非布司他片放大制備工藝及體外一致性評價

張 宇，李寶霞

（1. 遼寧中醫藥大學附屬醫院藥劑科，遼寧 沈陽 110032； 2. 山西藥科職業學院，山西 太原 030031）

非布司他為黃嘌呤氧化酶抑制劑，臨床用于治療高尿酸血癥伴痛風，在降低血尿酸的同時還能改善血脂代謝異常，安全性較好［1-2］。非布司他片由日本武田北美制藥公司研發，最早上市于美國［3］。體內外相關性研究可預測仿制制劑與原研制劑相似的體內藥代動力學行為，降低研發成本，縮短研發周期［4-5］。本研究中開發了非布司他片的放大制備工藝，并依據原國家食品藥品監督管理總局發布的相關指導原則［6-7］，開展了與原研制劑的體外一致性評價。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

708-DS型全自動溶出儀（美國安捷倫公司）；Waters e2695型高效液相色譜儀（美國Waters公司），配有Waters e2695 型四元梯度泵、Waters 2489 型紫外檢測器、自動進樣器；MSA225s-100-DA型分析天平（德國Sartrious公司，精度為0.01 mg）；WBF - 60 型多功能流化床（重慶英格造粒包衣技術有限公司）；ZLZ450型真空整粒機（武漢恒達昌機械設備有限公司）；HF300 型方錐混合機、GZPL40C型高速壓片機（南京邦斯特制藥設備有限公司）；BGB - 75C 型包衣機（宜春萬申制藥機械有限公司）。

1.2 試藥

非布司他對照品（批號為101278-202003，純度為100.0%），十二烷基硫酸鈉（分析純，批號為20197656），均購自中國食品藥品檢定研究院；非布司他片（商品名Feburic < 菲布力 > ，安斯泰來制藥 < 中國 > 有限公司，批號為8155，規格為每片40 mg）；非布司他自研制劑（批號分別為2012404，2012405，2012406，規格為每片40 mg）；非布司他原料藥［國內某制藥廠，晶型A，粒徑（D90）<50 μm，批號為20198234］；乳糖（200 目，德國美劑樂公司，批號為6397269）；PC - 10 型預膠化淀粉（日本旭化成株式會社，批號為5RJ071）；羥丙基纖維素（日本曹達株式會社，批號為NCD-2993）；SD-711 型交聯羧甲基纖維素鈉（DuPont Nutrition USA Inc.，批號為3201092c34）；硬脂酸鎂（曲阜市天利藥用輔料有限公司，批號為20182324）；胃溶型薄膜包衣預混劑（上海卡樂康包衣技術有限公司，批號02F690004 - CN）；乙腈（色譜純，德國Merck公司，批號為HBN0911）；冰醋酸（分析純，國藥集團化學試劑有限公司，批號為1000208）；水為純化水。

2 方法與結果

2.1 非布司他片放大制備工藝

原輔料過篩：將非布司他微粉化，測得合適的粒徑范圍，其他輔料過40目篩，按處方量稱取，備用。

物料混合：配制6%羥丙基纖維素溶液，依次將乳糖、非布司他、預膠化淀粉加入混合機中混合30 min，得預混料。

流化床制粒：將預混料加入流化床，參數設置為，進風溫度（80±10）℃，蠕動泵轉速80～120 r/min，風量750～1 200 m3/ h。制粒完畢后，待干燥失重不超過2.0%，停止干燥。干燥結束后繼續抖袋60 s，收料完畢后，采用固定真空整粒機整粒，篩網孔徑為2.0 mm。

總混：外加輔料交聯羧甲基纖維素鈉，混合10 min；加入硬脂酸鎂，混合5 min。

壓片：采用直徑為9.0 mm 的圓形雙弧淺凹沖對總混顆粒壓片。控制片芯硬度為40～70 N。

包衣：稱取處方量胃溶型薄膜包衣預混劑適量，緩慢加入純化水中，攪拌均勻（≥45 min），配制12%的包衣液。打開包衣機，包衣前將素片放入包衣鍋內，調整噴槍角度，設置主機轉速為2 r/min，預熱磨片1～3 min，取100片素片，稱定質量，設置參數為，進風溫度（60±10）℃，主機轉速2～5 r/ min，蠕動泵轉速30～600 r/ min，開槍壓力0.20～0.40 MPa，霧化壓力0.20～0.40 MPa，開始包衣，包衣增重約3%，停止噴漿，將主機轉速調至2 r/ min，干燥15～25 min，停止加熱，待冷卻至出風溫度不超過35 ℃，出料，即得非布司他片包衣片。

