大組織切片技術(shù)應(yīng)用于前列腺癌診斷中的有效性評(píng)價(jià)

張秀娟

前列腺癌（prostatic cancer，PCa）的臨床發(fā)病率較高，且常規(guī)療法為根治手術(shù)。術(shù)后正確判斷病理結(jié)果可指導(dǎo)術(shù)后療法，合理決定是否需要進(jìn)行內(nèi)分泌輔助治療[1]。現(xiàn)階段，常規(guī)切片是較常用的標(biāo)本處理技術(shù)，其將切除后的前列腺組織切成20余個(gè)大小接近的組織塊，而后進(jìn)行病理檢查。但是此種方法會(huì)破壞前列腺組織的完整度，加之癌細(xì)胞在整個(gè)前列腺組織中不等分散，可能會(huì)因多個(gè)切片處理影響癌細(xì)胞的原本生理結(jié)構(gòu)。為此，大組織切片技術(shù)備受關(guān)注，其采取完整切面分層次取材的方法可以確保組織完整[2]。有研究證實(shí)[2]，大組織切片可以高效檢出手術(shù)切緣和微小病灶。為此，本研究回顧性分析2018年8月—2020年5月院內(nèi)診治的79例PCa患者，評(píng)價(jià)大組織切片的診斷效用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年8月—2020年5月院內(nèi)診治的PCa患者79例。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核后開(kāi)展；所有患者以及家屬對(duì)研究知情而且完全同意。回顧分析患者基本資料，依據(jù)不同切片方法分為A組41例，年齡42～75歲，平均（58.32±2.75）歲；體質(zhì)量指數(shù)21～26 kg/m2，平均（23.52±1.32）kg/m2。B組38例，年齡41～77歲，平均（58.85±2.66）歲；體質(zhì)量指數(shù)22～28 kg/m2，平均（23.84±1.82）kg/m2。兩組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。研究開(kāi)始前已通過(guò)法律文件取得了患者的授權(quán)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）經(jīng)病理切片明確診斷為PCa；（2）術(shù)前接受全身骨掃描、腹部B超與MRI等檢查；（3）于我院接受治療與護(hù)理，且留存的臨床資料較為完整、詳細(xì)；（4）患者依從性較高。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）癌細(xì)胞骨骼轉(zhuǎn)移患者；（2）癌細(xì)胞內(nèi)臟轉(zhuǎn)移患者；（3）伴有精神類疾病或語(yǔ)言功能障礙，無(wú)法進(jìn)行充分溝通患者。

1.2 方法

儀器選擇電化學(xué)發(fā)光儀、數(shù)字病理掃描儀、全自動(dòng)組織脫水機(jī)、大組織切片機(jī)、大組織包埋盒和蓋玻片等、生物色標(biāo)劑、超低溫冰箱、室溫石蠟切片柜。B組采用常規(guī)組織切片法：將組織離體后放置在甲醛溶液（4%）內(nèi)固定24 h，切取輸尿管、前列腺四周和精囊組織。以病灶穿刺位置為準(zhǔn)，于冠狀位取材后編號(hào)。進(jìn)行脫水-浸蠟包埋-切片染色（HE染色）-封片處理。A組采用大組織切片法：離體標(biāo)本左側(cè)染色綠色、右側(cè)染色黃色，并進(jìn)行吹干。將大組織充分浸泡在甲醛溶液（4%）中有效固定。固定24 h后從前列腺尖部開(kāi)始取材（厚度約為0.4 cm），至基底冠狀面，編號(hào)。用大組織網(wǎng)狀包埋盒（6.5 cm）平鋪并展開(kāi)組織，而后按壓和固定。再次浸泡至甲醛溶液（4%）中，固定標(biāo)本中央處組織，時(shí)間同為24 h，而后脫水-透明-浸蠟處理。操作時(shí)選擇二次包埋法，充分冷凍后融蠟并修正。勻速平推切片，厚度5 μm，保證切片完整。載玻片撈片的規(guī)格為2.5 cm×6.0 cm×8.0 cm，取得切片樣本后，進(jìn)行HE染色后封片。借助數(shù)字病理掃描系統(tǒng)掃描圖像，而后經(jīng)NDP-Scan軟件掃描焦點(diǎn)以及區(qū)域，區(qū)間為40～50倍，保存信息。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

