腹瀉糞便中小腸結腸炎耶爾森菌檢驗的價值

李鳳娟，宋鏡南

信陽職業技術學院，河南 信陽 464000

0 引言

感染性腹瀉是一種細菌感染引發的腸道傳染病，而小腸結腸炎耶爾森菌是引發該病的主要致病菌。小腸結腸炎耶爾森菌可通過糞口途徑進入體內，導致患者出現急性腹瀉、腸道外感染癥狀，直接對生活造成嚴重影響[1]。目前，培養法、RT-PCR法均是臨床上常用于檢驗小腸結腸炎耶爾森菌的手段，前者具有操作簡單、成本低等特點，主要通過人工的方式促使細菌生長、繁殖，但也存在耗時、耗力的缺陷；后者檢測迅速，可避免標本受到其他因素的影響，對檢驗工作的開展具有積極意義[2]。此次研究，附屬醫院回顧性分析100例腹瀉患者臨床資料，對腹瀉糞便中小腸結腸炎耶爾森菌檢驗中應用培養法、RT-PCR法的價值進行探究，詳細匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取附屬醫院2019年1月-2020年10月收治的100例腹瀉患者臨床資料進行回顧性分析，所有患者均行糞便中小腸結腸炎耶爾森菌檢驗，以檢驗方式的不同進行分組，應用培養法的50例患者納入對照組，而應用RT-PCR法的患者納入觀察組。對照組中男25例，女25例；年齡23～65歲，平均（50.24±4.30）歲；每日排便次數在3～8次，平均（5.67±1.02）次。觀察組中男27例，女23例；年齡23～65歲，平均（50.39±4.25）歲；每日排便次數在3～8次，平均（5.58±1.12）次。兩組一般資料比較，差異不顯著（P>0.05），此次研究經倫理委員會批準。

納入標準：①患者經血常規、病原學、糞便常規檢查等明確病情為感染性腹瀉，且排便次數顯著增加，性質發生變化；②患者臨床資料完整。

排除標準：①合并嚴重慢性疾病者；②合并惡性腫瘤或器質性疾病者；③合并血液系統疾病者；④合并內分泌系統疾病者。

1.2 方法

所有患者均行糞便中小腸結腸炎耶爾森菌檢驗。首先，取患者新鮮糞便，保存于干燥、無吸水性容器中。其次，對照組應用培養法：采集0.5g糞便樣本，保存于Cary-Blari保存液中，加入45mL生理鹽水后放置于16℃環境下，培養18h；培養結束后，在CIN平臺上接種，再放置于25℃環境下進行培育，時間為24h。觀察組應用RTPCR法：采集0.5g糞便標本，保存于16℃環境下，培養18h；取200μL糞便標本，對DNA進行提取，將溫度控制在95℃，實施擴增處理，擴增長度為154bp，并設立對照組。

1.3 觀察指標

對比兩組陽性檢出率。培養法陽性判斷標準：與標準菌株產生相同生化反應。RT-PCR法陽性判斷標準：樣品經擴增處理后出現接近于預期大小的條帶；檢測費用和檢測時間。

1.4 統計學處理

本研究數據均采用SPSS 22.0統計學軟件處理。計量資料采用（）；組間比較行t檢驗；計數指標采用（%）表示，行χ2檢驗；若檢驗結果顯示P<0.05說明組間差異存在統計學意義。

2 結果

2.1 兩組陽性檢出率

對照組、觀察組陽性檢出率分別為44.00%、7 6.0 0%，對比發現觀察組陽性檢出率更高（P<0.05），見表1。

表1 比較兩組陽性檢出率[n(%)]

2.2 比較兩組患者的檢測費用和檢測時間

觀察組患者的檢測費用和檢測時間均低于對照組（P<0.05），見表2。

表2 比較兩組患者的檢測費用和檢測時間（±s）

表2 比較兩組患者的檢測費用和檢測時間（±s）

3 討論

20世紀80年代中期，小腸結腸炎耶爾森菌曾在我國引發兩次大流行，并且逐漸受到相關領域學者的重視。經過長期研究發現，小腸結腸炎耶爾森菌可廣泛分布于自然界，侵入人體后會潛伏1～10d，部分學者將其引發的感染劃分為3個臨床期，如急性期患者主要出現急性胃腸炎癥狀，包括腹痛、腹瀉等；并發癥期患者主要發生腸道外癥狀，如心肌炎、腦膜炎與敗血癥等；再發期時患者血中小腸結腸炎耶爾森菌的抗體滴度仍處于高水平[3]。此外，部分患者感染小腸結腸炎耶爾森菌后，表現的臨床癥狀類似于闌尾炎，易導致病情誤診，影響下一步的治療。雖然小腸結腸炎葉爾森病感染后患者表現的腹瀉具有自限性的特點，但其屬于革蘭氏陰性小桿菌，可對腸系膜淋巴結造成侵犯，使患者成為潛在傳染源，且該菌具有超抗原，低溫時可在氨基酸或維生素狀態下迅速繁殖，易誘發關節炎與甲狀腺疾病等，故及時、正確的診斷對下一步臨床治療方案的制定具有極為重要的意義。