2.2 溶出介質確定

測定非布司他在不同pH（pH=1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，5.2，5.4，5.6，5.8，6.0，6.2，6.4，6.6，6.8，7.0，8.0）條件下的溶解度，結果非布司他為pH-溶解度依賴藥物，幾乎不溶于水和酸性溶液，溶解度隨pH 的增大而逐漸增大。為建立具備區分能力的溶出曲線，測定非布司他在水及0.1%，0.3%，0.4%，0.5%，0.6%十二烷基硫酸鈉溶液中的溶解度，各pH 條件平行測定3次，結果非布司他在0.5%十二烷基硫酸鈉溶液中能達到漏槽條件。故最終確定溶出介質為0.5%十二烷基硫酸鈉溶液。

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件

色譜柱：ACE Excel 3 C18-AR柱（50 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈 -pH 3.0 醋酸溶液（50∶50，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：317 nm；柱溫：40 ℃；進樣量：20 μL。

2.3.2 溶液制備

取非布司他對照品適量，精密稱定，加乙腈-水溶液（60∶40，V/V）溶解，稀釋成每1 mL 含非布司他40 μg的對照品溶液。取樣品，加0.5% 十二烷基硫酸鈉溶液900 mL，按2020 年版《中國藥典（四部）》0931 溶出度與釋放度測定法第二法（槳法）測定，設置轉速為50 r/min，分別取溶出10，15，20，30，45，60 min 時的溶液適量，即時補充相同體積0.5% 十二烷基硫酸鈉溶液，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。按處方量稱取不含主藥的輔料，混勻，取細粉300 mg，加0.5%十二烷基硫酸鈉溶液900 mL，超聲（功率為600 W，頻率為40 kHz）10 min，濾過，即得空白輔料溶液。

2.3.3 方法學考察

專屬性試驗：分別吸取2.3.2 項下3 種溶液及0.5%十二烷基硫酸鈉溶液、乙腈-水溶液（60∶40，V/V），按2.3.1項下色譜條件進樣測定。結果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相同位置處有相應色譜峰，其他溶劑均無干擾，表明方法專屬性良好。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖1.Reference solution 2.Test solution 3.0.5% Sodium dodecyl sulfate solution 4.Acetonitrile aqueous solution（60∶40，V/V）5.Blank excipient solutionFig.1 HPLC chromatograms

線性關系考察：取非布司他對照品適量，精密稱定，加乙腈 - 水溶液（60∶40，V/V）溶解，稀釋成每1 mL約含非布司他0.1 mg 的線性試驗貯備液。精密量取線性試驗貯備液1，2，5，8，10，15 mL，置100 mL容量瓶中，加乙腈 - 水溶液（60∶40，V/V）稀釋至刻度，搖勻，得10%，20%，50%，80%，100%，150%系列溶液。精密量取上述溶液各20 μL，按2.3.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，以質量濃度（X，μg/mL）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=1 577 459.94X+38 998.32（r=0.999 9，n=6）。結果表明，非布司他質量濃度在0.99～14.85 μg/mL 范圍內與峰面積線性關系良好。

定量限與檢測限確定：取線性關系考察項下線性試驗貯備液適量，逐級稀釋，按2.3.1 項下色譜條件進樣測定 6 次，分別以信噪比（S/N）的 10 倍和 3 倍為定量限和檢測限。結果定量限和檢測限分別為2.59 ng/mL和0.78 ng/mL。

日間精密度試驗：取2.3.2項下溶出60 min 時的供試品溶液適量，由不同分析人員在不同時間采用不同溶出儀，按2.3.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算溶出度。結果平均溶出量為97.73%，RSD為0.93%（n=6）。

穩定性試驗：取供試品溶液適量，分別于室溫下放置 2，4，6，8，12，24 h 時按 2.3.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果的RSD小于1.00%（n= 6），且未發現其他新的未知峰，表明供試品溶液在室溫下放置24 h穩定性良好。

