HER2、STRT1及PTEN在膀胱尿路上皮細胞癌中的表達及對預后的影響

蔣仕春，賀 凱，胡 登，王耀東

膀胱癌為泌尿系統中最常見的惡性腫瘤，具有多中心性、反復發作且復發率高的特點。臨床認為膀胱癌發生發展是在多因素共同作用下導致的[1]。膀胱癌主要包括尿路上皮細胞癌、鱗狀細胞癌、腺細胞癌等，其中膀胱尿路上皮細胞癌最為常見，據統計其占膀胱癌的90%以上[2]。膀胱癌主要分為非肌層浸潤型膀胱癌和肌層浸潤型膀胱癌，治療方法以手術切除為主。非肌層浸潤性膀胱癌主要是通過經尿道腫瘤電切術、藥物灌注化療等方法進行治療，而肌層浸潤性膀胱癌多呈結節狀生長，早期易發生遠處轉移，預后差，臨床認為根治性膀胱切除術為有效治療方法[3]。但術后易出現復發，且復發后的尿路上皮細胞癌可能較原發腫瘤惡性程度更高。因此，若能找出與膀胱癌預后密切相關的基因及腫瘤標志物等靶點，則可以通過靶向治療，為改善膀胱尿路上皮細胞癌的預后提供新的思路[4]。因此，本文對人表皮生長因子受體2(HER2)、沉默信息調節因子1(SIRT1)及人第10號染色體缺失的磷酸酶與張力蛋白同源物基因(PTEN)在膀胱尿路上皮細胞癌患者中的表達及對預后的影響進行研究，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年2月—2019年3月我院收治的124例膀胱尿路上皮細胞癌作為研究對象，將癌組織標本設為研究組，并選取距癌組織3 cm處的正常組織作為對照組。124例中男76例，女48例；年齡35～79(57.42±6.78)歲。根據WHO病理分級標準分為Ⅰ級44例，Ⅱ級48例，Ⅲ級32例；根據UICC-TNM臨床分期標準分為Ta～T1期74例，T2～T4期50例。①納入標準：患者均符合膀胱尿路上皮細胞癌診斷標準[5]，且經組織病理學、CT等檢查證實；均在我院醫治且臨床資料齊全，無缺損或丟失；本研究經醫院醫學倫理委員會批準，且患者及家屬均知情并簽署知情同意書。②排除標準：已發生遠處轉移者；患有其他惡性腫瘤者；患有精神障礙性疾病，無法配合治療者；存在心、肝、腎等嚴重病變者；中途失訪者。

1.2方法 所有患者行經尿道膀胱腫瘤鈥激光剜除術。收集患者組織標本，進行石蠟包埋和切片處理待檢。應用免疫組織化學染色檢查，組織切片使用二甲苯、乙醇進行脫蠟、脫水處理后，將切片浸于3%過氧化氫中20 min，封閉其內源性過氧化物酶活性。高壓枸櫞酸鹽抗原修復，溫水清洗后使用PBS清洗3次，每次5 min，同時在其中滴加正常山羊血清用以阻斷非特異性的結合，置入37 ℃孵育箱30 min。添加一抗羊抗人SIRT1多克隆抗體(1∶400)、鼠抗人PTEN單克隆抗體(1∶400)、鼠抗人HER2/neu單克隆抗體(1∶400)，4 ℃條件下過夜，PBS再次清洗，滴加生物素標記兔抗羊IgG及PTEN、HER2二抗，同樣置入37 ℃孵育箱10 min，在第3次PBS清洗后，滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉素卵白素工作液孵育10 min，使用二氨基聯苯胺進行熒光顯色，蘇木精復染，脫水、干燥后使用中性樹脂封片，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3觀察指標 ①觀察兩組HER2、SIRT1及PTEN表達情況。觀察染色情況，PTEN陽性表達于細胞質或細胞核內呈橘黃色或棕黃色，SIRT1陽性表達于細胞核或細胞質內呈不均質棕色顆粒，HER2陽性表達于細胞膜呈棕黃色或棕褐色顆粒。當癌細胞出現染色，或其他染色明顯強于背景色時定義為陽性，選擇不同視野進行全面觀察，每個視野中細胞應不低于200個，觀察完成后計算每個視野中陽性細胞率。陽性細胞率<5%為陰性，5%～50%為弱陽性，>50%為強陽性，其中弱陽性、強陽性均計為陽性[6]。②分析影響膀胱尿路上皮細胞癌患者預后的獨立危險因素。所有患者治療后以復查、上門、電話等方式對患者進行為期1年的隨訪，記錄是否發生遠處轉移、復發、死亡等情況。根據隨訪結果進行分組，發生遠處轉移、復發或死亡患者為預后不良，反之則為預后良好。