記錄兩組的手術(shù)時(shí)間與前列腺體積、病理特征，其中Gleason分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為：1級(jí)（1分），腺體互相分離且排列密集，邊界清晰；2級(jí)（2分），腫瘤侵襲周邊組織，腺體稀松排列，存在異型性；3級(jí)（3分），腺體大小不一，浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，且形態(tài)無(wú)規(guī)則，腺體間不融合，管腔清晰；4級(jí)（4分），腺體融合呈篩孔狀，或細(xì)胞呈環(huán)形排列，細(xì)胞內(nèi)不存在腺腔；5級(jí)（5分），低分化癌表現(xiàn)，腺管不明顯，呈細(xì)胞條索單雙排排列或?qū)嵭约?xì)胞巢排列[3]。TNM病理分期標(biāo)準(zhǔn)：PT2a為癌細(xì)胞在器官內(nèi)；PT3b為癌細(xì)胞侵襲前列腺包膜外；PT4為癌細(xì)胞侵襲精囊外組織。最后，通過(guò)對(duì)比圖像情況，分析病灶邊緣與微小病灶情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)處理經(jīng)由SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件完成，計(jì)量資料以（±s）表示，經(jīng)t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組手術(shù)時(shí)間與前列腺體積數(shù)值比較

A組的手術(shù)時(shí)間接近B組，前列腺體積略小于B組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組的手術(shù)時(shí)間與前列腺體積數(shù)值比較（±s）

表1 兩組的手術(shù)時(shí)間與前列腺體積數(shù)值比較（±s）

組別 例數(shù) 手術(shù)時(shí)間（min） 前列腺體積（cm3）A組 41 138．52±20．32 45．26±2．65 B組 38 139．85±20．49 46．01±2．77 t值 - 0．290 1．230 P值 - 0．773 0．223

2.2 兩組病理特征比較

A組的病灶切緣陽(yáng)性率和微小病灶檢出率顯著高于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。兩組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率、侵犯精囊率與術(shù)后Gleason評(píng)分提升率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。A組術(shù)后Gleason評(píng)分為（7.75±1.02）分，B組為（7.86±1.09）分，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.463，P=0.644）。見(jiàn)表2。

表2 兩組病理特征比較[例（%）]

2.3 兩組TNM病理分期情況比較

兩組TNM病理分期情況比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表3。

表3 患者TNM病理分期情況比較[例（%）]

2.4 兩組切緣陽(yáng)性和微小病灶圖像比較

圖像顯示A組可多層次且全面地顯示病變類型，且能準(zhǔn)確采集圖像和定位病灶，進(jìn)而高效分辨切緣陽(yáng)性部位以及微小病灶。圖1A為A組前列腺切緣圖像，箭頭處為切緣陽(yáng)性部位，HE×100；圖1B為B組前列腺切緣圖像，箭頭處為切緣陰性部位，HE×40。見(jiàn)圖1所示。

圖1 兩組前列腺切緣比較圖像

圖2C為A組微小病灶部位，HE×100；圖2D為B組微小病灶部位，其較難被發(fā)現(xiàn)，HE×200。見(jiàn)圖2所示。

圖2 兩組微小病灶比較圖像

3 討論

根治手術(shù)是前列腺癌的主要術(shù)式，術(shù)后病理診斷能夠確定腫瘤性質(zhì)，進(jìn)而決定是否繼續(xù)采取內(nèi)分泌治療，且能作為手術(shù)效果的評(píng)價(jià)指標(biāo)，判斷治療預(yù)后。常規(guī)組織切片是較為常用的檢查技術(shù)，臨床研究提示[5]，常規(guī)前列腺根治手術(shù)的標(biāo)本病理檢查中，需要將前列腺切成細(xì)碎的小塊狀，一般情況下，應(yīng)切開(kāi)40～60塊，部分檢查中要求切開(kāi)的塊數(shù)更多。臨床處置程序較為繁瑣，且病理診斷醫(yī)師的閱片工作量也較大，會(huì)對(duì)檢測(cè)造成較為嚴(yán)重的影響。且這種檢測(cè)方式會(huì)對(duì)取得的前列腺組織造成一定破壞，無(wú)法充分體現(xiàn)前列腺組織的完整情況，對(duì)診斷效果造成影響。而大組織切片技術(shù)在制片時(shí)要求在最大程度上保留前列腺組織，臨床研究提示[6]，與常規(guī)切片技術(shù)的質(zhì)量相比，大組織切片技術(shù)的質(zhì)量較好。從厚度與染色兩個(gè)角度進(jìn)行比較后顯示，大組織切片的制片質(zhì)量與常規(guī)制片的質(zhì)量無(wú)顯著差異。但大組織切片技術(shù)無(wú)需將取樣組織切碎，能在最大程度上保持取樣組織的完整性，且臨床中所需的制片數(shù)量相對(duì)較少，能在一定程度上減少制片的工作量。病理師在進(jìn)行診斷時(shí)也能對(duì)組織進(jìn)行全面的觀察，從而提升診斷準(zhǔn)確率。臨床研究提示[4]，大組織切片技術(shù)可以充分保留前列腺每個(gè)區(qū)域和各個(gè)切緣的腫瘤侵犯情況，具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

