上海長寧地區58 217例女性宮頸HPV感染情況及基因亞型分布研究

侯雅萍 駱鶯(通信作者)吳磊 湯柯夫 樊程

200050上海市長寧區婦幼保健院檢驗科，上海

宮頸癌被列為兩大常見女性癌癥，每年約有新增570 000例確診病例，死亡病例超過310 000例。在全球范圍內，超過3/4 的病例來自發展中國家，中國和印度是最大的貢獻國[1]。持久性高危人乳頭瘤病毒的感染是宮頸癌和宮頸上皮內瘤變的主要原因[2]。本研究通過回顧性分析上海市長寧區婦女58 217 例宮頸HPV 檢測結果，積累本地區婦女HPV 感染的流行病學資料，探討HPV 感染及其亞型的分布情況，為宮頸癌患者提供參考依據。

資料與方法

收集長寧區婦幼保健院2018年1月-2020年12月就診婦女生物宮頸脫落細胞樣作為研究對象,患者年齡15～81 歲。患者及家屬均同意加入本研究，簽署知情同意書，本研究經醫院倫理委員會審批。

納入標準：①患者自愿參加檢查；②非月經、妊娠期間；③有既往性生活史。

排除標準：①有子宮切除史；②中途退出者；③存在溝通障礙者。

方法：(1)樣本采集：受檢者膀胱截石位，利用窺陰器、陰道擴張器充分暴露宮頸，清理宮頸口分泌物，將宮頸專用細胞刷伸入受檢者宮頸口內，順時針旋轉3～5 圈收集脫落細胞，收集完成后將刷頭置于細胞保存液中，2℃～8℃保存，采樣1 周內完成檢測。(2)儀器與試劑：①HPV 分型檢測試劑盒、核酸提取液試劑盒，均購自寧波海爾施基因科技有限公司；②PCR 抽提器(廠家：臺灣圓點奈米技術股份有限公司；型號：SLA-32)；③PCR 擴增儀(廠家：杭州朗基科學儀器有限公司；型號：A300)；④HPV 分型系統：貝克曼庫爾特GenomeLab GeXP 遺傳分析系統。(3)檢測方法：應用多重PCR、毛細管電泳技術，對E6、E7、E1(HPV 早期表達基因)設計引物，對不同HPV 亞型基因進行特異性擴增，并應用毛細電泳分離，在1次檢測中同步對25種基因型分型操作；內置內參pcDNA 監控PCR 反應過程，內置人基因內參β-globin 監控樣本處理過程。以體外定性測定細胞樣本中的25種HPV核酸基因型。

觀察指標： ①統計檢測標本中HPV 單一、雙重和多重感染情況；②比較不同年齡段患者HPV 感染率；③統計檢測樣本中HPV亞型感染分布情況。

統計學方法：數據采用SPSS 18.0 統計學軟件分析，計數資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗；計量資料以(±s)表示，采用t檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

結果

感染情況：在檢測的58 217例樣本中，檢測出陽性標本14 330 份，陽性率(24.61%)。高危型HPV感染率21.59(12 569/5 8217)，低危型HPV 感染率6.27%(6 648/58 217)。HPV多重感染情況見表1。

表1 HPV單一、雙重和多重感染情況

不同年齡段患者HPV 感染率比較：分析感染HPV婦女的年齡特征，＜20歲女性HPV感染率最高，達37.8%(31/82)；＞60 歲女性感染率排第2，為36.57%(1 259/3 443)；不同年齡段患者HPV 感染率比較，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 不同年齡段患者HPV感染率比較

HPV 亞型感染分布情況：在58 217 例檢測樣本中，HPV 陽性14 330 例，高危型HPV 感染率為21.59%(12 569/58 217)；低危型HPV 感染率為6.27%(3 648/58 217)。25 種亞型(高危型：16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82和低危型：6、11、42、43、44、81、83)均被檢出。其中高危型常見亞型為：HPV52 型(4.54%)、HPV53 型(3.09%)、 HPV16 型(3.07%)、 HPV58 型(2.94%)、HPV56型(2.91%)；低危型常見亞型：HPV81型(1.51%)、HPV43型(1.4%)、HPV42型(1.39%)。

討論

宮頸癌是唯一病因明確、可以早期發現和治療、可望消滅的癌癥[3]。持續高危型HPV 感染是宮頸癌前病變和子宮頸癌發生的主要病因[4]。預防宮頸癌的重要手段包括早期發現、早期診斷和預防性注射疫苗，而定期進行HPV 基因檢測亦是監測和預防宮頸癌的有效手段之一。

本研究對上海市長寧區58 217例婦女宮頸脫落細胞樣本進行HPV 檢測，發現感染率達24.61%，與劉華等[5]報告的上海浦東地區HPV 感染率23.46%相近，但明顯低于崔燕紅等[6]報告的江蘇常熟地區HPV 感染率44.9%，而高于于海聰等[7]研究的哈爾濱地區HPV感染率20.1%，這表明HPV的感染存在地區差異。

本研究結果顯示，＜20 歲女性的HPV 感染率最高(37.8%)，分析原因可能是由于宮頸上皮發育未完全成熟，加之性生活過早或者多個性伴侶等不良生活習慣導致。但是因為受檢例數不多結論有局限性，應擴大檢測例數加以論證結論。但不容忽視的是對青少年女性加強健康宣教，了解篩查及預防相關知識。感染率排在第2 位的是＞60 歲年齡組(36.57%)，雖然高年齡女性性生活相對減少，但是由于其激素水平變化等引起免疫功能衰退，導致HPV 易感性增加及清除能力下降。眾所周知，我國正面臨人口老齡化的問題，對于＞60歲老年婦女應重視宮頸癌HPV篩查。

在感染形式上，長寧地區女性HPV 感染情況中，單一基因、雙重基因、多重基因感染率分別為65.99%、20.96%和13.05%；單純高危型感染率為21.59%，單純低危型感染率為6.27%。說明本地區女性HPV 感染以單一基因和高危亞型為主。本研究采用多重PCR 和毛細管電泳技術檢測18 種高危型HPV亞型和7 種低危型HPV 亞型，25 種HPV 亞型均檢出。高危型亞型檢出率最高的5 位是：HPV52 型(4.54%)、HPV53 型(3.09%)、 HPV16 型(3.07%)、 HPV58 型(2.94%)、HPV56 型(2.91%)。雖然HPV16 和18 是全世界宮頸病變相關的最普遍的HPV 感染類型，但本研究發現HPV52、53、16、58、56 是本地區感染的主要亞型，表明不同地區女性的HPV 基因型別有很大差異[8-10]。

目前全球正在使用的3 種疫苗：HPV2 價疫苗、HPV4價疫苗及HPV9價疫苗，這3種疫苗的設計和驗證是建立在西方人群的流行病學基礎上，對亞洲人群的保護率相對低于西方人群[11]。本地區感染最多的5種HPV 高危亞型并沒有完全被涵蓋。由此可見，HPV 疫苗的保護作用具有地域差別，在引進運用時應予以調整，才能真正起到抵御所有可致癌的高危型人乳頭瘤病毒的作用。

本研究表明，上海長寧地區HPV 感染具有年齡分布差異及亞型差異的特點，為本地區女性宮頸癌篩查和防治提供了有用資料。同時應加強對高危人群的健康宣教。結合宮頸細胞學篩查和陰道鏡檢查，盡量做到對宮頸癌及癌前病變的早預防、早發現、早治療。