2 結果

2.1HER2、SIRT1及PTEN表達情況 研究組HER2、SIRT1的陽性表達率高于對照組，PTEN陽性表達率低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 膀胱尿路上皮細胞癌組織和癌旁正常組織兩組HER2、SIRT1及PTEN表達情況比較[例(%)]

2.2影響膀胱尿路上皮細胞癌患者預后的單因素分析 通過整理患者隨訪資料可知，預后良好72例，預后不良52例。預后良好患者的年齡、性別、吸煙情況與預后不良患者比較差異無統計學意義(P>0.05)；預后良好患者的家族史、WHO病理分級、UICC-TNM臨床分期、HER2、SIRT1及PTEN表達情況與預后不良患者比較差異有統計學意義(P<0.05，P<0.01)。見表2。

表2 影響膀胱尿路上皮細胞癌患者預后的單因素分析(例)

2.3影響膀胱尿路上皮細胞癌患者預后的多因素分析 將上述單因素分析中差異有統計學意義的相關因素納入多因素Logistic回歸分析，結果顯示，有家族史、WHO病理分級Ⅱ～Ⅲ級、UICC-TNM臨床分期T2～T4期、HER2表達陽性、SIRT1表達陽性及PTEN表達陰性均為影響膀胱尿路上皮細胞癌患者預后的獨立危險因素(P<0.05，P<0.01)。見表3。

3 討論

膀胱癌的發病機制一直以來都是醫學上關注的重點，有相關研究認為，膀胱癌是由癌基因活化、抑癌基因失活、細胞微環境變化、基因遺傳學突變等多因素共同作用引起的[7-8]。而膀胱癌作為泌尿系統中常見的惡性腫瘤，90%為尿路上皮細胞癌[9]。尿路上皮主要是指腎盂、輸尿管、膀胱、尿道表面附著的一層移行上皮，而發生于上皮相關的腫瘤便為尿路上皮細胞癌[10-12]。臨床對尿路上皮細胞癌的治療以手術為主，但手術對患者創傷較大，且并發癥多，不利于患者預后恢復[13-15]。隨著醫學上對腫瘤發病機制的不斷認知，臨床認為通過靶向藥物治療腫瘤，可有效調節細胞的增殖、凋亡，致使腫瘤細胞死亡，而不會波及正常組織細胞[16-18]。臨床上靶向藥物在某些腫瘤治療方面已取得一定的效果，但其在膀胱癌的治療方面進行臨床研究較為困難，主要是由于膀胱癌的發生、侵襲和轉移機制較為復雜，導致臨床仍無理想標志物在膀胱癌的診斷、復發、預后等方面進行評估，因此臨床若能找到與膀胱癌密切相關的標志物，或許可以為臨床治療尿路上皮細胞癌提供新的手段，以延長患者的生存時間[19-22]。

因此，本文對HER2、SIRT1及PTEN在膀胱尿路上皮細胞癌中的表達水平進行研究，發現尿路上皮細胞癌組織中HER2、SIRT1的陽性表達率高于癌旁正常組織，而PTEN陽性表達率低于癌旁正常組織，這與既往文獻的研究結果相似[23]。癌組織PTEN陽性表達率低，是由于PTEN屬于高度保守的抑癌基因，參與調節細胞的正常增殖和發育，可作用于細胞周期蛋白對細胞轉化進行抑制，并調控細胞周期，促進細胞凋亡，從而抑制腫瘤發生、發展、侵襲和轉移[24]。因此有臨床研究認為，檢測PTEN蛋白的表達可作為評估膀胱癌發生及預后的客觀指標之一[25]。而尿路上皮細胞癌組織中HER2、SIRT1陽性表達率高，是由于HER2為原癌基因，具有內源性酪氨酸激酶活性，其自身活化后作用于特定的信號蛋白，可激活細胞信號傳導途徑，從而促進癌細胞增殖、分化，同時加速正常細胞轉化[26]。SIRT1蛋白通過調控組蛋白、非組蛋白以及修飾DNA等參與腫瘤的生長、增殖、侵襲、耐藥等多種病理過程；同時SIRT1蛋白能夠通過增高氮氧化合物水平，增加腫瘤血管數目，加強腫瘤細胞營養，促進腫瘤細胞增殖[27]。由此可看出HER2、SIRT1及PTEN均與膀胱尿路上皮癌的發生密切相關，可作為膀胱癌診斷和監測的指標。同時本研究還對影響膀胱尿路上皮細胞癌患者預后的危險因素進行分析，發現HER2、SIRT1及PTEN均為影響膀胱尿路上皮細胞癌預后的獨立危險因素。

綜上所述，HER2、SIRT1在膀胱尿路上皮細胞癌組織中的表達升高，PTEN表達降低，均為影響膀胱尿路上皮細胞癌預后的獨立危險因素，可為患者的預后評估及臨床治療提供新的參考。