加樣回收試驗：取非布司他對照品20，40，48 mg，精密稱定，分別置200 mL容量瓶中，按處方比例加入空白輔料230 mg，加乙腈 - 水溶液（60∶40，V/V）適量，超聲使溶解，稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液5 mL，置100 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為低、中、高3個濃度水平的加樣回收試驗溶液，每個濃度水平平行制備3 份。按2.3.1 項下色譜條件進樣測定，結果見表1。

表1 非布司他加樣回收試驗結果（n=9）Tab.1 Results of the recovery test of Febuxostat Tablets（n=9）

2.4 體外一致性評價

取3 批自研制劑與1 批原研制劑，各12 片，溶出介質為0.5%十二烷基硫酸鈉溶液，按2020 年版《中國藥典（四部）》0931 溶出度與釋放度測定法第二法（槳法）測定，比較溶出曲線。采用相似因子（f2）法評價相似性，結果見表2。可見，3批自研制劑的f2最低為76，均大于50，表明相似性較好。

表2 自研制劑與原研制劑相似性評價結果Tab.2 Results of similarity evaluation between the homemade preparation and the original preparation

3 討論

3.1 流化床制粒

流化床制粒可在一臺設備內一步完成混合、制粒、干燥、包衣，具有簡便、機械化程度高的特點。處方中選擇的輔料適合流化床的工藝特點，混合工序能保證顆粒的均勻性，表明本工藝具有良好的可行性，適用于放大生產。物料溫度是制粒的關鍵步驟，溫度過高，霧化后的液滴來不及黏附在粉末上，即被干燥成細粉和細顆粒；溫度過低，粉末表面的浸膏來不及干燥，甚至形成團塊，出現“塌床”現象。本研究中進風溫度為（80±10）℃，蠕動泵轉速為80～120 r/ min，可合理控制物料溫度。原料藥難溶于水，為增加其溶出度，同時擬合原研制劑的溶出行為，將非布司他原料藥經微粉化處理，得到 ≤ 25 μm、≤ 50 μm、≤ 75 μm、≤ 100 μm 4 個粒徑的原料藥，分別制成片劑后考察其溶出行為。結果該溶出方法能區分這4種不同粒徑原料藥生產的制劑。

3.2 溶出度測定方法

本研究中采用高效液相色譜法測定溶出度，同紫外光譜法相比，其測定靈敏，結果準確，更能保證f2測定的準確性。方法學考察結果表明，本方法專屬、靈敏、準確，符合2020年版《中國藥典（四部）》中相關要求［8］。

美國食品藥物管理局發布的橙皮書中收載的溶出度方法，以pH 6.0 磷酸鹽緩沖液為介質，采用槳法，以50 r/min的轉速進行測定。在該條件下，自研制劑于30 min時溶出超過80%，不具備區分能力。采用紫外光譜法，以0.5%十二烷基硫酸鈉溶液為溶出介質［9］，區分能力仍然不夠。非布司他為BCSⅡ類低溶解性-高滲透性藥物，溶出速率是藥物吸收的限速步驟［10］，樣品投入溶出杯后迅速崩解成細小顆粒。故確定了2.2項下的溶出介質，非布司他滿足漏槽條件，且與腸道生理條件下的pH相近，能合理模擬體內的溶解環境。

以不同品牌十二烷基硫酸鈉為溶劑時，溶出度測定結果存在差異［11］，故其品牌不能隨意更換，且批號應盡量一致。按本試驗條件測定原研制劑的溶出度，結果在45～60 min 時溶出量達85%，且曲線上無拐點和突釋，可用于區分溶出能力。

3.3 原料藥選擇

原料藥的晶型和粒度嚴重影響藥品的溶出，故研究原料藥的晶型十分必要。經調研，本品具有6 種晶型［9］，但不同晶型的表觀溶解度和飽和溶解度無顯著差異，且晶型不影響本品的有效性。故可使用適合工業化生產的晶型A。

3.4 方法評價

本研究中采用流化床工藝制備非布司他片，其與原研制劑的f2均大于50，體外溶出曲線相似，適用于非布司他片的制備。