乳腺癌組織中NM23 及上皮鈣黏素的表達(dá)與新輔助化療效果的關(guān)系

楊 磊 楊宏偉 陳茂山 牟德武 程曉明

1.四川省遂寧市中心醫(yī)院乳腺甲狀腺外科，四川遂寧 629000；2.遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院甲狀腺乳腺外科，貴州遵義 563000

乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅女性健康[1-2]。術(shù)前新輔助化療（neoadjuvant chemotherapy，NCT）是乳腺癌治療的重要手段之一[3-4]，NCT 能實(shí)現(xiàn)腫瘤降期及獲得藥物敏感性信息[5]。然而，NCT 過(guò)程中仍有部分患者出現(xiàn)疾病進(jìn)展，進(jìn)而失去手術(shù)機(jī)會(huì)甚至影響預(yù)后。因此，尋找與NCT 效果相關(guān)的指標(biāo)對(duì)臨床決策具有重要意義。NM23 是一種抑癌基因，主要參與抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)，NM23 的缺乏可產(chǎn)生更利于乳腺癌細(xì)胞進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的微環(huán)境[6]。上皮鈣黏素是一種Ⅰ型跨膜糖蛋白，參與許多實(shí)體腫瘤的發(fā)展，與乳腺癌細(xì)胞系的侵襲和轉(zhuǎn)移能力相關(guān)[7]。綜上所述，NM23 和上皮鈣黏素與乳腺癌進(jìn)展密切相關(guān)，但二者在乳腺癌組織中的表達(dá)與NCT 效果之間的關(guān)系尚不十分清楚。本研究旨在通過(guò)分析乳腺癌組織中NM23 和上皮鈣黏素的表達(dá)與NCT 效果的關(guān)系，為臨床決策提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014 年10 月至2017 年10 月在遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）甲狀腺乳腺外科接受NCT 的乳腺癌患者穿刺病理標(biāo)本石蠟塊。納入標(biāo)準(zhǔn)：①NCT 前經(jīng)穿刺病理確診浸潤(rùn)性乳腺癌；②既往未接受過(guò)全身抗腫瘤治療；③有可測(cè)量的乳腺原發(fā)病灶；④接受NCT。排除標(biāo)準(zhǔn)：①穿刺石蠟標(biāo)本難以滿足免疫組化檢測(cè)；②NCT 療程<4 周期。本研究共納入87例女性患者，平均（46.9±7.5）歲；根據(jù)NCT 效果將其分為有效組（63例）和無(wú)效組（24例）。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 研究方法

1.2.1 主要試驗(yàn)試劑 免疫組織化學(xué)SP 試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）；DAB 顯色試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）；鼠抗人上皮鈣黏素單克隆抗體（Santa Cruz 生物有限公司，AB6528）；鼠抗人NM23-H1 單克隆抗體（Santa Cruz 生物有限公司，SC-465）；PBS 磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液及抗體稀釋液等（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）。

1.2.2 乳腺癌組織中NM23 和上皮鈣黏素蛋白表達(dá)檢測(cè)及結(jié)果判讀 本研究采用免疫組化SP 法檢測(cè)。具體步驟：①石蠟切片脫蠟水化；②微波修復(fù)抗原；③封閉后滴加一抗；④復(fù)溫后滴加二抗；⑤DAB 顯色；⑥復(fù)染脫水封片。400 倍視野下隨機(jī)選取5 個(gè)部位，根據(jù)著色強(qiáng)度和著色占比判定結(jié)果[8]。著色強(qiáng)度：未著色記0 分，輕度著色記1 分，中度著色記2 分，重度著色記3 分；著色占比：＜5%為0 分，5%～25%為1 分，＞25%～50%為2 分，＞50%～75%為3 分，＞75%為4 分。兩種得分相加：0～1 分為（-），2 分為（+），3～4 分（++），≥5分為（+++）。其中（-）和（+）為陰性，（++）和（+++）為陽(yáng)性。

1.2.3 化療效果評(píng)估 所有患者行NCT 前后均由我院同一乳腺超聲專業(yè)組2 名醫(yī)師（1 名副主任醫(yī)師，1 名工作5 年以上主治醫(yī)師）采用超聲測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)短徑（出現(xiàn)意見(jiàn)分歧時(shí)咨詢第三位醫(yī)師）。評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)：采用實(shí)體腫瘤效果評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)（RECIST 1.0）進(jìn)行評(píng)估。腫瘤完全消失為完全緩解；腫瘤最長(zhǎng)徑縮小≥30%為部分緩解；腫瘤最長(zhǎng)徑縮小＜30%或增長(zhǎng)≤20%為疾病穩(wěn)定；腫瘤最長(zhǎng)徑增加＞20%為疾病進(jìn)展。其中，完全緩解和部分緩解為NCT 有效，疾病穩(wěn)定和疾病進(jìn)展為NCT 無(wú)效。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 26.0 對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)和百分率表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。采用logistic 回歸模型分析影響因素。以P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床資料及NM23、上皮鈣黏素表達(dá)情況比較

無(wú)效組的NM23 陽(yáng)性、TNM 分期為Ⅲ期、人表皮生長(zhǎng)因子受體-2 陽(yáng)性占比均低于有效組，上皮鈣黏素陽(yáng)性占比高于有效組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組臨床資料及NM23、上皮鈣黏素表達(dá)情況比較[例（%）]