本研究結(jié)果顯示，兩種切片技術(shù)的手術(shù)時(shí)間、前列腺體積比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。提示兩種技術(shù)的診斷價(jià)值比較排除了手術(shù)和腺體體積等因素，嚴(yán)謹(jǐn)性更強(qiáng)。能夠基本維持的切片結(jié)構(gòu)的相對(duì)完整，且具有較清晰形態(tài)。但B組對(duì)于切緣的取材局限性較明顯，無(wú)法明確顯示腫瘤與切緣之間的距離，從而導(dǎo)致無(wú)法提高切緣陽(yáng)性率，也無(wú)法充分預(yù)防假陰性情況的發(fā)生[7-9]。A組病灶切緣陽(yáng)性率和微小病灶檢出率顯著高于B組（P＜0.05）。且A組對(duì)于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率、侵犯精囊率與術(shù)后Gleason評(píng)分提升率與B組接近（P＞0.05），A兩組TNM病理分期情況比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究結(jié)果提示A、B兩組均能明確PCa的病理分級(jí)，有效評(píng)估術(shù)后風(fēng)險(xiǎn)，且對(duì)于病灶的定位更為精準(zhǔn)。此外，大組織切片技術(shù)能夠保留腺體形態(tài)的完整性，臨床醫(yī)生通過(guò)學(xué)習(xí)病理標(biāo)本特征可以有效判斷前列腺形狀與大小的個(gè)體差異，評(píng)估手術(shù)是否造成前列腺組織殘留或是腸壁組織粘連等，進(jìn)而制訂下一階段治療方案[10-11]。PCa的主要特點(diǎn)是多灶性，影像學(xué)技術(shù)能夠在術(shù)前判斷腫瘤位置和大小，但其精準(zhǔn)性有限[12]。

臨床研究提示，大組織切片可以對(duì)比于術(shù)前影像學(xué)特征，進(jìn)而判斷腫瘤位置和影像學(xué)之間的關(guān)聯(lián)性，可提升閱片技術(shù)，有效提高術(shù)前診斷準(zhǔn)確率[13]。更為重要的是，臨床醫(yī)生和病理科醫(yī)生能夠根據(jù)大組織切片技術(shù)所得出的結(jié)果制訂下一步治療方案，改進(jìn)手術(shù)流程。為保證大組織切片技術(shù)的診斷效果，在操作期間需要注意以下問(wèn)題[14]：（1）按時(shí)更換試劑，由于切片制作所選用的試劑具有揮發(fā)性，會(huì)使其濃度降低，進(jìn)而影響切片制作的準(zhǔn)確度，因此需要及時(shí)更換試劑。（2）前列腺組織塊需要平整性按壓，取材時(shí)要保證切面平整，分片固定時(shí)也要適度按壓，防止卷曲。包埋時(shí)要保證組織塊平鋪，必須保證切片平整。（3）操作熟練，切片期間需要操作者熟知切片機(jī)的操作原理，精細(xì)調(diào)節(jié)切片機(jī)參數(shù)，確保參數(shù)合理，且能及時(shí)發(fā)現(xiàn)切片問(wèn)題，并立即解決，保證切片質(zhì)量。（4）部分臨床研究提示[15]，在開(kāi)始取樣前，需注意對(duì)患者進(jìn)行心理護(hù)理，保證患者取樣時(shí)的心理情緒處于穩(wěn)定的狀態(tài)。避免因患者的情緒問(wèn)題而對(duì)取樣造成影響。院內(nèi)可對(duì)護(hù)理人員進(jìn)行適當(dāng)?shù)呐嘤?xùn)。

綜上所述，大組織切片可以作為PCa病理診斷的首選技術(shù)，其可判斷前列腺切緣的實(shí)際陽(yáng)性率，高效檢出微小病灶，診斷精準(zhǔn)度更高，可以在病理診斷中廣泛性使用。