑制劑等藥物服用史者；②合并有心肌炎、免疫系統疾病、肝腎功能障礙等其他疾病者。

1.3 方法

①所有待檢兒童均取空腹靜脈血3 mL，離心后分離血清，采用血球儀（日本希森美康）和細胞鏡檢檢測外周血淋巴細胞和異型淋巴細胞。

②采用血清免疫球蛋白儀（德國西門子），應用免疫比濁法檢測IgG、IgM 和IgA 水平，相關檢測試劑盒購于南京建成生物研究所。

③采用實時定量PCR 儀（中國天隆）檢測EBVDNA 拷貝數，將全血標本按照試劑盒說明書處理和提取DNA，并取20 μl 加入DNA 檢測體系樣品反應槽中擴增和檢測：2 min 50℃預反應，5 min 94℃預變性，10 s 94℃，40 s 60℃為一個循環，共進行50個循環后檢測EBV-DNA 拷貝數，檢測極限為5×102copies/μl，檢測的數值≥5×102copies/μl 為陽性。

1.4 觀察指標

觀察比較兩組外周血淋巴細胞、異型淋巴細胞、免疫球蛋白G（immunoglobulin G, IgG）、IgM 和lgA 差異。觀察比較觀察組不同性別、年齡兒童外周血淋巴細胞、異型淋巴細胞和特異性免疫蛋白水平。

1.5 統計方法

采用SPSS 22.0 統計學軟件處理數據，符合正態分布的計量資料以（±s）表示，組間差異比較采用t檢驗；非正態分布計量資料采用M（P25，P75）表示，組間差異比較采用秩和檢驗；計數資料以[n(%)]表示，組間差異比較采用χ2檢驗；相關性采用Spearman 秩 相 關 分 析，P＜0.05 為 差 異 有 統 計 學意義。

2 結果

2.1 兩組外周血淋巴細胞和異型淋巴細胞水平比較

觀察組外周血淋巴細胞和異型淋巴細胞水平明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組外周血淋巴細胞和異型淋巴細胞水平對比[M（P25，P75），%]

2.2 兩組特異性免疫蛋白水平比較

觀察組外周血IgG、IgM 和IgA 水平明顯高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 兩組特異性免疫蛋白水平對比[M（P25，P75），g/L]

2.3 觀察組不同性別、年齡患兒外周血淋巴細胞、異型淋巴細胞和特異性免疫蛋白水平比較

觀察組不同性別、年齡患兒外周血淋巴細胞、異型淋巴細胞和特異性免疫蛋白比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表4。

表4 觀察組不同性別、年齡患兒外周血淋巴細胞、異型淋巴細胞水平對比[M（P25，P75），%]

2.4 EBV-DNA 拷貝數與淋巴細胞和異型淋巴細胞的相關性分析

觀 察 組EBV-DNA 拷 貝 數 為0.30（0.10，0.61）copies/mL，將EBV-DNA 拷貝數與外周血淋巴細胞、特異性免疫蛋白進行相關分析，結果顯示EBVDNA 拷貝數與淋巴細胞呈正相關（rs=0.332，P＜0.05），與異型淋巴細胞、IgG、IgM、IgA 未見明顯相關性（rs=0.102、0.084、0.043、0.022，P＞0.05）。

續表4 觀察組不同性別、年齡兒童特異性免疫蛋白水平比較 [（M（P25，P75）,g/L]

3 討論

EB 病毒歸屬于皰疹病毒，是一種嗜淋巴細胞的DNA 病毒，具有轉化和潛伏特性，已證實是兒科多種疾病特別是發熱性疾病的主要病原體[7]。EB病毒感染后多數表現為傳染性單核細胞增多癥，部分患兒常因無法有效控制病情而導致遷延不愈并繼發其他惡性疾病。

本研究結果中，觀察組外周血淋巴細胞和異型淋巴細胞明顯高于對照組（P＜0.05）。上述結果提示EBV-IM 患兒T 細胞亞群紊亂，具體發病機制可能是EB 病毒感染機體后并在細胞內大量復制，細胞發生溶解后EB 病毒逐漸釋放進入血液，導致T細胞分泌大量細胞因子[8-10]。故而，EB 感染患兒存在淋巴細胞紊亂現象。既往文獻提示IM 的發病及病情進展過程中存在異常的細胞免疫情況，這也與本研究結果具有一致性[11-13]。

本研究中兩組特異性免疫蛋白水平比較結果顯示：觀察組外周血IgG、IgM 和IgA 水平明顯高于對照組（P＜0.05）。該結果說明EBV-IM 患兒存在一定程度的免疫功能紊亂，這可能是因為機體由EB病毒入侵形成抗原，進而刺激產生特異性抗體，促進補體激活免疫細胞形成強效免疫效應導致外周血IgG、IgM 和IgA 免疫蛋白水平相對較高。

臨床中將熒光定量聚合酶鏈反應逐漸用來檢測EBV-DNA，且可以反映機體EBV-DNA 水平和EB 病毒感染和病毒的復制情況，臨床上可以根據EBV-DNA 拷貝數判斷病情嚴重程度[14-18]。本研究結果顯示，EBV-DNA 拷貝數與淋巴細胞呈正相關（P＜0.05），其余未見相關性。該結果說明EBV-IM患兒的EBV-DNA 拷貝數與淋巴細胞有一定相關性。相關文獻顯示IM 患兒外周血EBC-DNA 載量與疾病的嚴重程度呈顯著正相關，這也與本研究結果一致，EB 病毒感染免疫功能缺乏和不足是誘發腫瘤的主要原因[19]。臨床上PCR 技術逐漸廣泛應用于EB 病毒載量的檢測，感染EBV 導致細胞缺乏免疫功能而繼發淋巴瘤及惡性組織增生癥等重癥疾病。但也有研究發現兒童由于機體器官及免疫系統發育尚未完善，導致免疫功能低下及尚未形成抗原特異性靶點等，更易引發免疫系統病變而導致噬血細胞綜合征等惡性疾病，因而EBV-DNA 拷貝數較高，這提示臨床上需要注意IM 的個體差異性[20]。

本研究的創新點在于系統分析了EBV-IM 患兒經EB 病毒感染后機體免疫功能的變化，從本研究的數據可以得知隨著EBV-DNA 水平的升高，免疫細胞的免疫調節功能更加紊亂，機體也無法有效維持抗病毒的平衡，形成一種惡性循環而導致患兒臨床表現更加典型，因此EBV-DNA 的檢測可以考慮作為診斷IM 和判斷IM 治療效果的重要指標并在臨床范圍內推廣應用。

綜上所述，EBV-IM 患兒T 細胞亞群紊亂，其中EBV-DNA 拷貝數與淋巴細胞有一定相關性。