2.2 乳腺癌NCT 效果的影響因素分析

以NCT 效果作為因變量，賦值：無(wú)效=1，有效=0，將單因素分析中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）的因素為自變量進(jìn)行賦值，NM23：陽(yáng)性=1，陰性=0；上皮鈣黏素：陽(yáng)性=1，陰性=0；人表皮生長(zhǎng)因子受體-2：陽(yáng)性=1，陰性=0；TNM 分期：Ⅲ期=1，Ⅰ+Ⅱ期=0。多因素分析結(jié)果顯示，上皮鈣黏素表達(dá)陽(yáng)性是乳腺癌NCT 無(wú)效的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（OR ＞1，P ＜0.05），NM23 表達(dá)陽(yáng)性及TNM 分期為Ⅲ期是其保護(hù)因素 （OR ＜1，P ＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 乳腺癌NCT 效果的影響因素分析

3 討論

NCT 是乳腺癌的重要治療手段之一，能將腫瘤降期，獲得手術(shù)或保乳機(jī)會(huì)，同時(shí)能提供藥物敏感性信息，可用于評(píng)估預(yù)后及指導(dǎo)后續(xù)化療。但部分患者NCT 效果欠佳，因此，能早期評(píng)估NCT 效果具有重要臨床意義[9-11]。本研究通過(guò)免疫組化檢測(cè)NCT 前乳腺癌組織中NM23 和上皮鈣黏素蛋白的表達(dá)情況，分析其在組間的表達(dá)差異并進(jìn)行多因素分析，結(jié)果提示NM23 及上皮鈣黏素的表達(dá)是NCT 效果的影響因素。

NM23 是一種抑癌基因，由5 個(gè)外顯子和4 個(gè)內(nèi)含子組成，位于17 號(hào)染色體著絲點(diǎn)附近p11～q11 間，全長(zhǎng)8.5 kb，由533 個(gè)核苷酸組成，合成含有152 個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，主要參與抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力[12-13]。既往研究發(fā)現(xiàn)，在黑色素瘤、食管癌和三陰性乳腺癌中NM23 表達(dá)陽(yáng)性組的化療效果較表達(dá)陰性組顯著提升[14-17]。本研究發(fā)現(xiàn)有效組NM23 表達(dá)陽(yáng)性顯著高于無(wú)效組，提示NM23 表達(dá)與乳腺癌NCT 效果具有一定相關(guān)性，可能的原因是，化療所致DNA 損傷時(shí)NM23 會(huì)蓄積增加，最終導(dǎo)致了S 期延長(zhǎng)，細(xì)胞死亡，而當(dāng)NM23 低表達(dá)時(shí)，可下調(diào)細(xì)胞周期蛋白E 和A，導(dǎo)致S 期縮短，而減少細(xì)胞死亡[15,18-19]。此外，另一項(xiàng)研究通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)分析指出，在食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系中加入鉑類時(shí)，可檢測(cè)到NM23 水平的增高，最終導(dǎo)致S 期分?jǐn)?shù)顯著增加，這意味著NM23 較高的水平可能參與了S 期檢查點(diǎn)的激活。因此，NM23 響應(yīng)DNA 損傷時(shí)的上調(diào)，可能同時(shí)改變細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)，并導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯，從而發(fā)揮其腫瘤抑制基因的作用[20]。

上皮鈣黏素是一種Ⅰ型跨膜糖蛋白，分子量約120 kD，位于人染色體16q22.1，由15 個(gè)內(nèi)含子和16 個(gè)外顯子組成，主要介導(dǎo)細(xì)胞之間的黏附連接，參與許多實(shí)體腫瘤的發(fā)展[7]。有研究發(fā)現(xiàn)，上皮鈣黏素在MDAMB-435 細(xì)胞的表達(dá)中，通過(guò)上調(diào)Bcl-2 的表達(dá)從而降低了人乳腺癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性[21]。本研究發(fā)現(xiàn)，NCT 有效組上皮鈣黏素表達(dá)陽(yáng)性占比顯著低于無(wú)效組，提示上皮鈣黏素表達(dá)可能對(duì)化療藥物敏感性有一定影響，其機(jī)制可能為上皮鈣黏素作為一種經(jīng)典的細(xì)胞間連接蛋白，被認(rèn)為是上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的標(biāo)志，而在上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化介導(dǎo)的化療耐藥相關(guān)機(jī)制中涉及的Notch 信號(hào)傳導(dǎo)途徑可能在癌細(xì)胞的化療耐藥中起重要作用[22-24]。目前Notch-1 已被證實(shí)在腫瘤組織中的活性與乳腺癌患者對(duì)他莫昔芬的耐藥性有關(guān)[25]。此外，也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在前列腺癌細(xì)胞系中降低上皮鈣黏素的表達(dá)時(shí)細(xì)胞遷移能力增加，增強(qiáng)了對(duì)紫杉醇的耐藥性，而提高上皮鈣黏素的表達(dá)則降低了癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇的耐藥性[26]，提示上皮鈣黏素的表達(dá)與化療效果密切相關(guān)。目前，上皮鈣黏素對(duì)癌細(xì)胞耐藥機(jī)制的影響尚不明確，仍有待進(jìn)一步深入的研究。此外，上皮鈣黏素的表達(dá)是否與特定藥物的敏感性存在關(guān)系也有待研究。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)NCT 前乳腺癌組織中NM23和上皮鈣黏素的表達(dá)與NCT 效果存在顯著相關(guān)性，未來(lái)將需要進(jìn)一步探討其具體的作用機(jī)制及對(duì)各類藥物的敏感性關(guān)系，將有助于指導(dǎo)臨床決策的制訂。