臨床檢查方法均存在一定弊端，診斷效率低。小腸結腸炎耶爾森菌傳染性病菌是引起小腸結腸炎的主要因素，若未得到及時的科學治療，易引起患者機體的胃腸炎腹瀉以及呼吸系統疾病。另外，該病菌具有傳染性較強的特點，甚至產生人畜之間傳播現象。因此及早的診斷和治療有重要意義。在檢驗方面，小腸結腸炎耶爾森菌可以通過食物傳播，并引發小腸結腸炎耶爾森菌病，大部分國家已將其作為進出口食品的必檢常規項目。在小腸結腸炎耶爾森菌檢驗中，培養法、RT-PCR法均是常用的方法，兩種方法各具優缺點，如培養法操作簡單，可以減少肉眼判斷疾病的難度；RT-PCR法陽性檢出率高，且整個操作過程時間短、流程短，大約需要48h，同時反應不要電池維持，能夠減少實驗室污染，縮短檢查時間。另外，RT-PCR檢查進行定量的檢測方法，有助于患者充分的了解機體感染情況。依據臨床患者需求，還可以將RT-PCR檢測方法與其他方法聯合檢測小腸結腸炎感染情況，增加臨床診斷的準確率，提升診斷價值。滿玉霞等[4]研究發現RT-PCR法和培養法在實際應用中取得的效果并不一致。結合此次研究結果：對照組、觀察組陽性檢出率分別為44.00%、76.00%，對比發現觀察組陽性檢出率更高（P<0.05），這一研究結果與李曉蕾[5]研究結果類似。以上研究結果說明，應用RT-PCR于腹瀉患者糞便小腸結腸炎耶爾森菌檢驗中，陽性檢出率顯著高于培養法，可能與RT-PCR法具備的優勢相關。具體而言，培養法屬于人工細菌生長繁殖技術，主要是借助小腸結腸炎耶爾森菌的嗜冷性，經過長時間冷增殖后對其他細菌的生長進行抑制，并促進目標菌的繁殖。雖然培養法對操作人員的操作技術要求并不高，可降低肉眼判斷難度，但在實際檢驗過程中，若操作人員未嚴格遵循無菌操作的原則，外界因素極易對檢驗結果造成影響。同時，培養法也存在著不足之處，如無法實現自動化，不適用于大規模流行病學調查；檢測周期、檢測材料準備時間長，易對疾病防治措施的制定與實施造成影響；在長時間培養過程中，易丟失部分細菌基因，其他特性可能隨之發生變化，降低生化結果的準確性。RT-PCR法是將cDNA聚合酶鏈式反應擴增、RND反轉錄雙重技術為一體的生化技術，其操作方法是醫護人員對組織或細胞內總RNA進行提取，以mRNA為模板，首先應用隨機引物利用逆轉錄酶或Oligo轉錄成為cDNA，再以此為模板行PCR擴增處理，從而獲得基因的相關信息。相對于培養法而言，RT-PCR法具有如下幾點優勢：①RT-PCR法特異性強，且靈敏度高，應用于細菌檢驗中不僅能夠分離出RNA，而且能夠保證RNA的質量，提升檢驗結果的準確性[6]；②RT-PCR法擴增速度快，適用于病原微生物檢驗與大規模監測；③RT-PCR法檢測迅速，一方面能夠縮短檢測時間，另一方面也有助于降低污染的發生風險，減少檢驗結果的誤差；④在檢驗過程中，通過微量物質即可獲得目的片段，以便醫護人員定量、定性分析樣品，了解感染程度，且檢驗反應產生后無須使用電泳，這一優勢能夠避免環境污染，具有一定的環境效益。值得注意的是，即使RT-PCR法在腹瀉患者糞便小腸結腸炎耶爾森菌檢驗中的應用效果已得到證實，但該方法也存在著一些缺陷，如檢驗使用的實驗儀器價格昂貴，導致檢測成本較高，不僅在基層醫院中無法得到推廣，而且部分患者難以承擔檢驗費用；需要操作人員熟練檢驗操作，且具備較高的技術水平；檢驗中可能會出現假陽性或假陰性結果，或是得到的片段無法為檢驗提供參考。因此，需要醫護人員在實際中根據情況合理選擇方法進行糞便小腸結腸炎耶爾森菌檢驗，以保證檢驗結果的準確性與客觀性。

長時間腹瀉導致機體免疫功能和消化系統功能降低，體電解質紊亂和體內酸堿度失衡狀態，對臨床治療的效果產生一定的影響，因此，臨床治療及時改善患者腹瀉現象有著重要的意義。根據相關數據[7]顯示，依據患者的文化程度和對疾病的了解情況進行相應的健康教育，使患者保持積極的治療狀態。若患者大便次數較多，應及時更換內衣和床上用品，并且采用清水清洗或者適當涂抹藥物，避免感染。另外，患者需要進行體能鍛煉，增加機體的抵抗能力。隨著天氣改變，應及時增加衣物和補充水分，預防患者脫水，治療過程中應密切監測患者的生命體征，及時應對出現的不良反應。本研究結果顯示，觀察組患者的檢測費用和住院時間均低于對照組。說明RT-PCR法檢測在保證臨床治療療效的情況下，縮短患者住院時間和降低患者檢測痛苦。分析其原因，治療過程中告知患者及時清理大便，對肛門周圍擦洗，避免肛門周圍的皮膚因長期刺激，引發肛門周圍組織潮紅和破損的現象。若患者有需要應盡可能使用一次性造口袋材料為水膠體敷料，改善肛門周圍皮膚潮紅的情況。另外，告知患者應培養良好的個人衛生習慣，肛門應盡可能保持干燥和整潔狀態，患者排便后，用干凈的衛生紙或者毛巾擦拭肛門，禁止使用刺激的肥皂或者熱水，引發肛門周圍感染。治療過程中患者出現的負面情緒，醫護人員應及時進行心理疏導，使患者積極的配合醫護人員治療，家屬應多陪伴患者，改善治療過程中的焦慮和抑郁的態度，提升治療的臨床療效。

綜上所述，在腹瀉患者糞便小腸結腸炎耶爾森菌檢驗中應用RT-PCR法，能夠促進陽性檢出率的提升，為臨床醫師診斷提供有效的依據，從而制定科學、合理的治療方法，符合臨床需求。